国家自然科学基金(39800125)
- 作品数：7 被引量：60H指数：3
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- 应用多重PCR法对广东地区HBV进行基因型(A-F)分型被引量：24
- 2002年
- 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)基因型(A-F)多重PCR分型方法,并利用该方法对广东地区HBV PCR阳性血清进行分型。方法将GenBank中114例HBV 全序列进行比较分析,找出每种基因型相对于其他五种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出六对分别针对A-F基因型的特异引物。利用这六对引物建立HBV的多重PCR分型法。结果多重PCR与以前用PCR-限制温度长度多态型分析法的分型结果一致。对广州周边地区HBV携带者的初步分型结果显示,主要为B型和C型,分别占45.00%和38.75%,另外还有16.25%的D型。结论用多重PCR分型法准确易行,灵敏性高,便于推广应用。
- 杨洁戴琳郭亚兵杨守昌王燕军骆抗先
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型多重聚合酶链反应
- 人β2微球蛋白基因在大肠杆菌中的稳定、高效表达被引量：3
- 2002年
- 目的应用基因工程技术表达人β2微球蛋白基因(β2m)。方法采用逆转录PCR技术,从Raji细胞株获得β2m的基因序列;将其与改建后的质粒pBV220连接,转染大肠杆菌BL21,经42℃诱导后,以SDS-PAGE鉴定阳性表达克隆,产物经过柱纯化。结果获得了编码成熟β2m的全长cDNA和高效、稳定表达人β2m的大肠杆菌克隆。结论成功地在大肠杆菌中获得了β2m基因的高效表达,为制备主要组织相容性复合体(MHC)-四聚复合物系统奠定了基础。
- 周最明郭亚兵王战会骆抗先侯金林
- 关键词：Β2微球蛋白基因表达大肠杆菌
- HBV基因型(A～F)多引物对PCR分型法的初步建立
- 2001年
- 杨洁郭亚兵骆抗先戴琳闫丽侯金林
- 关键词：遗传型引物PCRHBV
- 重型乙型肝炎e抗原阴性患者前C变异株及其体外翻译被引量：26
- 2001年
- 目的 探讨 ＨＢｅＡｇ阴性的慢性重型乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区变异及前Ｃ区 Ｔ１８６２突变体对ｅ抗原合成和分泌影响。方法选取９例重型乙型病毒性肝炎患者，用ＰＣＲ方法扩增血清中ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因区，并克隆后测序和序列分析；构建ＨＢＶ前Ｃ区Ｔ１８６２位点突变体表达质粒ｐＧＥＭＴ，经体外翻译比较野毒株和变异株的表达产物。结果ＨＢＶ前Ｃ区有３个位点变异使氨基酸序列改变，Ａ１８９６、 Ａ１８９９和Ｔ１８６２；Ａ１８９９并不单独出现。前Ｃ区Ｔ１８６２突变并不阻止ＨＢＶ ｅ前体蛋白体外合成。同时，有２例并未检测到前Ｃ区的变异。结论 部分重型肝炎ＨＢｅＡｇ阴性原因除了Ｔ１８９６变异外，还存在Ｔ１８６２变异。前Ｃ１８６２突变对ＨＢＶｅ抗原前体蛋白合成并无影响，可能ｅ抗原前体在分泌过程中受阻。
- 郭亚兵侯金林骆抗先冯筱榕
- 关键词：E抗原前C区变异
- 乙型肝炎病毒X蛋白对NFкB启动子和增强子反式激活作用
- 2001年
- 郭亚兵杨继雄杨洁冯筱榕梁炽森
- 关键词：乙型肝炎增强子反式激活作用
- RFLP基因分型在动态监测乙型肝炎病毒基因变异中的应用被引量：6
- 2001年
- 目的探讨基因分型结合克隆后测序方法在动态监测ＨＢＶ基因变异中的价值。方法分析１例重型肝炎患者发 病后血清，用 ＰＣＲ扩增血清中 ＨＢＶ ｐｒｅＳ／Ｓ基因片段并克隆，２份标本各随机挑取 ３个阳性克隆进行测序；同时用 ＲＦＬＰ方法分析２份血清中ＨＢＶ毒株的基因型。结果ＰＦＬＰ分析２份血清为Ｂ基因型为主的Ｂ／Ｃ基因型混合毒株感 染；６个克隆中仅１株为Ｃ基因型。比较２份血清ＨＢＶ ｐｒｅＳ／Ｓ克隆核酸序列，有１７０个点位的差异，剔除Ｃ基因型株 后，仅５４个位点差异。结论克隆后测序结合ＲＦＬＰ对ＨＢＶ基因型测定有助于更准确地对ＨＢＶ基因变异进行动态分 析。
- 丁红兵郭亚兵戴琳阎丽彭吉力周福元
- 关键词：基因分型乙型肝炎病毒基因变异乙型肝炎RFLP
- 杆状病毒载体介导的氯霉素乙酰转移酶基因在HepG2中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 重组杆状病毒AcMNPV载体并观察其在人肝癌细胞株中的基因转移效率及表达。方法 用PCR方法获得氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因及CMV与核因子（NFκB）启动子和增强子序列，并插入AcMNPV中，用同源重组方法获得CAT重组杆状病毒。分别感染昆虫细胞Sf5和人肝癌细胞株HepG2或HepG2.2.15细胞，测定CAT表达相对活性。结果 由CMV启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2或HepG2.2.15细胞均可表达CAT，而NFκB启动子驱动的CAT重组杆状病毒在HepG2细胞中CAT表达低，而在有HBV表达的HepG2.2.15细胞中有较高的CAT表达活性。结论 重组杆状病毒能在人肝癌细胞中表达外源基因，而且成功构建了HBV感染细胞特异性表达的杆状病毒载体。
- 郭亚兵戴琳冯筱榕杨洁周福元
- 关键词：杆状病毒载体HEPG2细胞系乙型肝炎病毒
