广西壮族自治区科技攻关计划(1222003-2-4)
- 作品数：38 被引量：145H指数：7
- 相关作者：谢志勤谢芝勋罗思思谢丽基邓显文更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学广西师范大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西特聘专家专项经费资助项目广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H6亚型禽流感病毒套式 RT-PCR 检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 为建立一种H6亚型禽流感病毒(AIV)的套式RT-PCR检测方法,根据GenBank中H6亚型AIV HA基因序列,设计了4条特异性引物,优化反应条件,并对所建立的方法进行特异性和敏感性的检验,用该法对154份活禽市场样品进行检测。结果表明,所建立的套式RT-PCR方法对其他常见禽病病原体无扩增;对H6亚型AIV的最小检测限为1×102拷贝/μL,灵敏度比常规RT-PCR方法高100倍;154份样品的检测结果与病毒分离一致。所建立的H6亚型AIV套式RT-PCR检测方法具有特异性强和灵敏度高的特点。
- 周辰瑜谢芝勋罗思思刘加波谢丽基邓显文谢志勤范晴庞耀珊
- 关键词：套式RT-PCR
- 鸭坦布苏病毒和禽流感病毒多重PCR检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 本试验旨在建立一种同时快速检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)和所有亚型禽流感病毒(AIV),且可同时进行H9亚型AIV分型检测的多重PCR检测方法。针对Gen Bank中DTMUV NS2基因、所有亚型AIV的M基因和H9亚型AIV的HA基因的保守序列,分别设计了3对特异性引物,建立了DTMUV和AIV多重PCR检测方法。该方法对混有H9亚型AIV和DTMUV的模板进行PCR扩增,得到了3个大小与试验设计相符的特异性扩增条带,对其他鸭病病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该方法能检测到45 pg的DTMUV、7.6 pg的H9亚型AIV和76 pg的M基因。研究建立的多重PCR检测方法,具有快速、敏感、特异等优点,适用于临床检测的应用。
- 赵虹谢芝勋谢丽基谢志勤罗思思邓显文黄娇玲曾婷婷
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- H3亚型禽流感病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2015年
- 为建立快速、准确检测H3亚型禽流感病毒（AIV）的方法,根据GenBank中H3亚型AIV HA基因序列,设计出1对特异性引物,通过优化反应条件建立了H3亚型AIV二温式RT-PCR检测方法。对该法进行特异性、敏感性检测,并对256份临床样品进行检测。结果表明,该法只能扩增H3亚型AIV,对其他亚型AIV及常见禽病病原体不扩增;对H3亚型AIV检测下限为1×10-4拷贝/μL;256份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。与普通RT-PCR相比该法节省了30min,表明所建立的H3亚型AIV二温式RT-PCR方法是一种快速、简便和特异的检测方法。
- 刘婷婷谢芝勋宋德贵罗思思谢丽基李孟谢志勤邓显文
- H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立被引量：7
- 2013年
- 【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂(Calcein/MnCl2混合液),然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。
- 彭宜谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基范晴罗思思
- 关键词：H5亚型禽流感病毒荧光试剂
- H3N2亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2015年
- 为了建立一种简便、快速检测H3N2亚型禽流感病毒的方法,试验根据Gen Bank中H3、N2亚型禽流感病毒HA和NA基因保守序列,设计并筛选出2对特异性引物,通过优化反应条件建立H3N2亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法。结果表明:该方法既能同时特异性扩增出H3N2亚型禽流感病毒,也可扩增出H3、N2亚型禽流感病毒,而对其他亚型和常见禽病病原体均不扩增;该方法对H3N2亚型禽流感病毒的检测下限为10 pg;用该方法对96份临床样品进行检测,结果与病毒分离鉴定结果一致。说明试验所建立的H3N2亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高的特点。
- 刘婷婷谢芝勋宋德贵罗思思谢丽基李孟谢志勤邓显文
- 关键词：H3N2亚型禽流感病毒病毒分离敏感性
- 一株鸭源基因Ⅸ型新城疫病毒广西分离株的生物学特性及全基因序列分析被引量：2
- 2013年
