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siRNA-CyclinE对家蚕细胞增殖的影响被引量：4: 2013年; 【目的】研究小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞CyclinE基因表达及细胞周期的影响。【方法】合成针对CyclinE基因1 252和568位点的siRNA片段,并利用脂质体法转染家蚕BmN细胞,于共聚焦荧光显微镜下观察转染情况;应用实时荧光定量PCR法检测CyclinE mRNA的表达情况,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】siRNA对家蚕BmN细胞的转染效率达80%左右。转染1252-siRNA-CyclinE和568-siRNA-CyclinE 48h后,分别使家蚕BmN细胞CyclinE mRNA表达量降低了68%和90%;流式细胞仪检测结果显示,2个转染组G0/G1期细胞比例显著增大,S期和G2/M期细胞比例显著减小。【结论】在家蚕BmN细胞中导入针对CyclinE的siRNA,可有效抑制CyclinE基因的表达,使细胞周期阻滞于G1期,进而抑制细胞增殖。; 刘丽华沈卫德李兵王文兵; 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞周期

RNA干扰对家蚕细胞系中乙酰胆碱酯酶基因表达的抑制: 2012年; 为研究RNAi技术对家蚕细胞系BmN中2种乙酰胆碱酯酶基因的干扰,通过细胞转染不同干扰位点片段的方法筛选出干扰效果显著的siRNA片段。结果表明:Bm-ace1-1526和Bm-ace2-1132分别使BmN细胞ace1、ace2基因表达降低到对照的37.4%和33.4%,这2个位点分别对2种基因干扰显著。; 丛恒戴俊曹亚琪沈卫德李兵; 关键词：RNA干扰家蚕细胞乙酰胆碱酯酶基因表达 ACE基因

5龄家蚕乙酰胆碱酯酶基因的转录水平: 2012年; 乙酰胆碱酯酶(AChE)是有机磷和氨基甲酸酯类物质的作用靶酶。通过半定量PCR的方法测定家蚕4龄眠到上蔟期的2种ace基因的表达量,并测定该时期家蚕的AChE活性,以及5龄3 d各组织中2种ace基因的表达量。结果表明,ace1基因在4龄眠到5龄第2天,第6天到第8天的转录表达量较多,第3天到第5天表达量相对较少;ace2基因在4龄眠期转录表达量多,进入5龄后,转录表达量减少且隔天转录表达量大致相同。在5龄中期和后期,AChE各具有1个峰值。5龄3 d,ace1基因在脂肪体、脑、卵巢中的转录表达量多,在其他组织中表达量较少,其中在血液中最少,ace2基因在脂肪体、精巢、卵巢中转录表达量多,在其他组织中表达量较少。; 曹雅琪王彬彬顾芝亚张霞沈卫德李兵; 关键词：家蚕乙酰胆碱酯酶基因转录

BmNPV对家蚕BmN细胞周期及周期蛋白基因表达水平的影响被引量：2: 2014年; 【目的】研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedroviruses,BmNPV)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞周期及细胞周期蛋白基因转录水平的影响。【方法】用BmNPV感染家蚕BmN细胞,分别在病毒感染后的不同时间(12,24,36,48h),应用实时荧光定量PCR方法检测细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB、CyclinE的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。【结果】BmNPV感染24h后,BmN细胞出现明显感染症状,变为圆形;48h后细胞核内出现多角体。随着感染时间的延长,CyclinA、CyclinB、CyclinE基因表达量均下降,分别在感染12,24,36h后,表达量降低为0。流式细胞仪检测结果显示,在BmNPV感染后24h左右,抑制于G2/M期的BmN细胞达到68%。【结论】BmNPV感染家蚕BmN细胞后,导致CyclinB、CyclinE基因表达量降低,对CyclinA基因表达量的影响较小;同时BmNPV感染可以将BmN细胞发育抑制于G2/M期。; 刘丽华沈卫德李兵王文兵; 关键词：BMNPV 细胞周期

