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中国博士后科学基金(2011M500530)

作品数：16 被引量：46H指数：4
相关作者：徐宝山杨强伍耀宏许海委夏群更多>>
相关机构：天津医院天津医科大学天津理工大学更多>>
发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金天津市卫生局科技基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 16篇中文期刊文章

领域

  • 16篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 7篇髓核
  • 6篇细胞
  • 5篇软骨
  • 5篇髓核细胞
  • 5篇椎间盘
  • 4篇多孔支架
  • 4篇脱细胞
  • 4篇纤维环
  • 4篇PKH26
  • 3篇山羊
  • 3篇丝素
  • 3篇丝素蛋白
  • 3篇基质
  • 3篇骨基质
  • 2篇软骨基质
  • 2篇软骨细胞
  • 2篇软骨细胞分化
  • 2篇生物相容
  • 2篇生物相容性
  • 2篇细胞分化

机构

  • 16篇天津医院
  • 8篇天津医科大学
  • 7篇天津理工大学
  • 2篇南开大学
  • 1篇天津市第一中...
  • 1篇天津市南开医...
  • 1篇中国人民解放...
  • 1篇天津医科大学...
  • 1篇天津医科大学...

作者

  • 14篇徐宝山
  • 13篇杨强
  • 11篇伍耀宏
  • 10篇夏群
  • 10篇许海委
  • 9篇李秀兰
  • 9篇马信龙
  • 8篇张杨
  • 7篇张春秋
  • 3篇曾超
  • 2篇杨召
  • 2篇苑珍珍
  • 2篇朱美峰
  • 2篇丁晓明
  • 1篇刘越
  • 1篇赵斌
  • 1篇郭全义
  • 1篇许文静
  • 1篇卢世璧
  • 1篇赵艳红

传媒

  • 6篇中国矫形外科...
  • 4篇中国修复重建...
  • 1篇中华骨科杂志
  • 1篇天津医药
  • 1篇中华创伤杂志
  • 1篇辽宁中医杂志
  • 1篇天津中医药
  • 1篇国际生物医学...

