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国家自然科学基金(31100974)
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2
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陶燕
印亦萍
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血管扩张刺激磷蛋白磷酸化157位点突变的慢病毒载体的构建与鉴定
2012年
目的:构建含血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化位点157突变成丙氨酸的慢病毒载体(L-S157A)并转染SGC-7901细胞。方法:针对VASP157位点的引物,利用重叠PCR的方法定点突变该位点从丝氨酸至丙氨酸,重组入慢病毒载体,包装病毒后感染SGC7901细胞,并利用测序和westernblot方法对突变进行验证。结果:VASP磷酸化157位点突变成丙氨酸,并且转导入293T和SGC-7901细胞,L-S157A明显下调SGC-7901细胞中p-VASPS157的表达。结论:成功地构建了针对VASP蛋白丝氨酸157位点的突变的表达载体,并获得了稳定表达该突变体的SGC-7901细胞株。为进一步研究VASP及其磷酸化在胃癌中的功能奠定了基础。
印亦萍
陶燕
关键词:
血管扩张刺激磷蛋白
SGC-7901细胞株
慢病毒
血管扩张刺激磷蛋白与微管蛋白的结合
2012年
目的探讨血管扩张刺激磷蛋白(VASP)及其丝氨酸157(p-VASP S157)和239(p-VASP S239)位点磷酸化与α-微管蛋白(α-Tubulin)之间的关系,明确VASP是一个新的微管相关蛋白。方法采用免疫荧光染色观察p-VASP S157、p-VASP S239和α-Tubulin在人宫颈癌上皮细胞HeLa的共定位;利用免疫共沉淀、微管沉淀和Western blot方法明确VASP及其不同位点磷酸化与α-Tubulin的结合情况。结果 VASP和p-VASP S157能够与α-Tubulin结合;p-VASP S239在细胞周期各个时期与α-Tubulin均无共定位关系。结论 VASP是一个新的微管相关蛋白,其丝氨酸157磷酸化与二者的结合相关。
陶燕
关键词:
血管扩张刺激磷蛋白
Α-微管蛋白
微管相关蛋白
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