卫生部科学研究基金(20122167)
- 作品数：14 被引量：40H指数：4
- 相关作者：张锦华张继红佟海侠陆春伟李爱敏更多>>
- 相关机构：中国医科大学烟台市毓璜顶医院辽宁大学更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Caspase-8和DR5在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2006年
- 目的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无诱导凋亡作用。大多数神经母细胞瘤细胞株对TRAIL的诱导凋亡作用耐受与其Caspase8表达缺失有关,也与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。该文主要探讨Caspase8及TRAIL受体DR5的表达在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞株SKNDZ凋亡中的作用及其发生机制。方法应用RTPCR方法检测IFNγ作用前后SKNDZ细胞Caspase8的表达;应用WesternBlot方法检测化疗药作用前后SKNDZ细胞DR5的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、IFNγ+TRAIL、化疗药+TRAIL及化疗药+IFNγ+TRAIL对SKNDZ细胞生长及凋亡的影响。结果SKNDZ细胞不表达Caspase8,IFNγ作用后的SKNDZ细胞Caspase8表达明显增加。对照组未检测到DR5蛋白表达,而阿霉素和依托泊苷处理后检测到DR5蛋白表达。表达Caspase8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感,而同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感。阿霉素/依托泊苷+IFNγ+TRAIL组早期凋亡率为:(17.9±3.6)%、(14.8±3.3)%,与IFNγ+TRAIL组(3.9±1.2)%比较,差异有显著性(F=26.233,P<0.01)。结论同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞恢复了对TRAIL的敏感性,Caspase8和DR5在TRAIL诱导SKNDZ细胞凋亡中起着十分关键的作用。
- 佟海侠张继红马力陆春伟张锦华
- 关键词：凋亡TRAILCASPASE-8DR5
- IFN-γ增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤的诱导凋亡作用被引量：1
- 2009年
- 目的探讨细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y(SY5Y)细胞的作用及γ-干扰素(IFN-γ)对其抗瘤活性的影响。方法应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测IFN-γ作用前后半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase8)mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞毒类药物[阿霉素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)]及IFN-γ联合细胞毒类药物对SY5Y细胞的诱导凋亡作用;应用比色法测定Caspase8相对活性。结果SY5Y细胞不表达Caspase8,经IFN-γ作用后Caspase8mRNA表达明显增加。SY5Y细胞对阿霉素相对敏感,对TNF-α和TRAIL不敏感;经IFN-γ预处理后,表达Caspase8的SY5Y细胞对三种细胞毒类药物的诱导凋亡作用敏感并伴随Caspase8活性增高,此作用可被Caspase8抑制剂所阻断。结论IFN-γ通过上调Caspase8表达而增强细胞毒类药物对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用。
- 马瑀王秀丽佟海侠陆春伟张继红张锦华
- 关键词：神经母细胞瘤细胞毒类药物Γ-干扰素CASPASE8
- trkA基因表达在神经母细胞瘤合成及分泌血管内皮生长因子中作用的研究
- 2003年
- 目的 :观察trkA基因在神经母细胞瘤 (NB)中表达对NB合成、分泌血管内皮生长因子 (VEGF)的影响。方法 :采用脂质体转染法建立trkA基因高表达的NB细胞系 ;RT PCR、免疫细胞化学及ELISA技术检测转染前后细胞中VEGF量的变化。结果 :trkA转染后细胞中的VEGFmRNA及VEGF蛋白表达较亲代SY5Y细胞均明显下降 (P均 <0 0 1) ;细胞培养上清液中的VEGF含量也明显下降 (P <0 0 1)。结论 :trkA基因的高表达有效抑制NB细胞合成、分泌VEGF 。
- 张继红张锦华李波
- 关键词：血管内皮生长因子神经母细胞瘤
- K252a对表达TrkB的NB细胞耐药性的影响被引量：5
- 2005年
- 目的:使用全反式维甲酸(ATRA)诱导SH-SY5YNB(SY5Y)细胞的TrkB表达,加入BDNF激活TrkB/BDNF信号传导通路使TrkB磷酸化,然后用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断该通路,观察NB细胞对化疗药物—顺铂(CDDP)敏感性的变化。方法:用ATRA诱导SY5Y细胞的TrkB高表达后,用BDNF、CDDP和TrkB信号传导通路的特异性阻断剂—K252a处理,MTT法检测细胞的存活率变化;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率;应用免疫组化法检测细胞磷酸化TrkB(p-TrkB)的表达水平。结果:ATRA能特异性诱导TrkB的表达,加入BDNF后可激活TrkB/BDNF信号传导通路并能引起TrkB的自动磷酸化;K252a能够阻断TrkB的磷酸化和TrkB/BDNF信号传导通路;经CDDP处理的SY5Y细胞的存活率下降、凋亡率上升。结论:阻断TrkB/BDNF信号传导通路可提高共表达TrkB/BDNF的NB细胞的化疗敏感性。因此,应用TrkB的抑制剂治疗NB有望提高该病的临床治愈率。
- 张继红李爱敏滕绍春张可仞中国医科大学第二临床学院小儿外科张锦华
- 关键词：神经母细胞瘤化疗耐药K252A
- TrkA基因的表达抑制神经母细胞瘤血管生成的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的:探讨TrkA基因通过抑制神经母细胞瘤(NB)血管生成而阻止其生长、转移的可行性。方法:常规培养对照组SY5Y细胞、TrkA基因高表达的实验组细胞(SY5Y-TrkA)和表达载体基因的空载体组细胞(SY5Y-Vec);比较三组细胞的裸鼠皮下致瘤性;通过RT-PCR、免疫组织化学、微血管面积计算检测并比较三种细胞所致的肿瘤瘤体内血管生成情况。结果:SY5Y-TrkA细胞在裸鼠皮下的致瘤性和其所致肿瘤的血管生成能力明显下降。肿瘤终体积:对照组1.736±0.485cm3,空载体组1.803±0.751cm3,实验组0.3945±0.015cm3(P<0.01);对照组与实验组相比,血管内皮生长因子(VEGF)的表达差别显著(P<0.01);微血管密度(MVD):对照组27.21±14.58,空载体组27.76±14.15,实验组4.08±4.72(P<0.01)。结论:TrkA基因能有效抑制神经母细胞瘤的血管生成和肿瘤生长,为应用基因抗血管治疗神经母细胞瘤提供理论依据。
