北京市自然科学基金(5042005)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
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- 短双链RNA对CVB3病毒细胞内清除作用的可行性研究及其机制探讨
- 2008年
- 目的通过观察短双链RNA（Short interfering RNA，siRNA）体外转染HeLa细胞评价siRNA抗CVB3病毒感染的可行性和抑制作用机制。方法通过细胞病变作用保护实验，选择合适的siRNA剂量。Western Blot、RT．PCR等方法在体外检测siRNA抗CVB3病毒复制作用及作用途径。结果siRNA．3753通过脂质体转染试剂能高效转入HeLa细胞，转染效率可达98．77％，在细胞内可稳定长达48h。siRNA-3753的浓度为0．6gmol／L对病毒抑制率高同时对细胞不会产生毒性作用，该浓度作为本次研究的实验剂量。siRNA-3753抗CVB3病毒感染作用是通过siRNA直接降解病毒基因得到的，而不是通过激活PKR或干扰素等其他未知因素起效的。结论siRNA可以高效、较长时间的转染入HeLa细胞内，在低剂量时即产生较好的抗病毒感染作用，通过直接降解病毒基因组的途径特异性抑制CVB3病毒的复制及感染。
- 肖宗慧韩继生姚海兰刘哲伟
- 关键词：RNA柯萨奇病毒感染细胞
- 针对2B区域的短双链RNA抑制柯萨奇B3病毒感染HeLa细胞的特性研究被引量：2
- 2007年
- 为了研究短双链RNA(Small interfering RNA,siRNA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)复制的影响及其作用特性,合成针对CVB3基因组2B区的siRNA-2B,脂质体法转染HeLa细胞后感染CVB3病毒,观测转染效率及存留时间、毒性作用、病毒致细胞病变效应、病毒滴度、病毒RNA含量、siRNA-2B对重组基因的特异性降解及培养上清有限稀释后再感染情况。结果发现siRNA-2B能高效转染入HeLa细胞并存留长达48h,高剂量的siRNA-2B对培养细胞无明显毒性,siRNA-2B能特异性针对2B区有效地降解病毒RNA,能明显抑制病毒RNA的复制。随着转染浓度的增加,siRNA-2B的抗病毒作用逐渐增强。siRNA-2B还能明显降低CVB3的再感染能力。这些结果提示,针对基因组2B区的siRNA-2B可以明显抑制CVB3基因复制,有效控制病毒再感染,并具有高效性、特异性和量效关系等特点。为siRNA可能成为预防和治疗CVB3感染的新途径奠定基础。
- 姚海兰肖宗慧任红雁韩继生刘哲伟
- 关键词：RNAISIRNA柯萨奇B3病毒抗病毒效应
- 小干扰RNA在心肌细胞中对柯萨奇病毒B3复制的抑制作用研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过在原代心肌细胞培养上研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）介导的基因干扰对病毒增殖的抑制和细胞内免疫清除作用，评价siRNA在治疗病毒性感染中的可能性。方法体外制备BALB／c乳鼠心肌细胞，利用脂质体和电穿孔转染方法转染siRNA后感染病毒，流式细胞术、中性红染色和病毒致细胞病变作用（CPE）保护实验评价转染效率和细胞生长状态，空斑形成减少实验、RT-PCR等方法检测抑制病毒程度。结果通过在HeLa细胞上的筛选，针对病毒不同区域的siRNA呈现出不同的抗病毒作用，靶序列位于2B区的siRNA-3753能显著抑制柯萨奇病毒B3（CVB3）感染。在原代培养的心肌细胞中，转染siRNA-3753后同样显示出很好的抗病毒效果，心肌的搏动、心肌细胞的生长状况保持着较好的状态。而病毒对照和非特异性siRNA-non感染24h后，细胞停止搏动，逐步变圆，皱缩死亡。测定培养上清和细胞内的病毒滴度，电转siRNA-3753对病毒抑制率可以达到98．1％，脂质体转染siRNA-3753对病毒抑制率为78.2％。电穿孔转染效率可以达到56.03％，脂质体为9.0％。结论针对CVB3基因组2B区的siRNA在保护心肌细胞抵抗CVB3病毒感染实验中具有抑制病毒复制作用。
- 刘哲伟任红雁姚海兰肖宗慧鲁杰何峰韩继生
- 关键词：小干扰RNA病毒性心肌炎心肌细胞
- 反义寡聚核苷酸抗柯萨奇A24病毒感染的研究被引量：1
- 2007年
- 目的针对柯萨奇病毒A组24型(coxsackievirus A24,CVA24)基因组特殊功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用。同时进行抗病毒作用的量效评价。方法通过抑制空斑形成实验、病毒致细胞病变作用及免疫印迹等实验,了解反义核酸抑制及阻断CVA24病毒感染细胞的能力,及经反义核酸抑制后病毒结构蛋白在感染细胞中的表达状况,并对抗病毒效果较好的反义核酸进行量效关系测定。结果从本实验所设计的8条反义核酸中,筛选出5条能较好抑制CVA24的反义核酸序列,分别为SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568。当病毒感染量为1 MOI时,5μmol/L的上述反义核酸的病毒活性抑制率均在50%以上。经过量效关系分析显示,0.3μmol/L的SCA568已经对细胞产生较强的保护作用,对病毒空斑形成抑制程度达80%;在2.5μmol/L的SCA568保护下,病毒空斑抑制率达到90%以上,是几条反义核酸中抗病毒效果最好的一条。SCA568对病毒早期结构蛋白的表达有较强的抑制作用。而抗病毒效果稍差的SCA723,随浓度的增加也表现出一定程度对病毒蛋白表达的抑制作用。结论本实验所筛选的5条反义核酸SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568能较好地抑制CVA24活性,为进一步研究反义核酸治疗和预防CVA24感染、防止CVA24引起的流行性出血性结膜炎的暴发流行打下基础。
- 孙红妹肖宗慧刘哲伟
- 关键词：反义寡聚核苷酸HELA细胞
- 短双链RNA对柯萨奇B组3型病毒体外感染的抑制作用研究被引量：2
- 2007年
- 目的利用RNA干扰技术，在细胞、蛋白和基因水平上观察短双链RNA对柯萨奇病毒体外感染Hela细胞的增殖抑制作用、对病毒RNA复制和蛋白合成的影响。方法应用病毒致细胞病变作用保护实验、空斑形成减少实验、Western Blot、RT-PCR等方法，在体外检测其抗CVB3病毒作用。结果设计、合成的8条SiRNA中，针对基因组2B、VP4、2A、3C区的SiRNA-2、SiRNA-3、SiRNA-6、SiRNA-7具有不同程度的抑制病毒作用。其中，病毒基因组2B的SiRN．2作用效果最好，对Hela细胞CVB3感染72h后致细胞病变和空斑形成的抑制率为95％，抑制病毒蛋白的合成，病毒基因的复制水平也显著降低，在病毒0．1、0．01、0．001、0．0001 MOI感染水平上对CVB3致细胞病变作用的抑制率分别为30％、70％、88％和99％（48h）。结论针对CVB3基因组2B的SiRNA-2具有较强的抑制柯萨奇B3型病毒感染的作用。
- 韩继生肖宗慧姚海兰任红雁刘哲伟
- 关键词：RNA
