中国博士后科学基金(2004035285)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：符伟军洪宝发朱晓应高江平史立新更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hTERT启动子调控的p53基因膀胱癌细胞靶向性表达载体构建及意义被引量：2
- 2006年
- 目的:构建人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的含有治疗基因的质粒,探讨在膀胱癌细胞株中特异性靶向转录表达及其潜在的临床意义。方法:将hTERT起始转录区上游的启动子序列克隆到含有绿色荧光蛋白(GFP)基因及含野生型p53基因的质粒上,分别构建成质粒phTERT-GFP及phTERT-p53。脂质体转染法瞬时转染膀胱癌细胞株T24,应用荧光显微镜、噻唑蓝(MTT)法等方法观察在转染细胞中的差异性表达及膀胱癌细胞生长的靶向性抑制作用。结果:在端粒酶阳性的膀胱细胞中观察到hTERT启动子调控的绿色荧光蛋白的靶向性稳定表达,转染hTERT启动子调控的野生型p53基因靶向性抑制膀胱癌细胞生长,但对端粒酶阴性的正常细胞无明显影响(P<0.05)。结论:成功构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因和GFP基因可在膀胱癌细胞T24中靶向性表达,hTERT启动子调控表达p53基因可靶向性抑制膀胱癌细胞生长。
- 符伟军史立新洪宝发王晓雄朱晓应潘进勇高江平
- 关键词：启动子基因疗法
- hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。
- 柳青符伟军王晓雄洪宝发高江平张磊蔡伟杨勇宋涛史立新
- 关键词：人端粒酶逆转录酶基因基因疗法
- 端粒酶启动子调控p53基因表达对T24细胞的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨端粒酶催化亚基(hTERT)启动子调控p53基因在膀胱肿瘤细胞T24中表达对细胞的影响。方法将成功构建的phTERT-p53载体,瞬时转染膀胱肿瘤T24细胞;应用流式细胞仪观察细胞凋亡率变化,透射电镜下观察细胞凋亡形态学改变。结果hTERT启动子调控p53基因表达使细胞凋亡率明显升高[24、48h凋亡率实验组15.42%、36.57%;转染绿色荧光蛋白基因(GFP)组5.16%、8.19%;阴性对照组4.49%、7.18%],电镜下观察到典型凋亡改变,凋亡指数达25%。结论hTERT启动子能够激活phTERT-p53载体表达p53,使肿瘤细胞凋亡增加。
- 朱晓应符伟军洪宝发林茂虎
- 关键词：启动子P53端粒酶
