广东省科技计划工业攻关项目(73007)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：周晓红应彩云钟莉莉顾晓敏黎事伦更多>>
- 相关机构：南方医科大学中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 转基因植物疫苗应用于1型糖尿病免疫干预的研究进展
- 2008年
- 1型糖尿病（T1DM）的发生与胰岛β细胞的可溶性抗原如胰岛素、谷氨酸脱羧酶、酪氨酸磷酸酶等密切相关，是一种自身免疫性疾病。诱导免疫耐受可有效维持体内的免疫平衡，以免疫干预T1DM的发生与发展，已成为目前T1DM防治研究的重点方向之一。近年来，以自身抗原经各种途径在实验动物模型中诱导免疫耐受，相继有获得成功的报道。利用植物转基因技术，将谷氨酸脱羧酶等自身免疫抗原基因转入植物细胞内，使其表达相应抗原，通过口服食用此转基因植物组织以诱导机体产生免疫耐受，为T1DM提供了一条新的防治途径。
- 应彩云周晓红
- 关键词：1型糖尿病胰岛素谷氨酸脱羧酶转基因植物
- 番茄遗传转化筛选及其子代选育体系的优化研究被引量：8
- 2008年
- 目的以弓形虫多表位抗原基因(MAG)和截短的速殖子主要表面抗原1(tSAG1)为插入子建立优化的番茄遗传转化筛选及其子代选育体系。方法从培养基激素配方、番茄外植体选择等方面进行番茄再生体系的优化。自番茄品种、外植体选材、培养温度、培养基激素配方以及在共培养时是否加入乙酰丁香酮(AS)等进行以农杆菌介导的番茄基因组稳定转化体系的优化。采用不同浓度卡那霉素抗性压力对转基因小苗进行根筛选诱导的比对。转基因番茄幼苗练苗移栽开花结果后收集种子,以无菌播种卡那霉素抗性筛选法进行番茄转基因植株子代的选育。结果子叶较下胚轴具有更强的再生能力,在优化的番茄再生培养基ZB3中,番茄子叶可达到98%(59/60)的高频再生芽萌发率。番茄的转化体系优化,培养基激素配方、培养温度是番茄转化芽诱导过程中的关键影响因素,(23±1)℃能显著提高转化芽的萌发率,AS的施加亦能显著提高番茄转化芽萌发率,Zhongshu No.5番茄子叶于ZB2培养基和(23±1)℃的条件下转化芽萌发率为35%(28/81)。80mg/L卡那霉素抗性进行HK种番茄转化小苗根的筛选诱导比较适宜,生根率为48%(31/65)。抗性苗移栽成活,正常开花结果的转化植株117株。无菌播种,卡那霉素浓度≥100mg/L时能显著抑制非转基因番茄种子的发育尤其是根的萌发与植株的伸长,根出现紫化且无侧根生长;将转基因番茄种子置于150mg/L卡那霉素抗性浓度下培养,能有效进行转基因植株后代遗传分离的选育。结论成功建立番茄高频再生体系以及优化的番茄转化、抗性筛选及其转基因植株子代的选育体系。
- 应彩云黄小琴郭瑜琪钟莉莉刘艳黎事伦顾晓敏周晓红
- 关键词：转基因番茄弓形虫
- 植物偏爱密码子优化HPV18L1全长基因的重叠PCR合成被引量：6
- 2009年
- 目的以重叠PCR方法合成植物偏爱密码子优化后的人乳头瘤病毒18L1全长基因。方法自GenBank获取国内外所发布的HPV18L1全长基因序列,经生物信息学分析后选定目标序列,经Synthetic Gene Designer及JCat(JavaCodon Adaptation Tool)分析软件将此序列原始密码子改造为植物偏爱密码子,在C端加入蛋白纯化标签His-tag,获得改造后的HPV18L1全长序列(mHPV18L1)。结合酶切位点分析将mHPV18L1设计为204～477bp的五个大片段LS1-LS5,再将每个大片段分割成57～59bp的5～11个寡聚核苷酸短链,设计合成5对内引物和1对外引物,经重叠PCR扩增获得mHPV18L1全长基因,纯化后将其克隆入pMD18T载体,酶切、测序鉴定插入子。结果以重叠PCR成功扩增获得mHPV18L1全长,pMD18T-mHPV18L1重组质粒经酶切、PCR鉴定均得到预期1749bp大小的片段,并经测序验证。结论获得以植物偏爱密码子进行序列优化的mHPV18L1全长基因及其重组质粒pMD18T-mHPV18L1,为后续mHPV18L1的植物转化研究奠定了一定的工作基础。
- 赵莹张丽仪刘昌政周晓红
- 关键词：重叠PCR密码子优化