- 为全面了解广西分离株GX19/2011的生物学和遗传特性,对分离株的鸡胚平均致死时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡胚静脉接种致病指数(IVPI)和对鸭的致病力进行测定,并对其全基因遗传特性进行研究研究。结果显示:该分离株的ELD50为10-9.48/0.1 mL、MDT为51.4h、ICPI为1.80、IVPI为2.82。使用该毒株分别感染35日龄和50日龄的鸭,发病率均为100%,死亡率分别为100%,70%。该毒株全长为15192bp,与F48E8和GD09-2等参考毒株的亲缘关系较近,均属于基因Ⅸ型。该分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117,具有强毒株的典型特征。生物学特性和遗传进化分析结果都表明该毒株为速发型强毒株,同时对鸭具有较强的致病力。
- 许宗丽谢芝勋谢丽基刘加波邓显文谢志勤庞耀珊范晴罗思思
- 关键词：新城疫病毒生物学特性全基因
- 同时鉴别6种鸡病毒性呼吸道病GeXP检测方法的建立被引量：7
- 2013年
- 为了建立一种能够同时鉴别H5、H7、H9亚型禽流感、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎6种鸡病毒性呼吸道传染病病原体的GeXP检测方法,本研究根据这些病原体各自的基因保守序列,设计合成了7对特异性引物,优化反应条件,用单一病毒、混合病毒样品来验证所建立的GeXP方法的特异性和准确性,以不同拷贝数的克隆质粒来检测GeXP方法的灵敏度。检测34份临床阳性样品,进一步验证该法的可靠性。结果显示,在7对引物同时存在的GeXP反应体系中,可特异性地扩增出相关6种病毒目的片段,并可在102拷贝/μL水平同时特异地检测出鸡6种病毒性呼吸道传染病,GeXP方法检测34份临床阳性样品结果与病毒分离一致。本研究建立的GeXP方法不仅可高通量检测6种病原体,而且具有特异性强和灵敏度高的特点,适用于临床样品混合感染的快速鉴别诊断,对这6种发病特征及临床症状相似的鸡病毒性呼吸道病的有效防控有很高的实际应用价值。
- 罗思思谢芝勋谢丽基庞耀珊范晴邓显文刘加波谢志勤
- 关键词：多重PCR
- 鸡毒支原体弱毒F株与强毒株二重荧光定量PCR鉴别检测方法的建立被引量：5
- 2012年
- 研究根据基因库中鸡毒支原体(MG)S6毒株和F株的基因保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的二重荧光定量PCR检测方法,与其它禽类呼吸道病原体无交叉反应,对MG模板的灵敏度检测限为10拷贝/μL,对MG强弱毒模板以不同的浓度进行组合,仍可有效地检测到毒株,批内和批间重复变异系数小,特异性强、灵敏度高、稳定性好。研究建立的二重荧光定量PCR方法可用于MG强、弱毒株的鉴别检测,为该病的防控与净化提供良好工具。
- 罗思思谢芝勋邓显文谢丽基谢志勤庞耀珊刘加波范晴
- 关键词：鸡毒支原体
- H3N8亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 为建立简便、快速检测H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的方法,本研究根据H3和N8亚型AIV的HA和NA基因保守序列,设计合成了2对特异性引物和2条Taq Man探针,通过优化反应条件建立了H3N8亚型AIV一步法实时荧光定量RT-PCR。结果表明:该方法敏感型好,对H3N8亚型AIV检测敏感性达100个模板拷贝数。该方法特异性强,仅对H3和N8亚型AIV检测为阳性;应用该方法对96份临床样品进行检测,结果与病毒分离鉴定结果一致。因此,本研究建立的H3N8亚型AIV一步法实时荧光定量RT-PCR检测方法具有简便、快速、敏感和特异等优点,可为H3N8亚型AIV感染的有效防控提供技术支撑。
- 刘婷婷谢芝勋宋德贵谢志勤邓显文谢丽基黄莉罗思思黄娇玲曾婷婷
- 关键词：禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR
- 禽流感病毒H9N2亚型三重PCR检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 为建立简便快速检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)并同时区分出H9、N2亚型的方法,本试验根据基因库中H9亚型AIV的HA基因、N2亚型AIV的NA基因及AIV的M基因序列,分别设计了3对针对这3种基因保守序列的引物,建立了AIV H9N2亚型的三重PCR检测方法。应用该方法对H9N2亚型AIV模板进行PCR扩增,可得到3条与试验设计相符的目的条带,分别为313bp(HA基因)、451bp(NA基因)和667bp(M基因);对非H9亚型的N2亚型AIV模板进行扩增,出现2条特异性扩增条带,即451bp(NA基因)和667bp(M基因);对非H9、N2亚型AIV模板进行扩增则只出现一条目的条带,即667bp(M基因);对其他禽呼吸道病原体进行PCR扩增,结果均为阴性。敏感性试验结果显示此三重PCR方法最低检出限为10-2 ng/μL。应用所建立的三重PCR方法对120份临床病料进行检测的结果与病毒分离鉴定结果一致。各项试验结果均表明,该方法对于禽流感病毒尤其是H9、N2亚型禽流感病毒的检测具有快捷、特异、灵敏的特点。
- 徐倩谢芝勋谢丽基罗思思黄莉黄娇玲曾婷婷谢志勤邓显文
- 关键词：禽流感病毒H9亚型M基因三重PCR
