国家高技术研究发展计划(2004AA205020)
- 作品数：81 被引量：267H指数：9
- 相关作者：李玉林颜炜群何旭邓方阁张丽红更多>>
- 相关机构：吉林大学广州医学院第一附属医院吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞方法的建立被引量：12
- 2006年
- 目的:分离和培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),并在体外定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。方法:利用Percoll梯度分离法、贴壁筛选法及单克隆培养法,分离、培养、扩增hMSCs;应用地塞米松、吲哚美辛、IBMX及胰岛素定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。结果:体外分离、培养出高度同源性的hMSCs,hMSCs具有独特的细胞免疫学表型,即CD73、CD105、CD166、CD90及CD44阳性,CD34、CD31及CD45阴性。诱导3 d后,hMSCs细胞内有小脂滴出现,诱导2周后,脂滴数量增加并相互融合,细胞由长梭形变为圆形或多边形。结论:成功建立hMSCs分离培养方法,体外定向诱导hMSCs分化为脂肪细胞。
- 何旭王心蕊张海英牛云李玉林
- 关键词：骨髓祖代细胞脂细胞流式细胞术
- 利用激光扫描共聚焦显微镜实时监测体外诱导分化的人骨髓间充质干细胞内游离Ca^2＋浓度动态变化被引量：2
- 2008年
- 目的利用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）实时监测由人骨髓间充质干细胞（hMSC）诱导分化的心肌样细胞内游离Ca^2＋浓度的动态变化。方法体外分离培养hMSC，5-氮胞苷诱导向心肌样细胞分化。分别以体外分离培养的原代搏动的出生2dSD大鼠乳鼠心肌细胞（CM）和同代次的hMSC为阳性对照和阴性对照。Fluo-3／AM荧光探针分别标记hMSC、由hMSC诱导的心肌样细胞及CM，利用LSCM实时监测单细胞内Ca^2＋动态变化的优势，观察加入心脏正性肌力药物后的细胞反应及细胞内Ca^2＋水平的动态变化。结果静息状态下（给药前），搏动的CM荧光强度有变化，而hMSC及心肌样细胞Ca^2＋的荧光强度保持在稳定的波动水平内，两者差异无统计学意义。给药后，hMSC的Ca^2＋离子流没有改变，与静息状态下趋于一致；而心肌样细胞则表现出一个明显的Ca^2＋离子流，且下降后细胞内Ca^2＋水平明显高于加药前静息钙水平，其Ca^2＋离子流的表现趋势与搏动的CM基本一致。比较给药后hMSC与心肌样细胞的Ca^2＋荧光强度落差值，差异具有统计学意义（64．04±22．68比180．75±34．04，P〈0．01）。结论hMSC经5-氮胞苷诱导后，在电学特性方面具有向CM分化的趋势，心肌样细胞与CM具有某些相同的电生理特性。
- 邓方阁郭连峰张秀英李玉林
- 关键词：激光扫描共聚焦显微镜间质干细胞心肌样细胞游离CA^2+浓度
- 鸦胆子乙醇提取物对血小板源性生长因子受体介导细胞迁移的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的:观察鸦胆子乙醇提取物对血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)介导细胞迁移的影响,阐明其起作用的有效成分。方法:用脂质体介导的细胞转染技术将人PDGFRβ表达载体转染体外培养的不表达PDGFRβ的PAE细胞,G418抗性筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测PDGFRβ的表达;用细胞损伤修复实验观察细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB(PDGFBB)最低浓度;划痕实验观察加入不同浓度鸦胆子乙醇提取物24 h后,计算细胞迁移的抑制率及鸦胆子发挥抑制作用的主要成分溶于乙醇溶液的浓度。结果:RT-PCR检测转染组细胞表达PDGFRβ;细胞损伤修复实验检测细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB(PDGFBB)最低浓度为10μg.L-1;划痕实验检测随着鸦胆子乙醇提取物(70%乙醇溶液)浓度的增加,对细胞迁移的抑制率增加(P<0.05),呈剂量效应关系;50%乙醇提取物和25%乙醇提取物(浓度≤10μg.L-1)对细胞迁移抑制不明显,鸦胆子乙醇提取物浓度>10μg.L-1主要导致细胞死亡。结论:鸦胆子抗肿瘤作用机制可能是通过抑制PDGFRβ介导的细胞迁移来实现的,其发挥作用的主要成分更易溶于70%的乙醇溶液中。
