浙江省重点科技创新团队项目(2011R50002)
- 作品数：11 被引量：41H指数：3
- 相关作者：鲍宗必杨亦文张治国任其龙夏黎明更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江工业大学教育部更多>>
- 发文基金：浙江省重点科技创新团队项目国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学理学更多>>
- 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ基因的高表达被引量：2
- 2014年
- 纤维二糖水解酶II(CBH II)是纤维素酶的重要组分之一,对纤维素酶的水解性能有着重大影响,而里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶制剂中纤维二糖水解酶II明显不足,为了优化其酶系结构,采用了基因重组技术构建CBH II高产菌株:将里氏木霉CBH II基因置于里氏木霉强启动子Pcbh1(及其信号肽)和终止子Tcbh1之间,并进一步以pCAMBIA1300为载体骨架,构建成含潮霉素B抗性标记的重组质粒pCAMBIA1300-hph-PsCT。以里氏木霉ZU-02为宿主,采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒转入宿主分生孢子。以潮霉素B为抗性标记初筛到324个阳性转化子,进一步通过复筛,在以微晶纤维素为唯一碳源的筛选培养基上获得8个生长较快的优良转化子。在摇瓶条件下,分别对8个转化子进行产酶试验,培养48 h时,纤维二糖水解酶活力最高可达18.24 U·mL-1,是出发菌株的2.51倍。本结果对于里氏木霉纤维素酶的定向进化、提高其对纤维素的协同糖化效率具有重要意义。
- 方浩夏黎明
- 关键词：里氏木霉纤维素酶
- 基于5-酮基-D-葡萄糖酸生物制造L-(+)-酒石酸的研究进展被引量：2
- 2013年
- 利用生物质可再生资源为原料生产L-(+)-酒石酸符合当前国际的需求。从生产方式、发酵底物及工艺方面综述了L-(+)-酒石酸的研究情况,并指出糖质发酵法生物制造L-(+)-酒石酸的潜在优势,讨论了其中存在的问题、反应的机理以及前体物质的研究情况,并展望了今后的研究方向。
- 袁建锋吴绵斌林建平岑沛霖
- 关键词：生物制造
- 疏水活性炭负载的镍基加氢催化剂的抗酸性能被引量：2
- 2016年
- 为了解决镍基催化剂在酸性环境下易被酸腐蚀的问题,分别以金属Fe、Mn和Mo作为助剂,以经Na BH4处理的活性炭作为疏水性载体,采用等体积浸渍法制备了一系列镍基催化剂,并将其应用于苯酐、乙酰丙酸、丁烯二酸酐、丁二酸酐和偏苯三酸酐等酸性介质的加氢反应中,以研究金属助剂和疏水性载体对镍基催化剂抗酸性能和催化性能的影响。结果表明,与Raney Ni相比,Fe和Ni含量分别为5%(wt)和15%(wt)、疏水性活性炭负载的催化剂(5Fe-15Ni/AC-Na BH4)具有非常突出的催化活性和抗酸稳定性,在酸性反应环境中重复使用多次仍表现了很好的催化性能。这归因于载体的疏水表面能够阻止产生的水与催化剂表面的接触,使金属活性中心氢离子的活度降低,从而减少了金属镍的腐蚀。此外,XRD和TEM表征结果证明催化剂中形成了Fe-Ni合金,这有利于Ni在载体表面的分散,也有效地延缓了催化剂的失活。
- 魏作君侯雅欣刘迎新顾运江
- 关键词：镍基催化剂加氢
- GshF在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：1
- 2013年
