广东省农业攻关项目(2006B20501001)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 相关作者：罗立新王成司丽芳李娜黄建飞更多>>
- 相关机构：华南理工大学更多>>
- 发文基金：广东省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程理学更多>>
- 样品中未知物质分离鉴定方法的研究被引量：2
- 2011年
- 文中主要以鉴定嗜盐四联球菌主要的渗透保护物为例来说明研究样品中未知物质分离、鉴定的方法。首先通过查阅文献预测出待检测样品中可能含有的物质,经过薄层层析(TLC)进行初步的分离鉴定,排除部分物质;对可能存在的物质用高效液相色谱(HPLC)进行再次验证,同时检验样品的纯度,看是否可以用于进一步的分析;据此,可以初步判断出样品中可能含有物质的种类;再采用核磁共振(或质谱分析)等方法最终确定样品中的主要成分。试验通过这3步鉴定,最终确定了嗜盐四联球菌主要的渗透保护物质为甘氨酸甜菜碱,由此可以看出"查阅文献,找出可能存在的物质——TLC——HPLC——核磁共振(或质谱检测等)"这个流程对于确定样品中未知物质的种类是有效的。
- 王莉卢良坤丁喆罗立新
- 关键词：薄层层析高效液相色谱核磁共振
- 一株芽孢杆菌的分离鉴定及其在发酵酱渣研究中的应用被引量：3
- 2012年
- 从酱渣中筛选分离出一株芽孢菌株,通过生理生化实验以及16SrDNA鉴定其为地衣芽孢杆菌,将该菌种应用于发酵酱渣研究,表明用液态发酵方式较好,当酱渣与玉米淀粉比例为1∶1时,获得的活菌数较多。对添加辅料元素进行正交实验优化结果表明,当培养基中MgSO_4为3g/L,MnSO_4为2g/L,CaCO_3为3g/L时,培养基中的活菌数最多,为6.55×10~9cfu/mL。
- 王红涛罗立新张士伟
- 关键词：酱渣地衣芽孢杆菌液态发酵
- 一种新型食品级表达载体pLEB590表达小鼠mCu/ZnSOD的初步研究被引量：3
- 2009年
- 采用RT-PCR技术从小鼠肝脏总RNA扩增0.46kb的小鼠铜锌超氧化物歧化酶基因的cDNA序列,首先T-A克隆至大肠杆菌表达质粒pUC19,进行序列测定。再将mCu/ZnSOD cDNA亚克隆至以nisⅠ为食品级选择标记的乳酸乳球菌表达载体pLEB590中,用电穿孔法将重组质粒pLEB590-mCu/ZnSOD转化到乳酸乳球菌MG1614中,经SDS-PAGE和Westernblotting检测,获得了mCu/ZnSOD的组成型表达,并通过SOD酶活测定表明该重组菌表达的mCu/ZnSOD具有较好的生物活性。
- 罗立新王成施周铭
- 关键词：乳酸乳球菌超氧化物歧化酶
- 棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶的乳酸乳球菌表达被引量：4
- 2014年
- 构建棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶食品级分泌表达载体并在乳酸乳球菌MG1363(L.lactis MG1363)中实现表达。通过PCR扩增L.lactis MG1363基因组中分泌信号肽Usp45、质粒pLEB590的乳链菌肽(Nisin)抗性基因NisI和质粒pPIC9k-Abgl的棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶基因Abgl,PCR方法连接后获得片段Usp45-Abgl-NisI,将其克隆到质粒pMD19中,CaCl2法转化到E.coli DH5α,测序鉴定后将该片段连接到大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pMG36e中并转化到E.coli XL1-Blue,得重组子E.coli XL1-Blue/pMG36e-Usp45-Abgl-NisI。通过PCR方法敲除质粒pMG36e-Usp45-Abgl-NisI中红霉素抗性基因以构建食品级分泌载体pMG36N-Usp45-Abgl-NisI,将其电转到L.lactis MG1363中。转化子E.coli XL1-Blue/pMG36e-Usp45-Abgl-NisI能将β-葡萄糖苷酶分泌到胞外使七叶苷平板显色,L.lactis MG1363/pMG36N-Usp45-Abgl-NisI能在20 IU/mL Nisin上生长,经RT-PCR验证β-葡萄糖苷酶在乳酸乳球菌中实现表达。表明分泌型表达载体构建成功,为其在乳酸乳球菌中实现食品级活性表达奠定基础。
- 黄建飞成丽丽李娜司丽芳罗立新
- 关键词：棘孢曲霉Β-葡萄糖苷酶大肠杆菌分泌表达乳酸乳球菌
- 乳酸乳球菌Nisin抗性基因nisI的克隆及作为筛选标记被引量：4
- 2009年
- 【目的】以nisI作为食品级选择标记构建大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭载体。【方法】根据GenBank报道的乳链菌肽Nisin抗性基因nisI的序列,以pLEB590为模板,设计特异性引物,PCR扩增出nisI片段,经TA克隆、酶切鉴定及测序之后,亚克隆至大肠杆菌-乳酸乳球菌穿梭载体pMG36e中,重组子命名为pMG36e-NisI,再将pMG36e-NisI电转化至对Nisin敏感的乳酸乳球菌MG1363中。【结果】获得的重组菌MG1363/pMG36e-NisI在含有20IUNisin/mL的培养基中生长情况良好,遗传性能稳定,这表明nisI基因赋予了宿主菌MG1363对Nisin的抗性。【结论】nisI可以作为筛选标记用于食品级表达载体的构建。
- 罗立新王成
- 关键词：乳酸乳球菌