- 史艳芬李晶李玉林李荣贵
- 关键词：恶性肿瘤血小板源性生长因子受体细胞迁移
- PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中引导分泌表达天然N-端rBPTI被引量：4
- 2005年
- 目的:在毕赤酵母(Pichia pastoris)中分泌表达天然N-端rBPTI。方法:将PHOⅠ/bpti基因克隆到真核表达载体pPICZα,电转化毕赤酵母菌株X-33。结果:构建了含PHOⅠ/bpti基因的表达质粒,并在X-33中分泌表达rBPTI。用胰蛋白酶抑制实验筛选出表达rBPTI的工程菌。表达上清经阳离子交换层析分离纯化为单一组份,SDS-PAGE显示相对分子质量为6 500。结论:PHOⅠ信号肽在毕赤酵母中成功地诱导分泌表达了具有正确N-端氨基酸序列的rBPTI。
- 杨莉莉贺巾超马杰范伟全王建秋魏传宇颜浩为颜炜群
- 关键词：毕赤酵母
- rhKD/APP对急性肝损伤小鼠的保护作用被引量：4
- 2007年
- 目的:观察rhKD/APP对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:采用CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,取小鼠60只随机分为6组(每组10只),分别设为空白对照组、模型组、阳性药对照组及rhKD/APP小中大剂量(4.5、9.0、18.0 mg.kg-1)组。测定实验小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织丙二醛(MDA)、肝重系数并观察肝脏组织病理学变化。结果:rhKD/APP小、中、大剂量组血清ALT、AST活性和肝组织中MDA低于模型组(P<0.05或P<0.01);肝脏组织病理切片显示,模型组有炎细胞浸润,肝细胞坏死,与模型组相比,rhKD/APP小、中、大剂量组肝组织损伤程度较轻,且随着rhKD/APP剂量增加肝组织损伤程度逐渐减轻。结论:rhKD/APP对CCl4所致急性肝损伤小鼠具有明显的保护作用。
- 张馨木贺巾超杨莉莉张赢予董文侯立中颜炜群
- 关键词：RHKD/APP蛋白酶抑制药急性病四氯化碳
- 免疫缺陷裸鼠无创性心肌缺血缺氧损伤模型的构建被引量：1
- 2008年
- 目的:通过对免疫缺陷裸小鼠腹腔注射异丙肾上腺素,构建一种无创性裸小鼠的心肌缺血缺氧损伤模型。方法:16只免疫缺陷裸小鼠随机分为3组:对照组5只,实验A组7只,实验B组4只,其中实验A、B组连续3d重复腹腔注射5mg/kg异丙肾上腺素,对照组则注射等量生理盐水。对照组和实验A组于第3次注射后24h处死,实验B组则于第3次注射后2周处死。各组裸小鼠处死前取血清进行心肌酶检测,心脏标本称重,常规HE染色。结果:实验A组、B组、对照组的心脏质量分别为(94.97±6.12)mg、(79.35±7.63)mg、(81.38±10.11)mg,A组相对于B组、对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。HE染色显示A组局部心肌组织损伤与变性坏死,而B组病变程度明显较轻,未见斑痕形成。实验A组、B组、对照组的乳酸脱氢酶(LDH)分别为(6662.70±884.78)U/L、(4096.75±448.75)U/L、(4419.40±880.50)U/L,A组相对于B组、对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:腹腔反复大剂量注射异丙肾上腺素可构建免疫力缺陷裸小鼠的心肌缺血缺氧损伤模型。
- 邓方阁陆冬晓张秀英李玉林
- 关键词：冠状动脉疾病裸鼠异丙肾上腺素
- 人骨髓间充质干细胞体外诱导分化成心肌细胞及其在心肌细胞移植术中的潜能性研究被引量：1
- 2007年
- 目的培养人骨髓间充质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcell,hMMSCs),体外诱导分化成心肌细胞(cardiomyocytes,CM),将细胞移植入裸鼠皮下,观察其在细胞移植中有无成瘤改变,是否具有细胞移植的潜能性。方法体外培养扩增hMMSCs,流式细胞仪鉴定其纯度;用5-氮杂胞苷(5-Aza,10μmol/L)体外诱导成CM,并进行鉴定;将诱导成CM的hMMSCs接种于裸鼠皮下,移植后18d分别取接种局部皮下及心肌组织,进行组织化学染色。结果体外培养扩增出hMMSCs,流式细胞检查CD44阳性,表达Vimentin;hMMSCs经5-Aza诱导可分化成CM,表达心肌特异性标记TroponinⅠ及Desmin,透镜观察可见肌丝样结构;进行细胞移植的裸鼠注射局部皮下组织没有形成结节样结构,但发现有表达TroponinⅠ、Desmin及Vimentin的细胞;此外,在心肌组织中也发现有表达这三种抗体的hMMSCs。结论hMMSCs可体外分离培养扩增,具有向CM分化的潜能,体外诱导分化成CM的hMMSCs在细胞移植中并没有成瘤性,且经皮下细胞移植诱导分化成CM的hMMSCs具有向心脏归巢的现象,可用于心肌损伤的细胞移植。