年份

  • 1篇2015
  • 6篇2014
  • 9篇2013
共 16 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
新型脱细胞骨基质材料的组织学结构及其细胞相容性观察被引量：3
2013年
目的对新型脱细胞骨基质材料(acellular bone matrix,ACBM)的组织学结构及细胞相容性进行观察,探讨其作为组织工程骨支架的可行性。方法取健康18～24月龄雄性杂种犬股骨头负重区骨柱,高压水枪冲洗、脱脂,Trixon X-100、脱氧胆酸钠等进行脱细胞等理化处理,制备新型ACBM支架;对其行扫描电镜观察,HE染色、天狼星红染色及Hoechst 33258染色,评估其脱细胞程度及结构。采用密度梯度离心法分离培养犬BMSCs,取第3代BMSCs种植至ACBM支架上,MTT法分析支架浸提液毒性;复合培养3 d行倒置显微镜、扫描电镜、活/死细胞荧光染色、组织学等观察细胞在支架的生长、分化情况。结果 HE染色示ACBM支架去细胞彻底,无细胞碎片残留;天狼星红染色示支架呈深红及黄红相间染色;Hoechst 33258染色未见细胞残留。扫描电镜观察示ACBM支架内孔洞相互贯通,具有天然骨的孔径和孔隙率。MTT法检测示,培养1～6 d不同浓度(25%、50%、100%)支架浸提液与对照H-DMEM培养液吸光度(A)值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。倒置显微镜、扫描电镜、组织学观察结果均显示细胞在支架上黏附良好,增殖显著,细胞基质分泌增加;活/死细胞染色示ACBM支架内细胞均呈绿色。结论 ACBM支架去细胞彻底,具备良好的孔径和孔隙率,无毒,细胞相容性良好,可作为良好的支架载体用于组织工程骨的构建。
赵艳红杨强彭江郭全义夏群马信龙徐宝山赵斌张莉伍耀宏刘越许文静卢世璧
关键词：组织工程骨细胞相容性
PKH26标记结合活体荧光成像技术在椎间盘组织工程研究中的应用被引量：1
2013年
目的体外评估PKH26标记对山羊髓核细胞生物学功能的影响,并结合活体荧光成像系统评价种子细胞在裸鼠体内的生物学行为。方法取1岁龄山羊椎间盘分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置相差显微镜下观察,传代获取第1代髓核细胞,行PKH26荧光标记,荧光显微镜下观察标记后的细胞荧光强度,并行甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色观察,锥虫蓝染色比较标记前后细胞活性,MTT法检测标记前后细胞增殖特性,实时荧光定量PCR检测细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因表达。将标记后的髓核细胞接种至一体化纤维化-髓核支架的髓核部分,纤维环部分作为阴性对照,体外培养3 d后植入5只6周龄雄性裸鼠体内,培养6周后活体成像技术检测髓核细胞-支架复合物在体内的荧光强度及范围。结果倒置相差显微镜观察示原代髓核细胞簇状生长,呈卵圆形,第1代髓核细胞呈类软骨样细胞形态;标记后的第1代髓核细胞甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色均呈阳性;标记后荧光强度均匀,标记前后细胞活性均在95%以上;标记前后细胞生长曲线比较差异无统计学意义(P>0.05);实时荧光定量PCR检测示标记前后细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。活体成像技术显示体内髓核支架有强烈荧光,纤维环支架未见荧光。结论 PKH26标记对髓核细胞的活性、增殖及细胞表型的表达无明显影响,结合体内活体荧光成像系统可以追踪细胞在体内的生物学行为。
伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨马信龙夏群张春秋许海委曾超
关键词：山羊
新型一体化纤维环-髓核双相支架的制备与评估被引量：9
2013年
目的用脱细胞脱钙骨基质和脱细胞髓核基质构建新型一体化纤维环-髓核双相支架,并进行理化检测,探讨其作为组织工程椎间盘支架的可行性。方法取猪股骨近端松质骨,塑形成外径10 mm、内径5 mm、厚3 mm的骨环,经脱脂、脱钙、脱细胞处理制备成纤维环相支架;取猪尾髓核组织,Triton X-100和脱氧胆酸联合脱细胞后粉碎、离心,制备脱细胞髓核基质;将制备的脱细胞髓核基质注入纤维环相支架中央,冷冻干燥,联合应用紫外照射和碳化二亚胺进行交联,制备一体化纤维环-髓核双相支架。通过大体观察、HE染色、扫描电镜观察支架结构;测定支架的孔隙率、吸水率、压缩弹性模量;MTT法检测25%、50%、100%支架浸提液对新西兰大白兔脂肪来源干细胞(adipose-derived stemcells,ADSCs)增殖的影响;将ADSCs接种到支架上,活/死细胞染色观察细胞在支架上的活性。结果大体观察支架呈乳白色;HE染色可见支架均质红染,无细胞成分残留;扫描电镜可见外层纤维环相支架孔径大小均匀一致,孔隙相互贯通,中央脱细胞髓核基质微丝相互连接,形成均匀网状结构,交界处连接紧密。纤维环相支架孔径为(343.00±88.25)μm,一体化纤维环-髓核双相支架孔隙率为82.98%±7.02%、吸水率为621.53%±53.31%,压缩弹性模量为(89.07±8.73)kPa。经MTT测定支架浸提液对ADSCs增殖无影响;活/死细胞染色可见细胞在支架上生长良好,无死细胞。结论用脱细胞脱钙骨基质和脱细胞髓核基质构建的一体化纤维环-髓核双相支架具有合适的孔径和孔隙率且无毒,力学性能与人正常椎间盘接近,是构建组织工程椎间盘的理想支架载体。
