江苏省“135”工程重点医学人才基金(RC2002024)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：南京军区南京总医院更多>>
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- Id3-EGFP融合基因表达载体的构建及其在人肺癌细胞A549中的表达被引量：5
- 2006年
- 目的构建人分化抑制因子3(Id3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因表达载体pEGFP/Id3,使Id3-EGFP融合蛋白在人肺癌细胞A549中得到表达。方法扩增并克隆人Id3cDNA,构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3。用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞,使Id3-EGFP融合蛋白在A549细胞得到表达。结果经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,Id3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游,获得融合基因表达载体pEGFP/Id3。利用脂质体转染技术将pEGFP和pEGFP/Id3转入A549细胞,24h后,在激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP的细胞发出绿色荧光,流式细胞术分析表明,转染48h时EGFP阳性表达细胞率最高,分别可达65·40%和60·50%。pEGFP/Id3转染的A549细胞S期细胞和G2期细胞比例均明显高于pEGFP转染细胞组和未转染细胞组,表明Id3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖。结论真核表达载体pEGFP/Id3的成功构建及其在A549细胞中的表达,为研究Id3的细胞定位表达及Id3在细胞生长调控中的作用奠定了实验基础。
- 李晓军汪萍贾丽马百坤夏欣一虞伟武建国
- 关键词：分化抑制因子肺肿瘤重组融合蛋白
