国家自然科学基金(31300798)
- 作品数：11 被引量：46H指数：4
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- 软骨组织工程用羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠复合水凝胶的制备及体外评估被引量：7
- 2019年
- 目的优化羧甲基壳聚糖/氧化海藻酸钠(CMCS/OSA)复合水凝胶制备工艺,并应用于软骨组织工程。方法制备氨基与醛基比例分别为2:1、1:1、1:2的CMCS/OSA复合水凝胶,并通过扫描电子显微镜观察、流变学检测、黏附拉力测试、溶胀率分析及细胞实验等方法评价复合水凝胶的微观形态、物理特性以及生物相容性,以制备满足软骨再生领域需求的水凝胶。结果氨基与醛基比为1:1时,制备出的水凝胶具有良好的孔隙率、适宜的成胶时间、较强的黏附力及稳定的溶胀率等性质,对细胞有良好的生物相容性。结论氨基与醛基比为1:1时制备出的CMCS/OSA复合水凝胶是软骨组织工程优异的支架材料。
- 李云洁滕彬宏赵艳红杨强王连永黄颖
- 关键词：羧甲基壳聚糖水凝胶脐带间充质干细胞软骨组织工程
- 羊纤维环部分缺损动物模型的构建被引量：4
- 2016年
- 目的：建立可用于椎间盘缺损修复研究的纤维环部分缺损动物模型。方法使用image J 1.46r软件测量5根羊脊柱X线片T12/L1～L6/S1椎间隙高度，轴向剖开T12/L1～L6/S1椎间盘，测量拟作缺损处纤维环厚度，使用11号尖刀在3根离体羊脊柱T12/L1～L5/6椎间盘左前方制作上底3 mm、下底5 mm、高5 mm、厚3 mm，下底朝向髓核的梯形缺损，上述羊脊柱均取自1岁龄绵羊。采用微创外侧手术入路在2只1岁龄绵羊T12/L1～L5/6椎间盘左前方制作相同规格的梯形缺损。通过轴向剖开椎间盘测量梯形缺损的边长、对切取的纤维环和少量髓核称质量，以此评估所制作的椎间盘梯形缺损。结果绵羊腰椎间隙高度为（4.45±0.28）mm，拟作缺损处纤维环厚度为（4.08±0.50） mm，分别与拟作梯形缺损的厚度（3 mm）和高度（5 mm）差异有统计学意义（P〈0.05）；离体羊腰椎间盘梯形缺损的上底（3.03±0.09）mm、下底（5.03±0.09）mm、高度（4.97±0.10）mm和厚度（3.02±0.06）mm分别与梯形缺损预定值（上底3 mm、下底5 mm、高度5 mm和厚度3 mm）之间的差异无统计学意义（P〉0.05）；从离体和在体的羊腰椎间盘梯形缺损处取出的纤维环及髓核质量分别为（0.162±0.011）g和（0.166±0.014）g，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。结论通过微创外侧手术入路，使用实验中制作梯形缺损的方法可以简单、安全、可靠地制作出符合要求、能用于椎间盘缺损修复研究的羊纤维环部分缺损的动物模型。
- 袁秋明徐宝山杨强刘越姜洪丰张杨杜立龙祁霁舟赵家宁马信龙
- 关键词：椎间盘切除术绵羊
- 下颌骨形态与下颌第三磨牙阻生的相关性被引量：11
- 2014年
- 目的 研究下颌形态与下颌第三磨牙阻生的相关性.方法 选取97例20～40岁正畸患者,治疗前拍摄X线全景片和头颅定位侧位片,根据下颌第三磨牙是否阻生分为阻生组、萌出组.测量两组下颌骨多个变量进行方差分析,应用Person相关性分析确定下颌智齿阻生的危险因素.结果 阻生组下颌体长度（Go-Po＇）、前下面高（ANS-Me）、下颌平面角（MP-FH）小于萌出组,而下颌支宽度（W）、下颌支长度与下颌骨长度的比值（Co-Go/Co-Po）大于萌出组,P均≤0.05;两组Co-Po、Co-Go比较;P均＞0.05.Person相关性分析显示,W、MP-FH中度负相关.结论 下颌第三磨牙的阻生与下颌骨形态有关,W、MP-FH可以作为预测下颌第三磨牙是否萌出的指标.
