教育部“优秀青年教师资助计划”(20030307012)
- 作品数：3 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：教育部“优秀青年教师资助计划”国家自然科学基金江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒R98弱毒株的分离鉴定与ORFs3～7基因特性研究被引量：6
- 2008年
- 从江苏某种猪场自北美引进的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体阳性临床健康仔猪血清中分离到1株病毒,经生物学特性测定、血清学试验、分子生物学鉴定、电镜观察及猪体致病性试验,鉴定为美洲型PRRSV类弱毒株。应用RT-PCR技术对该分离株ORFs3～7结构蛋白基因进行扩增、克隆与cDNA序列分析,结果表明该分离毒株的ORFs3～7基因序列与PRRSV-MLV弱毒株的相应基因同源性均达99.0%以上,属美洲型毒株。
- 李玉峰姜平蔡宝祥简中友
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征弱毒株结构蛋白
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株基因组序列测定和分析被引量：6
- 2006年
- 应用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV上海分离株S1毒株的4条基因大片段,扩增后的产物分别克隆于pCR-XL-TOPO载体鉴定后测序,同时应用RACE方法对S1毒株的3′和5′基因末端进行了成功的扩增并克隆于pMD-18T载体进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSVS1株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSVS1株基因组全长15441bp,包含9个开放式阅读框,5′UTR含有189nt,3′端UTR含有181nt,其中包含30ntPoly(A)。基因组序列分析结果显示该病毒与ATCCVR-2332和BJ-4分离株的核苷酸同源性分别99.5%和99.6%。与另一国内分离株CH-1a的核苷酸同源性为90.8%。
- 李玉峰姜平许家荣蒋文明
- 关键词：PRRSV基因组
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与免疫原性测定被引量：17
- 2006年
- 应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株S1毒株的GP5基因序列,然后通过KpnI和XhoI酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。重组穿梭载体经过酶切和PCR鉴定后进行测序,证明所克隆入的基因以正确的阅读框插入。获得的重组穿梭载体经线性化后与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183菌株。纯化的重组腺病毒质粒经酶切线性化后转染293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒经纯化后进行RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,证明了用PRRSVGP5蛋白基因所构建的重组腺病毒成功的表达了GP5蛋白。猪体免疫试验后收集血清进行中和实验证明所构建的重组腺病毒在猪体内能够诱导产生中和抗体,因此我们所构建的重组腺病毒可以作为PRRSV基因工程疫苗研究候选病毒株。
- 李玉峰姜平蒋文明汤景元
- 关键词：PRRSVGP5重组腺病毒