- 谷胱甘肽是参与细胞活动的最普遍的非蛋白巯基化合物,是机体内重要的活性三肽,因其抗氧化作用而在医药、食品、化妆品等行业有着广泛的应用,生物合成是制备谷胱甘肽的主要方法,一直引起广泛关注。近年来发现的双功能酶GshF可同时催化谷胱甘肽生物合成的两步反应,有望提高酶法催化产谷胱甘肽的效率,但该酶的酶学性质尚未得到充分研究。克隆了来自Streptococcus thermophilus的双功能酶基因gshF,并用大肠杆菌表达,研究表明,重组菌于37℃培养4 h后经0.1 mmol/L IPTG诱导,然后在30℃下表达,胞内酶活可达44 U/L。表达产物经破胞、离心、亲和层析等步骤分离纯化后,进一步考察了其相关酶学性质,结果表明,该酶最适pH为8.0,最适温度为37℃,还研究了其最适pH和温度下的稳定性。最终通过重组菌酶法催化合成谷胱甘肽得到的最高产量为2.11g/L。这些对该酶在谷胱甘肽生物合成上的应用有重要的借鉴作用。
- 陈永露吴绵斌林建平杨立荣岑沛霖
- 关键词：谷胱甘肽大肠杆菌酶学性质
- 复合催化剂在油酸豆甾醇酯合成中的应用被引量：2
- 2015年
- 以油酸和豆甾醇为原料,研究了以硫酸氢钾-金属氧化物为组合的复合催化剂在酯化合成中的应用。首先,通过与其他硫酸盐的酯化效果进行比较,筛选出KHSO4是适用于酯化合成中高效且安全的催化剂,并将其和不同的金属氧化物进行组合作为复合催化剂进一步探究酯化效果。通过实验结果比较,得到KHSO4-Zn O作催化剂的酯化率最高。然后,将KHSO4-Zn O作为复合催化剂,针对催化剂用量、反应温度、反应时间、酸醇摩尔比等因素进行考察,探究油酸和豆甾醇的最佳酯化条件。得到最佳工艺条件为:在通高纯氮气条件下,选用3.0%KHSO4+1.0%Zn O(以豆甾醇的质量分数计)为催化剂,油酸和豆甾醇的摩尔比为1.8:1,反应的温度为150℃,反应的时间为7 h,酯化率达到92.17%。本工艺利用KHSO4-Zn O作为复合催化剂,得到较高的酯化率,实现了一条合成油酸豆甾醇酯的新工艺路线。
- 张硕杨亦文邢华斌苏宝根张治国鲍宗必杨启炜任其龙
- 关键词：复合催化剂硫酸氢钾酯化合成甾醇酯
- 甜味剂三氯蔗糖合成法的最新进展被引量：14
- 2016年
- 随着生活质量的提高,人们对于高质量且高安全的食品添加剂的需求日益增长,三氯蔗糖是最理想的人工甜味剂,具有非营养、低热量、高甜度、高安全性和风味好等特点,所以三氯蔗糖合成法的研究十分必要。本文主要介绍了三氯蔗糖各合成法的国内外最新研究进展,并综合评价了各合成法,认为全基团保护法合成步骤太过繁锁;单基团保护法中的乙酸酐法和原乙酸三甲酯法仍存在一定缺陷,但有机锡法合成步骤少,有机锡可回收再利用,是目前最适宜于工业化的合成方法;而酶法,特别是蔗糖法,由于其环保和高选择性而被认为是未来最有潜力的合成法;同时一些新的合成法,如三氯蔗糖-6-酯的酶水解等,均值得进一步的研究。本文最后展望了未来的研究趋势并提出发展建议。
- 吴红英鲍宗必张治国任其龙邢华斌杨亦文
- 关键词：三氯蔗糖甜味剂
- 模拟移动床色谱分离二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯被引量：1
- 2018年
- 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸是两种非常重要的ω-3多不饱和脂肪酸,广泛用于膳食补充剂和药品,同时它们的生理作用并不完全相同,因此分离制备它们的高纯度单体十分必要。首先以聚苯乙烯/二乙烯基苯(PS/DVB)聚合物为固定相,在液相色谱上分离二十碳五烯酸乙酯(EPA-EE)和二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE),考察了流动相、填料粒径、温度对分离的影响。然后采用粒径20μm、孔径10 nm的PS/DVB填料装填了8根150 mm×10 mm的半制备色谱柱,测定了半制备柱装填的均一性。最后尝试在模拟移动床(SMB)色谱上分离EPA-EE和DHA-EE的混合物,探究了Ⅱ区和Ⅲ区的流量、进料流量、进料浓度对分离的影响,结果表明SMB制备的EPA-EE和DHA-EE的相对纯度分别为91.6%和93.6%,回收率分别为97.0%和91.6%,固定相生产率为5.97 g/(L·h),溶剂消耗为1.52 L/g。SMB制备EPA-EE和DHA-EE具有较大的应用潜力。