辛硫磷对家蚕细胞周期蛋白家族基因转录活性的影响被引量：1: 2015年; 【目的】探讨经辛硫磷诱导后,家蚕细胞周期蛋白家族基因(CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinE)在5龄幼虫各种组织中的转录活性,为进一步研究有机磷农药对家蚕的损伤机制提供参考。【方法】采用实时荧光定量PCR方法,以饲喂清水浸泡过的桑叶为对照,分析家蚕5龄3d幼虫喂食辛硫磷(4μg/mL)浸泡桑叶24h后,脑、脂肪体、中肠、丝腺、马氏管、精巢及卵巢等7种组织中4种细胞周期蛋白家族基因的转录水平。【结果】与对照组相比,辛硫磷诱导24h后,CyclinA、CyclinB、CyclinB3在各组织中均表达上调,CyclinE在中肠及脂肪体中表达显著下调,在精巢与马氏管中无明显变化,在其他组织中则表达上调。【结论】辛硫磷诱导24h后,家蚕组织中CyclinA、CyclinB及CyclinB3基因表达上调,这可能是家蚕对磷胁迫的响应;CyclinE在中肠及脂肪体中表达显著下调,这与这2种器官是家蚕重要的解毒代谢器官有关。; 刘丽华沈卫德李兵; 关键词：家蚕辛硫磷细胞周期蛋白

家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-9的鉴定与表达分析: 2011年; 羧酸酯酶是一个多功能超家族酶类,为研究羧酸酯酶基因在家蚕Bombyxmori组织中的功能,利用5′/3′RACE和RT-PCR方法克隆了一个家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-9,其GenBank登录号为EU523534。该基因含有一个1 680 bp的ORF,编码559个氨基酸。BmCarE-9预测的分子量64.2 kD,等电点7.13,结构分析表明BmCarE-9存在一个类似的催化三联体,其中两个残基发生改变。利用实时荧光定量PCR方法研究了该基因在家蚕5龄第3天幼虫不同组织以及在5龄期各日龄幼虫丝腺组织中的表达水平。结果表明,该基因在丝腺中特异性高表达,且主要在中部和后部丝腺中表达。该基因在5龄期随着丝腺的生长发育表达量逐渐增高,到末期表达水平逐渐降低。据此推测该基因可能与丝腺的生长发育或丝蛋白的合成相关。; 林超李兵王东赵国栋卫正国陈玉华沈卫德; 关键词：家蚕丝腺实时荧光定量PCR

细胞周期素家族基因在家蚕4龄幼虫蜕皮过程中的转录特征被引量：1: 2012年; 细胞周期蛋白(cyclin)是真核生物细胞有丝分裂的重要调节蛋白,家蚕具有5种类型细胞周期蛋白基因。以4龄将眠蚕、4龄眠蚕和5龄起蚕为材料,采用定量PCR方法分析5种细胞周期蛋白基因在4龄幼虫蜕皮过程的组织表达特征为:5种类型cyclin基因在生殖腺中都高表达,其中cyclinE在眠中表达量最高,其它4种类型cyclin基因在将眠时表达量最高,证实4龄眠期是家蚕生殖腺细胞发生有丝分裂的重要时期;5种类型cyclin基因在马氏管中都有表达,其中cyclinA和cyclinB3在4龄将眠蚕的马氏管中存在表达高峰,推测和马氏管内表皮更新相关;除cyclinL1在眠蚕丝腺的表达量很低外,cyclinA、cyclinB、cyclinB3和cyclinE在眠蚕丝腺中都存在表达高峰,可能和丝腺的内表皮更新相关;cyclinA、cyclinB、cyclinB3在脂肪体中的表达量较高,且在将眠时或眠中存在表达高峰,推测和脂肪体中能量物质的积累相关;5种类型cyclin基因在脑、血液和中肠的表达量都很低,且蜕皮前后的变化规律不明显。研究结果提示:在家蚕4龄幼虫蜕皮过程中,cyclin基因的转录特征不仅和来源于外胚层组织的表皮更新相关,还和生殖腺的发育及脂肪体中能量物质的积累存在相关性。; 孙文娴彭广大王玮玥刘丽华王燕红沈卫德李兵; 关键词：家蚕细胞周期素基因转录