- 邓方阁张秀英王心蕊马英智李玉林
- 关键词：细胞移植
- 重组牛胰蛋白酶抑制剂对小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：5
- 2008年
- 目的观察重组牛胰蛋白酶抑制剂(rBPTI)对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法小鼠60只随机分成6组:正常对照组、模型组、rBPTI的3个剂量组(分别为3、6、12×104kIU·kg-1)、抑肽酶组(6×104kIU·kg-1)。每天腹腔注射给药,7d后体外注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型。末次给药后眼眶取血测定小鼠血清ALT、AST活性,观察肝脏组织病理改变。结果各剂量rBPTI可不同程度降低小鼠血清ALT、AST活性,降低肝组织MDA含量,与模型组比较差异有统计学意义(P<0·05、P<0·01),同时不同程度减轻肝组织病理损伤。结论rBPTI对体外CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用,作用效果同天然BPTI相当。
- 杨莉莉董文贺巾超任秀宝颜炜群
- 关键词：四氯化碳急性肝损伤
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞实验方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨体外培养并诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌细胞(CMs)的实验方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs,采用5-氮杂胞苷(5-Aza)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对hMSCs进行联合诱导,诱导3～4周,观察细胞形态学的变化,免疫组织化学方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果:hMSCs体外经5-Aza和bFGF联合诱导1～2周后,细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。诱导2～3周后细胞伸出伪足呈多爪形;诱导3～4周后细胞伪足间相互连接形成肌管样结构。联合诱导3～4周后免疫组织化学鉴定结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnⅠ)和横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)表达均呈阳性。结论:hMSCs在体外经5-Aza和bFGF联合诱导可以分化为CMs。
- 张慕蕊王岩李玉林
- 关键词：间质干细胞5-氮胞苷
- 人骨髓间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化被引量：9
- 2008年
- 目的诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,将其分为对照组和诱导组两组。诱导组加入地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸,诱导成骨。采用免疫荧光染色的方法检测碱性磷酸酶(AKP)和骨桥蛋白(OPN)的表达;并通过RT-PCR检测骨桥蛋白mRNA的表达;利用硝酸银染色和茜素红染色两种特殊染色方法检测钙盐沉积。结果经诱导,诱导组细胞在呈典型的成骨细胞形态并有钙结节形成;免疫荧光染色结果显示诱导组细胞AKP和OPN均为强阳性表达,RT-PCR结果也显示诱导组细胞骨桥蛋白mRNA表达;两种特殊染色结果显示诱导组细胞有大量的钙盐沉积。而对照组细胞无上述形态改变和表达。结论人骨髓间充质干细胞在一定的诱导条件下能向成骨细胞分化。
- 牛云何旭张丽红林屹陈芦苇李玉林
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞骨桥蛋白