- 付雅丽隋华超王春玲
- 关键词：下颌第三磨牙头影测量阻生
- 模拟体液仿生矿化法制备的羟磷灰石-壳聚糖支架的性能研究被引量：3
- 2016年
- 目的应用模拟体液(SBF)仿生矿化法制备羟磷灰石(HA)-壳聚糖支架,探讨矿化时间对HA-壳聚糖支架结构及细胞相容性的影响。方法应用冷冻干燥法制备壳聚糖支架,将该支架应用交替浸泡法进行预钙化,然后浸入SBF中进行矿化,控制矿化时间分别为7、14、21 d,即为3组实验组,以单纯壳聚糖支架为对照组,检测4组支架的理化性质。再将经过成骨诱导后的脂肪基质干细胞(ADSCs)接种到HA-壳聚糖支架上,检测不同矿化时间支架的细胞相容性。结果矿化14 d,HA-壳聚糖支架的矿化物分布均匀,晶体组成符合HA特征,压缩弹性模量随着矿化时间的延长而增强,在矿化21 d时其压缩弹性模量与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。矿化14 d,ADSCs的增殖量最多,与其他实验组的差异均有统计学意义(P<0.05);其钙离子和Ⅰ型胶原的分泌量也最多。结论SBF仿生矿化法可用于制备HA-壳聚糖骨组织工程支架,该支架在SBF中矿化14 d左右时其生物相容性及理化性质可达到最佳状态。
- 许可赵艳红李洪发
- 关键词：仿生矿化羟磷灰石壳聚糖
- 含软骨钙化层的仿生支架体内构建组织工程骨软骨被引量：4
- 2018年
- 目的以丝素蛋白（silk fibroin，SF）和羟基磷灰石（hydroxyapatite，HA）为材料制备含软骨钙化层（calcified cartilage layer，CCL）的仿生骨软骨支架，接种兔脂肪干细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs），评估CCL在体内修复中起到的作用，探讨这一设计组合作为骨软骨组织工程理念的可行性。方法以SF／HA为材料，采用石蜡微球沥滤和定向结晶（thermally induced phase separption, TIPS）结合技术，制备含软骨钙化层的多相一体化仿生支架，通过扫描电镜、micro—CT进行观察，测定支架软骨层和成骨层的孔径、孔隙率和压缩弹性模量；ADSCs接种到支架上，建立兔双侧膝关节骨软骨缺损模型，分别植入CCL支架组、non．CCL＋ADSCs组（不含CCL的支架复合自体ADSCs）和CCL＋ADSCs组（含CCL的支架复合自体ADSCs），分别在术后4、8、12周取材，进行大体观察评分、组织学和免疫组化评估、新生骨组织Micro．CT扫描，评估各组兔膝关节骨软骨缺损修复效果，对比分析CCL在体内修复中起到的作用。结果含CCL的仿生骨软骨支架由层次鲜明的“透明软骨-CCL-软骨下骨”组成，各层连接紧密。软骨层具有明显的取向微孔结构，分布均匀，孔径（112．43±12．65）μm，孔隙率为90．25％±2．05％；软骨下骨层具有良好的三维大孔结构，连通性好，孔径（362．23±26．52）μm，成骨层孔隙率为85．30％±1．80％；CCL＋ADSCs组软骨再生情况优于non-CCL＋ADSCs组，组织学和免疫组化染色可见GAG和Ⅱ型胶原表达较non-CCL＋ADSCs组高；新生骨组织分析、生物力学性能测试在两组间未见明显差异。结论含CCL的SF／HA仿生骨软骨支架模仿正常骨软骨组织结构，具有良好的三维孔隙结构和生物相容性。该支架复合自体来源的ADSCs成功修复兔膝关节骨软骨缺损，CCL的存在加速软骨组织的生长。
- 杨强丁晓明徐宝山张杨赵艳红胡永成杜立龙王连永马信龙
- 关键词：软骨丝素蛋白羟基磷灰石类
- 不同方法诱导兔脂肪干细胞向软骨细胞分化的对比研究被引量：1
- 2014年
- 目的 分别用细胞共培法和诱导液培养法诱导脂肪干细胞（adipose-derived stemcells,ADSCs）向软骨细胞分化,比较两种方法的诱导效果.方法 分离培养新西兰大白兔ADSCs和软骨细胞,分别培养至第2代用于实验.根据实验目的将实验分为三组：（1）对照组：将ADSCs接种于6孔板,普通高糖培养液培养;（2）细胞共培组：将软骨细胞和ADSCs分别接种于Transwell6孔板的上层和下层,普通高糖培养液共同培养;（3）诱导液培养组：将ADSCs接种于6孔板,用软骨诱导液进行培养.倒置显微镜观察各组ADSCs的形态变化,14d后行甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化,实时荧光定量PCR测定软骨细胞相关基因（蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、SOX9）的表达情况.结果 细胞共培组和诱导液培养组ADSCs逐渐变为软骨样细胞形态,甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性,其中诱导液培养组染色更深,对照组为阴性.荧光定量PCR结果显示Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9的基因转录水平细胞共培组（1.427±0.066,2.128±0.076,1.082±0.081）和诱导液培养组（3.438±0.108,4.297±0.147,2.929±0.090）明显高于对照组（0.040±0.021,0.128±0.038,0.098±0.022） （P ＜0.05）,且诱导液培养组高于细胞共培组（P＜0.05）.结论 细胞共培法和诱导液培养法均可诱导ADSCs向软骨细胞定向分化,诱导液培养法诱导效果更好.