- 董青李敏杨亦文鲍宗必杨启炜张治国任其龙
- 关键词：液相色谱模拟移动床色谱
- EPA和DHA的分离研究进展被引量：10
- 2019年
- 目前,EPA和DHA主要的生产来源是深海鱼油,但其含量较低不能直接满足食品和制药业的需求,富集提纯EPA和DHA尤为重要。简述了EPA和DHA的分离研究进展,主要从富集和高纯度单体的制备两个方面展开,系统介绍了低温结晶法、尿素包合法、分子蒸馏法、超临界流体萃取法、银离子络合法、脂肪酶法、高效液相色谱法、超临界流体色谱法、模拟移动床色谱法的分离原理以及近年的研究成果,并比较了各种方法的优缺点。最后对EPA和DHA提纯分离发展前景提出了展望,两种或多种分离方法组合是发展趋势,脂肪酶法和模拟移动床色谱法值得进一步深入研究。
- 董青李敏杨亦文鲍宗必杨启炜张治国任其龙
- 关键词：EPADHA鱼油多不饱和脂肪酸
- 一种新型内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达被引量：3
- 2016年
- 刺糙青霉(Penicillium echinulatum)可产生一种耐热、耐碱的新型内切-β-葡聚糖酶(EGL1),具有重要的工业应用价值。鉴于野生型刺糙青霉的产酶水平低,将该菌的内切-β-葡聚糖酶基因经过密码子优化后,在里氏木霉(Trichoderma reesei)中进行重组与表达,采用里氏木霉强启动子Pcbh1(纤维二糖水解酶Ⅰ)及其信号肽,以pCAMBIA1300为载体骨架构建重组质粒pCB-PET,并采用根瘤农杆菌介导转化技术将重组质粒pCB-PET导入里氏木霉的分生孢子中,在潮霉素抗性平板上筛选获得5个优良的重组转化子。将5个转化子重复传代培养10个批次后,分别提取染色体DNA进行PCR验证,均可检测到目的基因Egl1n(密码子优化后的Egl1)条带,说明该基因已稳定地整合到里氏木霉基因组中。采用SDS-PAGE蛋白电泳对转化子培养液进行检测,获得了与目的基因表达产物相符的蛋白条带(约41 kDa),表明Egl1n已在重组里氏木霉中成功实现了胞外表达。重组转化子在30℃,摇瓶转速200 r×min^(-1)条件下培养48 h,取发酵上清液在pH 8.0,60℃条件下,测得内切-β-葡聚糖酶活力为382.6 U×mL^(-1),是出发菌株的22.5倍。酶学性质研究结果表明:该酶耐热性能较好,在70℃以下性能稳定,其最适催化温度为60℃;该酶在pH 5.0~10.5稳定性较好、具有明显的催化活性,其最适pH为8.0,属于碱性纤维素酶。从而成功地实现了刺糙青霉内切-β-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与胞外表达,有关研究结果在里氏木霉纤维素酶的定向进化及其工业化应用中具有重要的促进作用。
- 夏颖赵杰夏黎明
- 关键词：碱性纤维素酶里氏木霉基因重组
- 重组里氏木霉产漆酶及其对染料金橙Ⅱ的脱色被引量：2
- 2014年
- 对已有的10个重组里氏木霉转化子进行产酶试验,从中筛选到一个高产转化子,摇瓶发酵96h,漆酶活力可以达到8.85IU/mL.SDS-PAGE结果表明：该重组漆酶的相对分子质量约为68 000.重组漆酶的最适温度为65℃,该酶具有较好的耐热性能,经70℃处理60min后残余相对酶活维持在70%以上;最适pH为2.2,在pH为2.6-4.2的条件下具有良好的稳定性.采用发酵粗酶液对100mg/L的偶氮染料金橙Ⅱ进行脱色试验,对影响脱色效果的主要因子进行研究.结果表明,在温度为50℃、pH为3.5、介体HOBT用量为2mmol/L、漆酶用量为0.2IU/mL的条件下作用5h,金橙Ⅱ的脱色率可以达到90.6%.
- 陶亮亮赵杰夏黎明
- 关键词：漆酶发酵偶氮染料脱色
