国家自然科学基金(30972585)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 小分子多肽类佐剂最新研究进展被引量：1
- 2018年
- 免疫佐剂是指与抗原一起或先于抗原注入机体后,可增强机体对该抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质.最近发现,某些氨基酸残基数小于50的小分子多肽具有增强机体免疫活性的能力.这些小分子多肽类佐剂因其安全性好、生物相容性好、易合成、纯度高、制备成本低等优点逐渐引起人们的关注.此文综述了小分子多肽类佐剂疫苗的研究现状,并对小分子多肽类佐剂的发展未来作了展望.
- 罗雅煊马永平
- 关键词：肽类佐剂免疫疫苗
- "初免-吸引"免疫策略的研究进展
- 2021年
- "初免-吸引"免疫策略是指经胃肠外疫苗初次免疫后,通过局部使用T细胞引诱剂,在病原体进入的主要部位如生殖道、气道和肠道等招募和建立组织驻留记忆性T细胞,可应用到病毒或细菌等感染黏膜引起的疾病中,建立长期黏膜免疫。此文就该免疫策略在病毒、细菌、衣原体及螺旋体感染性疾病领域的研究进展进行综述,以期为疫苗研发提供新的思路。
- 沈妍希(综述)马永平
- 关键词：免疫记忆性T细胞疫苗
- 大肠不耐热肠毒素B亚单位佐剂活性相关蛋白的筛选被引量：2
- 2016年
- 目的通过对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位相互作用蛋白的分析,探讨LTB佐剂活性的分子机制。方法纯化的LTB蛋白和生理盐水分别处理RAW 264.7细胞,pulldown实验分离与LTB有相互作用的蛋白分子,质谱鉴定这些相互作用蛋白;免疫荧光和Western blot分析验证与LTB相互作用蛋白在细胞内的相互作用。结果通过质谱鉴定了25种可能与LTB存在相互作用的蛋白分子,并构建了其相互作用网络图,筛选出可能与LTB免疫调节作用相关的蛋白分子;免疫荧光结果显示神经节苷脂能阻断LTB进入RAW 264.7细胞内,LTB在细胞内与GM130存在相互作用,而Vimentin在生理状态下与LTB不存在相互作用;LTB处理RAW 264.7细胞12 h后,β-actin表达上调,Hspd1表达无变化。结论 LTB佐剂活性的发挥是通过与免疫细胞表面GM1结合,引起内吞,并以小泡的形式到达高尔基体,通过高尔基体的加工。最终通过与Jup结合进而作用于TCF/LEF,引起Bcl-2、IL-6、Runx3等基因表达的变化,发挥促进T细胞和B细胞的增殖分化及活化、分泌细胞因子及免疫球蛋白的作用。
- 刘林周慧聪王秋娟陈思静马永平
- 关键词：RAW相互作用蛋白佐剂内吞
- 重叠延伸PCR法合成EV71 VP1-LTB融合基因及其原核表达被引量：2
- 2011年
- 目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)质粒DNA为模板,PCR扩增ltb基因,将vp1基因与ltb基因连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pBEX,构建重组质粒pBEX-VP1-LTB,转化E.coliB1221(DE3)进行表达,SDS-PAGE及W estern blotting分析其表达。电转法将重组质粒转入双歧杆菌。结果合成的vp1基因全长891 bp,测序结果与预期相符,重组表达质粒pBEX-VP1-LTB经PCR及双酶切鉴定,表明构建正确;目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中获得了表达,Western bloting分析结果表明该蛋白具有与EV71 VP1抗体的反应原性;电转法成功将重组质粒转入双歧杆菌。结论应用重叠延伸PCR技术成功构建了EV71 VP1-LTB融合表达质粒,并在E.coliBL21(DE3)中获得有生物学功能的VP1表达产物,重组质粒双歧杆菌转化及VP1-LTB融合蛋白的表达研究,为研制EV71分子内佐剂疫苗打下了基础。
- 李江马永平李世彬贺志良姜柯安
- 关键词：重叠延伸PCR
- 产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位可有效诱导和增强对肠道病毒71型的黏膜免疫应答被引量：2
- 2014年
- 目的研究产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的免疫原性。评价肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1联合LTB的鼻腔免疫效果。方法构建重组质粒pET32a-LTB,表达的6×His-LTB融合蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化后免疫新西兰大白兔制备抗血清,ELISA检测抗血清效价。用纯化的EV71 VP1、LTB联合EV71 VP1、生理盐水分别经鼻腔免疫BALB/c小鼠,收集血清、肺和小肠黏膜冲洗液,采用间接ELISA检测IgG和分泌性IgA(sIgA)。结果已成功构建重组质粒pET32a-LTB。表达的6×His-LTB融合蛋白主要以包涵体形式表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,免疫兔所制备的抗血清效价为1∶125 000。EV71 VP1联合LTB组的小鼠特异性IgG和sIgA水平较EV71 VP1单独免疫组和对照组有明显增高。结论在E.coli BL21(DE3)中成功表达了6×His-LTB融合蛋白,纯化的融合蛋白具有良好的免疫活性和佐剂活性。通过滴鼻免疫,LTB可有效增强特异性血清抗体反应,诱导黏膜免疫应答。
- 谢婷婷胡琼文马永平
- 关键词：肠道病毒71型免疫原性黏膜免疫