- 张继红张锦华刘戈飞
- 关键词：血管生成神经母细胞瘤
- TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中Caspase 8活性的变化被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡过程中Caspase 8活性的变化。方法:应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase 8抑制剂(zIETD-FMK)+TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用:应用比色法测定Caspase 8相对活性;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果:CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感,存在剂量依赖性。随TRAIL作用时间的延长,Caspase 8活性逐步升高,于作用16h达高峰;不同浓度TRAIL处理组Caspase 8相对活性随浓度增加而递增。zIETD-FMK能阻断Caspase 8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论:TRAIL通过Caspase 8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase 8活性增高。
- 陆春伟佟海侠张继红张锦华
- 关键词：神经母细胞瘤凋亡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
- Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用被引量：7
- 2007年
- 目的探讨Caspase 8在TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株CHP 212细胞凋亡中的作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、Caspase 8抑制剂(zIETD-FMK)+TRAIL对CHP 212细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Cas-pase 8相对活性;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果CHP 212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感,存在时间和剂量依赖性;随TRAIL作用时间的延长,Caspase 8活性逐步升高,于作用16h达高峰。zI-ETD-FMK能阻断Caspase 8的活化而抑制TRAIL对CHP 212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase 8信号传导通路诱导CHP 212细胞凋亡并伴随Caspase 8活性增高。
- 陆春伟佟海侠张继红张锦华
- 关键词：神经母细胞瘤凋亡CASPASE肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
- TrkA基因在神经母细胞瘤增殖及形态分化中的作用被引量：3
- 2003年
- 目的 观察酪氨酸激酶受体A(TrkA)基因抑制神经母细胞瘤生长、诱导其分化的可行性。方法 利用脂质体转染法将TrkA cDNA重组质粒转染入人神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞系中,应用RT-PCR技术鉴定转染后基因的表达,比较转染前后SH-SY5Y细胞的增殖率及细胞的分化程度。结果 成功转染TrkA基因并在SH-SY5Y细胞中稳定表达,转染后SH-SY5Y细胞的增殖率较亲代细胞明显下降(P<0.01),细胞的分化程度增加(P<0.01)。结论 TrkA基因的高表达能有效抑制神经母细胞瘤的生长,并能促其向良性分化,为神经母细胞瘤的基因治疗提供理论依据。
- 张继红张锦华陈冬松宓真李爱敏
- 关键词：神经母细胞瘤增殖形态分化
- 去甲基药、化疗药及TRAIL联合诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究
- 2007年
- 目的探讨去甲基药5-氮杂胞苷、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及化疗药联合诱导神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y(SY5Y)凋亡的作用及其发生机制。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测5-氮杂胞苷作用前后SY5Y细胞caspase-8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测TRAIL、5-氮杂胞苷+TRAIL、5-氮杂胞苷+caspase-8抑制剂zIETD-FMK+TRAIL及5-氮杂胞苷+化疗药+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响。结果SY5Y细胞不表达caspase-8,5-氮杂胞苷作用1、3、5、7d的SY5Y细胞caspase-8表达逐渐增加。SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经5-氮杂胞苷诱导表达caspase-8的SY5Y细胞对TRAIL敏感;化疗药可增强SY5Y细胞对TRAIL的敏感性。结论5-氮杂胞苷可通过上调SY5Y细胞caspase-8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,化疗药可进一步增强TRAIL对SY5Y细胞的诱导凋亡作用。
- 张继红佟海侠陆春伟李爱敏张锦华
- 关键词：5-氮杂胞苷化疗药TRAILCASPASE-8
- IFNγ对TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的调节作用被引量：7
- 2005年
- 目的:探讨IFNγ(γ-干扰素)对TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡的影响及其发生机制。方法:应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL及IFNγ+Caspase8抑制剂+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果:SY5Y细胞不表达Caspase8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase8表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感,且与TRAIL浓度有关,Caspase8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用;透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论:IFNγ可逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,其发生机制可能是IFNγ通过上调SY5Y细胞Caspase8表达而实现的。
- 佟海侠张锦华陆春伟张继红
- 关键词：凋亡CASPASETRAIL