家蚕精巢特异性蛋白激酶基因Bm-TSSK的克隆及序列与表达分析: 2012年; 睾丸特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(testis-specific serine/threonine kinase,TSSK)首先在哺乳动物中被发现,是一类在精子发生过程起重要作用的蛋白激酶。通过EST同源筛选方法,用人(Homo sapiens)的TSSK2、TSSK4、TSSK6基因cDNA和小鼠(Mus musculus)的TSSK1、TSSK3、TSSK5基因cDNA为探针在GenBank家蚕EST数据库中搜索同源基因,通过在家蚕基因组数据库的同源性检索以及电子克隆,获得一条家蚕精巢特异性蛋白激酶基因的序列,命名为Bm-TSSK(GenBank登录号:JN159476)。据此预测序列设计引物,成功地在家蚕精巢组织中克隆了Bm-TSSK基因完整的开放阅读框(ORF),序列分析及同源性比对表明:Bm-TSSK序列长1 402 bp,ORF为1 041 bp,没有内含子,推测编码346个氨基酸残基,在编码氨基酸序列20～284区域有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的结构域;该基因推导的氨基酸序列在进化上与赤拟谷盗(Tribolium castaneum)、熊蜂(Bombus terrestris)、顶切叶蚁(Acromyrmex echinatior)的亲缘关系较近,相似度分别为81%、86%和85%。基于定量PCR和基因芯片的数据分析显示Bm-TSSK在家蚕5龄第3天幼虫的精巢特异性高表达,推测Bm-TSSK参与了家蚕精子的形成。; 陈鸿俊王燕红李兵陈玉华沈卫德; 关键词：家蚕克隆

家蚕细胞周期素E基因在5龄幼虫组织表达的剪切变体和表达谱特征被引量：3: 2011年; 细胞周期素E（cyclinE）是调控细胞周期从G1期进入S期的关键因子。利用家蚕基因组数据库信息设计引物,克隆家蚕cyclinE在5龄幼虫不同组织表达的cDNA序列,获得该基因的6种不同剪切变体,这6种剪切变体前4个外显子和最后一个外显子都相同,变化主要集中在第5~7外显子处。同源性比对显示,不同物种来源的cyclinE周期蛋白盒区域具有较高的保守性,有35个氨基酸的共同保守序列,该区域可能也是家蚕cyclinE的特异识别并结合细胞周期素依赖蛋白激酶的功能区域。利用实时定量PCR分析显示,cyclinE在家蚕5龄第3天幼虫的中肠、脂肪体、丝腺、脑、马氏管、精巢、卵巢、血液等8种组织、器官中均有表达,并且在脂肪体中的表达相对较高,推测cyclinE基因在家蚕脂肪体细胞分裂过程中发挥重要作用。; 刘丽华李兵沈卫德王文兵; 关键词：家蚕基因结构

家蚕细胞周期蛋白家族基因在5龄幼虫组织中的表达谱分析被引量：5: 2012年; 【目的】研究家蚕细胞周期蛋白家族基因(CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinE、CyclinL1)在丝腺及其他组织中的表达情况,为探讨细胞周期蛋白家族基因在细胞周期中的作用提供参考。【方法】取家蚕5龄3d幼虫的脑、脂肪体、中肠、丝腺、马氏管、精巢、卵巢及血液等组织,用Trizol提取各组织的总RNA并反转录合成cDNA。以Actin3为内参基因,合成的cDNA为模板,利用每个基因的特异性引物进行实时荧光定量PCR,检测细胞周期蛋白家族基因在转录水平上的表达情况。【结果】在丝腺中,CyclinE基因的表达量最高,CyclinA、CyclinL1基因表达较弱,而CyclinB、CyclinB3基因没有表达;在其他组织中,CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinL1基因均在精巢中高表达,而CyclinE基因在脂肪体中表达较高。【结论】CyclinE基因在家蚕丝腺细胞G1/S期起重要作用,CyclinB、CyclinB3基因在G2/M期起作用;CyclinA基因可能参与丝腺染色体的后期复制;CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinL1基因在家蚕精巢中的精母细胞发育形成精子进行分裂时起着重要作用。; 刘丽华沈卫德李兵王文兵; 关键词：细胞周期蛋白丝腺表达谱家蚕

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