国家自然科学基金(30570971)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：费俭陆顺元王津津沈春玲张良梁更多>>
- 相关机构：中国科学院上海生命科学研究院上海交通大学医学院附属瑞金医院同济大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”科技支撑计划上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用四倍体补偿技术建立血友病A小鼠模型被引量：5
- 2010年
- 目的建立凝血因子Ⅷ（factorⅧ，FⅧ）基因剔除小鼠模型，为研究治疗血友病A提供理想的动物模型。方法应用ET克隆、胚胎干细胞同源重组和四倍体囊胚补偿技术，将小鼠F阿基因第16～19外显子靶向剔除，并应用PCR、逆转录PCR（reverse transcriptase-PCR，RT-PCR）及免疫组织化学染色技术，从DNA、RNA、蛋白水平检测FⅧ基因的转录及表达情况。通过检测激活的部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）和FⅧ的促凝活性（FⅧ：C）进行FⅧ基因剔除小鼠表型鉴定。结果PCR检测在剔除小鼠中未扩增出FⅧ基因的条带；RT—PCR分析显示剔除区域该基因mRNA转录本缺失；免疫组织化学染色显示在雄性半合子（-／y）和雌性纯合子（-／-）小鼠的肝脏中凝血因子Ⅷ表达缺失；FⅧ：C和APTT检测结果显示雌性杂合子（＋／-）FⅧ活性为野生型（wt）的80％，其APTT值较wt略有延长，而-／y和-／-小鼠的FⅧ的活性仅为wt小鼠的8％和10％，且APTT值均大于120s。结论FⅧ基因剔除小鼠具有与人类血友病A患者相似的表型，它的建立将促进我国血友病A治疗新技术的发展。
- 匡颖王津津卢希彬陆顺元张良梁沈春玲费俭王铸钢
- 关键词：血友病A基因剔除
- 四倍体补偿技术的建立及其应用被引量：2
- 2008年
- 常规基因剔除小鼠的获得主要是利用ES细胞的全能性先获得嵌合体小鼠,再利用ES细胞的生殖系传递能力,通过嵌合体与野生型小鼠的交配获得杂合子小鼠.而四倍体补偿技术则可绕过嵌合体小鼠阶段,直接获得基因修饰杂合子小鼠.利用电融合技术和Piezoelectric microinjection显微注射技术建立了四倍体补偿技术,小鼠四倍体胚胎的获得率(电融合率)为(93.01±1.37)%,经体外培养囊胚形成率为(82.49±2.08)%.通过显微注射方法将2种129品系小鼠来源的ES细胞(CJ7和SCR012)注射到四倍体囊胚腔中,获得了完全ES细胞来源的小鼠,ES鼠的获得率分别为2.7%和8.3%.经微卫星DNA检测,成体小鼠的10个被检测组织均为129小鼠来源的.同时,也利用基因修饰的ES细胞进行了研究,获得了2种基因修饰的完全ES细胞来源的杂合子小鼠,部分小鼠具有繁殖能力,经繁育已获得了纯合子,其中凝血因子Ⅷ基因敲除小鼠获得了预期的血友病小鼠表型.上述结果说明四倍体补偿技术可应用于基因修饰小鼠的制备.
- 匡颖孙霞邓涛卢希彬孙瑞林王铸钢费俭
- 关键词：基因修饰
