国家自然科学基金(30671944)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 相关作者：刘力车昌燕赵艳张蕾张云更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院山西医科大学清华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科委重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 病毒感染的天然免疫识别机制被引量：1
- 2007年
- 近年来提出的病原体相关分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）以及识别PAMP的模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）标志着天然免疫应答的研究进入新阶段。病毒感染的天然免疫应答依赖于宿主对病毒PAMP的识别，Toll样受体家族和胞内其他病毒模式识别受体介导的天然免疫机制也成为探讨的热点。本文着重概括一些病毒模式识别受体的功能和信号转导途径的研究近况。
- 赵艳
- 关键词：病毒天然免疫模式识别受体信号转导
- NOK通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路(英文)被引量：8
- 2008年
- NOK能激活包含JAK-STAT信号通路在内的多种促细胞有丝分裂信号通路.研究发现,在人胚肾细胞(HEK293T)中,NOK与STAT3具有直接的相互作用.进一步的实验表明,NOK能同STAT3蛋白除螺旋结构域及C端结构域外的其他4个结构域发生相互作用,而NOK的胞内区则介导了NOK同STAT3的相互作用.同时,免疫共沉淀实验显示,NOK能与JAK2发生相互作用.重要的是,共同表达NOK与JAK2蛋白对STAT3信号通路能产生一种非常显著的协同激活作用,但当共同表达NOK和JAK2的激酶活性缺失突变体时,并不产生这种协同激活效应.综上,实验结果显示,NOK可能同STAT3和JAK2形成一个复合物,通过JAK2依赖性方式激活STAT3信号通路.
- 李颖华戎煜常智杰刘力
- 关键词：JAK2STAT3免疫共沉淀
- NOK与Akt相互作用并增强Akt的活化(英文)被引量：5
- 2008年
- NOK是一个新近鉴定的受体型蛋白酪氨酸激酶分子,它能够促进肿瘤的形成和转移.前期的研究表明,NOK在小鼠前B细胞(BaF3)中能够激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路.但是,人们并不清楚NOK在细胞内是如何激活PI3K信号通路的.研究发现,NOK与PI3K下游的效应分子蛋白激酶B(Akt)具有直接的相互作用.并且,在人胚肾细胞(HEK293T)中,NOK能明显增强Akt的活性.通过NOK缺失突变体的免疫共沉淀实验,确定了Akt能直接结合NOK的激酶结构域.同时,Akt的激酶活性缺失体并不影响其与NOK的结合,但也观察到,持续活化的Akt跟NOK具有更强的相互作用.最后,发现NOK对胰岛素介导的Akt激活并没有产生叠加效应.实验结果显示,NOK可以与Akt直接相互作用并增强PI3K/Akt信号通路的活化.
- 李颖华常智杰刘力
- 关键词：磷脂酰肌醇3-激酶
- 人白细胞介素23受体基因的克隆和原核表达
- 2008年
- 目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定。结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa。结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白。
- 车昌燕张国华赵燕张蕾张云王树惠刘力
- 关键词：融合蛋白
- 人细胞因子受体样因子3在真核及原核细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:观察CRLF3蛋白在293T细胞中的表达及亚细胞定位,并在大肠杆菌中表达和纯化了重组CRLF3蛋白。方法:将真核表达载体pCMV-myc-CRLF3瞬时转染293T细胞,转染24 h和48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位;构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CRLF3,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白。结果:CRLF3蛋白在293T细胞中高效表达,主要分布在细胞质和细胞膜;成功构建了表达CRLF3融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到Mr约为74 000的融合蛋白。结论:在真核细胞中过表达的CRLF3蛋白主要定位在细胞质和细胞膜;获得了重组GST-CRLF3融合蛋白,为进一步探讨CRLF3的功能奠定基础。
- 赵艳段素素车昌艳张蕾张云王树蕙刘力
- 关键词：真核表达原核表达蛋白纯化
- SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白,观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位。方法:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-RDRP,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白。构建真核表达载体pCMV-myc-RDRP瞬时转染293细胞,转染48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及WesternBlotting检测。结果:成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为121 kDa的融合蛋白。RDRP蛋白在293细胞中高效表达,主要分布在细胞质。结论:获得了重组GST-RDRP融合蛋白,为进一步探讨RDRP的功能奠定基础,在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质。
- 张蕾张海婧段素素赵艳车昌燕张云王树蕙刘力
- 关键词：原核表达真核表达蛋白纯化
- 人IL-23R胞外区基因的克隆及蛋白表达研究
- 2009年
- 目的克隆人IL-23R(hIL-23R)胞外区基因,并对其在Escherichia coliBL21(DE3)中的表达进行鉴定分析。方法通过PCR获得hIL-23R胞外区基因片段,将其克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(O)。重组质粒经双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测分析。结果获得全长为990 bp的hIL-23R胞外区基因,以构建的重组质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(O)转化E.coliBL21(DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白分子质量单位约为64 ku,Westernblot检测该蛋白能被兔抗GST多克隆抗体识别。结论成功构建了hIL-23R胞外区基因的原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R(O),并在E.coli中表达出重组蛋白,为进一步研究hIL-23R的功能奠定了实验基础。
- 车昌燕张国华刘力
- 关键词：克隆蛋白表达
- 人IL-23R胞内区基因的克隆与原核表达
- 2009年
- 目的克隆人IL-23R(hIL-23R)胞内区基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法通过PCR获得hIL-23R基因的胞内区片段,克隆至载体pGEX-4T-1中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(I),转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Westernblot进行鉴定。结果hIL-23R胞内区基因的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析可见约760bp的目的片段。重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约为55000,在低温(20℃)、低IPTG浓度(0.5mmol/L)诱导条件下能以可溶形式表达,可溶性蛋白的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的16.1%,且可被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功克隆了hIL-23R胞内区基因,并在大肠杆菌中表达了可溶性的GST融合蛋白。
- 车昌燕张国华刘力
- 关键词：胞内区基因克隆原核表达
- RNA沉默抑制子p19调控细胞周期相关蛋白表达(英文)被引量：2
- 2009年
- 番茄丛矮病毒的P19蛋白不仅是一个重要的病毒致病因子,而且还可作为RNA干扰(RNAi)的抑制子.这种作用是通过限制细胞内的小RNA,比如小干扰RNA(siRNAs)和微RNA(miRNAs)来实现.但是目前对P19蛋白在哺乳动物细胞上的作用还未见报道.构建了一株p19稳定表达的293细胞系,即293-p19.流式细胞仪分析发现在293细胞中过量表达P19蛋白可显著引发细胞周期的G2/M阻滞.细胞增殖实验显示,293-p19细胞的DNA复制及细胞生长均受到显著的抑制.此外,研究还发现p19可使人胚肾293细胞内的细胞周期调控子的表达谱发生改变.其中包括上调cyclinA1,CDK2,CDK4,CDK6,p18,cyclinD2,p19INK4d和E2F1,及下调p15,cyclinA,cyclinB1和cyclinE1的表达.上述研究结果提示,p19有可能靶向多个G2/M调控蛋白从而引发细胞的G2/M阻滞.
- 刘力李健徐玉萍乔文涛陈启民耿运琪
- 关键词：RNAIP19
