山东省自然科学基金(Q2007D04)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- C35基因诱饵表达载体的构建及活性检测
- 2011年
- 目的C35是一种新型的乳腺癌肿瘤标志基因,在乳腺癌细胞中存在普遍性高表达,可作为乳腺癌早期诊断的标志分子。为了进一步揭示C35基因在乳腺癌的发生和发展中对癌细胞的调控和信号转导机制,本研究拟构建C35基因的酵母双杂交诱饵表达载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测。方法采用RT-PCR自乳腺癌T47D细胞中克隆C35表达序列,合成3种C35基因片段,连接入诱饵表达载体pGBKT7,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果3种诱饵表达载体经鉴定全部克隆成功,其中C35全长基因的表达产物对酵母细胞具有生长抑制作用,两种截短体C35 1-153和C35 154-348不具有自激活活性和细胞毒性,无需3-AT抑制。结论C35全长基因的诱饵表达载体可能具有抑制酵母细胞自身蛋白表达系统的作用,两种截短体重组载体可应用于乳腺癌T47D cDNA文库双杂交筛选。
- 尹昆肖婷刘俏俏赵桂华朱嵩闫歌
- 关键词：乳腺癌酵母双杂交
- 新型乳腺癌标志基因C35的研究进展被引量：2
- 2011年
- C35基因是近年来发现的在乳腺癌细胞中特异性高表达,而在正常乳腺上皮细胞中不表达的基因,且C35基因的高度表达较Her2/-neu更为直接,表达谱更为广泛和稳定。C35基因可通过其保守的ITAM结构域促使细胞癌变,已成为一种新的特异性乳腺癌标志基因。本文综述了C35基因的序列分析、表达调控、致癌机制、互作因子和结构研究等方面的研究进展。
- 尹昆赵桂华刘俏俏肖婷
- 关键词：乳腺癌
- 野生型和突变型乳腺癌标志基因C35蛋白的原核表达和纯化
- 2015年
- 目的构建野生型和C112S突变型乳腺癌标志基因C35的原核表达载体,使其在原核细胞中高效表达、纯化并予以鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增野生型和突变型C35基因,将其分别插入原核表达载体p GLO1中,构建重组融合蛋白表达载体野生型p GLO1-C35和突变型p GLO1-C35,转化大肠杆菌E.coli BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达C35融合蛋白,并对诱导条件进行优化,通过镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变型C35融合蛋白,经蛋白质印迹法验证纯化的重组蛋白特异性。结果成功构建了野生型和突变型C35基因的原核表达质粒,并将两种C35融合蛋白成功表达,最佳诱导表达条件为37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导6 h,经纯化后获得高纯度的特异性重组蛋白,浓度达约1.5 mg/m L。结论在原核表达系统中成功表达、纯化了野生型和突变型C35融合蛋白,为进一步制备基于C35抗血清的乳腺癌早期筛查试剂盒奠定了基础。
- 尹昆赵桂华寇景轩李琛琛黄炳成魏庆宽闫歌
- 关键词：肿瘤原核表达纯化乳腺肿瘤