许海委徐宝山杨强李秀兰马信龙夏群张春秋伍耀宏
软骨脱细胞细胞外基质多孔支架与山羊髓核细胞生物相容性研究被引量：1
2013年
目的制备软骨脱细胞细胞外基质多孔支架，并探讨其与山羊髓核细胞的生物相容性。方法猪关节软骨经研磨、脱细胞、冷冻干燥技术等处理制成三维多孔支架；从山羊腰椎间盘中分离出髓核细胞，培养后获取P1代细胞；四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测支架浸提液毒性；将髓核细胞以5x106／ml的密度接种在支架上体外培养48h，通过倒置显微镜、HE染色、死活细胞染色（LIVE／DEAD染色）、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附及活性。结果软骨脱细胞基质多孔支架在敷水状态下光滑透明，分离的髓核细胞呈典型的软骨细胞样形态；MTT检测各组间增殖，其差异不具有统计学意义（P〉0．05）；倒置显微镜、电镜观察髓核细胞呈球状或短梭形均匀地贴附在支架内部，HE染色观察可见髓核细胞均匀分布在支架内部，LIVE／DEAD染色显示全部为绿色荧光（活细胞），未见红色荧光（死细胞）。结论软骨脱细胞基质多孔支架在组成上与髓核组织相似，与山羊髓核细胞具有良好的生物相容性，可以作为髓核组织工程的支架材料。
伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨夏群张春秋许海委
关键词：脱细胞软骨髓核细胞生物相容性
不同方法诱导兔脂肪干细胞向软骨细胞分化的对比研究被引量：1
2014年
目的 分别用细胞共培法和诱导液培养法诱导脂肪干细胞（adipose-derived stemcells,ADSCs）向软骨细胞分化,比较两种方法的诱导效果.方法 分离培养新西兰大白兔ADSCs和软骨细胞,分别培养至第2代用于实验.根据实验目的将实验分为三组：（1）对照组：将ADSCs接种于6孔板,普通高糖培养液培养;（2）细胞共培组：将软骨细胞和ADSCs分别接种于Transwell6孔板的上层和下层,普通高糖培养液共同培养;（3）诱导液培养组：将ADSCs接种于6孔板,用软骨诱导液进行培养.倒置显微镜观察各组ADSCs的形态变化,14d后行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化,实时荧光定量PCR测定软骨细胞相关基因（蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、SOX9）的表达情况.结果 细胞共培组和诱导液培养组ADSCs逐渐变为软骨样细胞形态,甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性,其中诱导液培养组染色更深,对照组为阴性.荧光定量PCR结果显示Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9的基因转录水平细胞共培组（1.427±0.066,2.128±0.076,1.082±0.081）和诱导液培养组（3.438±0.108,4.297±0.147,2.929±0.090）明显高于对照组（0.040±0.021,0.128±0.038,0.098±0.022） （P ＜0.05）,且诱导液培养组高于细胞共培组（P＜0.05）.结论 细胞共培法和诱导液培养法均可诱导ADSCs向软骨细胞定向分化,诱导液培养法诱导效果更好.
许海委徐宝山杨强夏群李秀兰张杨马信龙伍耀宏刘子颐
关键词：干细胞软骨细胞细胞诱导
加味伸筋透骨汤联合玻璃酸钠治疗膝关节退行性骨性关节炎的疗效观察被引量：9
2015年
目的:评价加味伸筋透骨汤联合玻璃酸钠治疗膝关节退行性骨性关节炎(DOA)的临床疗效。方法:采用随机、平行对照的试验方法,84例患者采用随机数字表的方法随机分成两组,每组42例患者,试验组治疗为加味伸筋透骨汤+玻璃酸钠,对照组为单纯玻璃酸钠组,疗程均为5周。所有患者治疗前后,均采用国际DOA的评分标准-Lequesne指数记录症状评分、压痛仪测定关节周围最明显的压痛点的压痛值并测量膝关节活动度。结果:试验组总有效率为95.24%,对照组总有效率为73.81%;试验组治疗5周后Lequesne指数评分、压痛值与关节活动度与对照组相比均有改善,差异有显著性(P<0.05)。结论:加味伸筋透骨汤联合玻璃酸钠能有效地治疗膝关节退行性骨性关节炎。
苑珍珍杨召
关键词：玻璃酸钠疗效
脱细胞软骨基质来源的多孔支架复合山羊髓核细胞体内初步构建组织工程髓核的实验研究
2013年
[目的]探讨脱细胞软骨基质多孔支架复合PKH26标记的山羊髓核细胞体内异位构建组织工程髓核的可行性。[方法]制备脱细胞软骨基质来源的多孔支架,扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察、天狼星红染色、HE染色观察、MTT毒性检测;分离山羊髓核细胞,通过倒置显微镜观察、番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色进行鉴定;将PKH26标记的山羊髓核细胞接种支架上,体外培养3 d后进行LIVE/DEAD活性染色,将细胞支架复合物置入裸鼠皮下,培养6周,病理切片,荧光显微镜下观察,进行番红O、Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化染色。[结果]扫描电镜观察支架孔隙相连通且分布均匀,天狼星红染色支架呈黄绿相间色,HE支架淡染,MTT检测细胞增殖曲线无统计学差异(P>0.05);P1代髓核细胞呈软骨样细胞形态,番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色均阳性,PKH26标记后的细胞呈红色荧光;体外LIVE/DEAD染色细胞呈绿色荧光,体内培养6周后,带红色荧光的细胞填满支架孔隙,番红O、Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,Ⅰ型胶原免疫组化染色弱阳性。[结论]以脱细胞软骨基质多孔支架复合山羊髓核细胞在体内能够形成组织工程髓核样组织。
伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨夏群许海委
关键词：脱细胞软骨基质PKH26髓核
新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外构建组织工程化髓核的实验研究被引量：1
2014年
[目的]观察以新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外构建组织工程化髓核的可行性。[方法]分离培养兔髓核细胞,与丝素蛋白多孔支架在体外复合培养,建立组织工程化髓核模型,通过扫描电镜、HE染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化以及酶联免疫吸附测定观察细胞在支架上1周和3周的生长及增殖情况。[结果]培养1周后,扫描电镜显示细胞呈球状均匀地贴附在支架内部。细胞-支架复合体HE染色可见支架内部有大量髓核细胞,甲苯胺兰染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。培养3周后,扫描电镜显示细胞成层黏附于支架表面,细胞重叠生长,分泌大量细胞外基质,HE染色可见支架内部有大量髓核细胞填满支架孔隙并分泌大量细胞外基质,甲苯胺兰染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。酶联免疫吸附测定:3周组蛋白多糖含量(52.4±4.5)ng/ml明显高于1周组(29.3±3.6)ng/ml,P<0.05,3周组的II型胶原含量(24.3±1.8)ng/ml明显高于1周组(15.16±1.5)ng/ml,P<0.05。[结论]新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞体外培养生长良好,分泌大量类似髓核样细胞外基质,可以用于体外构建组织工程化髓核。
曾超朱美峰徐宝山杨强王连永李秀兰张杨马信龙夏群杜立龙丁晓明刘英
关键词：丝素蛋白髓核细胞
丝素蛋白应用于椎间盘纤维环组织工程的研究进展被引量：2
2014年
[目的]综述国内外有关丝素蛋白应用于椎间盘纤维环组织工程的研究进展,为下一步的实验研究提供理论依据。[方法]广泛查阅近年来国内外有关丝素蛋白的研究成果,尤其是应用于椎间盘纤维环组织工程的相关文献,归纳总结其发展现状和研究进展。[结果]目前丝素蛋白提纯工艺已臻成熟,并且在多个领域得到应用,比如纤维环、软骨、肌腱、韧带组织工程和药物缓释材料等方面。以丝素蛋白为材料制成的支架,结构稳定,力学强度高,还具有良好的生物相容性和可控的生物降解速率,并且能够通过简单的化学修饰来改进各方面的性能。[结论]丝素蛋白作为椎间盘纤维环组织工程支架的理想材料,表现出了良好的发展前景,值得进一步研究和推广。
丁晓明徐宝山杨强
关键词：椎间盘纤维环丝素蛋白
来源于长管状骨的组织工程纤维环支架的理化特性及细胞生物学相容性研究被引量：2
2013年
[目的]以来源于长管状骨的骨基质明胶(bone matrix gelatin,BMG)为材料制备纤维环支架,并检测其理化特性及细胞生物相容性。[方法]以猪股骨近端松质骨为材料,制备外径为1 cm、内径为0.5 cm的中空环,经脱钙脱细胞处理后制成纤维环支架。支架行Hoechst 33258、HE、Ⅰ型胶原免疫荧光、天狼星红染色,扫描电镜(scan-ning electron microscope,SEM)观察并计算孔径,同时进行生物力学测定。四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazoly tetrazoli-um,MTT)检测支架不同浓度浸提液的细胞毒性,取P1代山羊纤维环细胞,用注射器将细胞接种至支架上,体外培养48 h,通过活/死细胞染色(LIVE/DEAD cells staining)、扫描电镜(SEM)、HE染色评价支架与细胞的生物相容性。[结果]大体观察支架表面光滑,呈乳白色,扫描电镜支架孔隙分布较均匀且相连通,支架孔径为(401.4±13.1)μm,Hoechst 33258、HE染色均未见细胞残留,Ⅰ型胶原免疫荧光阳性,天狼星红染色支架红染,支架压缩弹性模量为(47.75±6.32)kPa。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组间细胞增殖差异无统计学意义(P﹥0.05),活/死细胞染色示细胞在支架上呈绿色荧光,扫描电镜和HE染色示细胞粘附在支架孔隙表面及周围,有基质分泌。[结论]以来源于长管状骨的骨基质明胶为材料制备的中空环形支架脱细胞彻底,具有合适的孔径结构,在机械性能、组成方面与正常纤维环相接近,具有良好的生物相容性,符合组织工程纤维环支架载体的条件。
伍耀宏徐宝山杨强李秀兰张杨马信龙夏群闫中胜许海委
关键词：骨基质明胶
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