- 许海委徐宝山杨强夏群李秀兰张杨马信龙伍耀宏刘子颐
- 关键词：干细胞软骨细胞细胞诱导
- 仿生大孔骨支架的制备及生物相容性评估被引量：1
- 2019年
- 背景:骨组织工程的发展,为解决骨缺损修复提供了新手段,而其中的支架载体选材和结构构建是目前的热点问题。目的:采用石蜡微球沥滤技术制备具有仿生大孔结构的丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架,分析其细胞相容性。方法:以丝素蛋白和纳米羟基磷灰石为原料,采用石蜡微球沥滤技术制成具有仿生大孔结构的丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架,利用体式显微镜和扫描电镜观察支架结构,测量支架的弹性模量。将第3代兔脂肪间充质干细胞接种于丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架上,培养48 h后,LIVE/DEAD染色观察细胞活性;培养1周,苏木精-伊红染色观察细胞黏附情况;培养3 d,扫描电镜观察支架-细胞复合物;培养1,3,5,7 d,CCK-8法检测细胞增殖,以单纯细胞培养为对照。结果与结论:①体式显微镜下可见丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架呈乳白色,扫描电镜显示无论在支架横截面还是纵切面上,均可见均匀排列的大孔结构,连通性好,支架孔径为(362.23±26.52)μm,弹性模量为(54.93±5.44) kPa;②扫描电镜显示,脂肪间充质干细胞能够很好地在支架孔壁及连通孔隙内黏附和伸展,分泌大量细胞外基质,填充在丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架孔隙内;③苏木精-伊红染色显示,脂肪间充质干细胞均匀黏附在丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架孔隙内壁上,并且大量增殖;④LIVE/DEAD染色显示脂肪间充质干细胞活性良好;⑤CCK-8检测结果显示,脂肪间充质干细胞在丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架可良好地生长与增殖;⑥结果表明,丝素蛋白/纳米羟基磷灰石支架具有良好的孔径与细胞相容性。
- 李智谭春华蔡贤华王华松丁晓明赵艳红
- 关键词：丝素蛋白羟基磷灰石细胞黏附羟基磷灰石类细胞粘附生物相容性材料
- 取向性丝素蛋白支架复合脂肪干细胞体外构建组织工程软骨被引量：7
- 2015年
- 目的探讨丝素蛋白支架复合脂肪干细胞体外构建组织工程软骨的可行性。方法以丝素蛋白为原料制作具有仿生取向微孔结构的支架，接种第3代兔脂肪干细胞，加入成软骨诱导液进行培养。CCK-8检测诱导液对细胞增殖的影响，组织学及Ⅱ型胶原免疫组化染色观察脂肪干细胞的基质分泌，Elisa定量检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原分泌量，实时定量PCR检测软骨特定基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖和Sox-9的表达水平，并检测支架的力学性能。结果扫描电镜下支架纵切面为平行排列的微管样结构，横切面为椭圆或圆形孔隙结构。脂肪干细胞在支架上黏附良好，随诱导时间延长分泌大量取向分布的细胞外基质。脂肪干细胞在支架上呈对数生长趋势，成软骨诱导组吸光度值在诱导第7天、第21天高于普通培养基组。组织学及免疫组化染色结果在诱导第21天均呈阳性。诱导第21天蛋白多糖含量[（15．89±1．64）μg／mg]和Ⅱ型胶原含量[（1．89±0．28）μg／ms]高于诱导第7天[（5．02±0．91）μg／mg和（0．28±0．08）μg／mg]，第7天高于第0天[（0．77±0．25）μg／mg和（O．12±0．05）μg／ms）]。Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、Sox-9的基因表达水平在第21天均高于第0天和第7天。第21天支架纵向压缩弹性模量为（84．41±7．12）kPa，高于第0天的（52．48±5，78）kPa和第7天的（59．30±6．43）kPa。结论取向性丝素蛋白支架接种成软骨诱导的脂肪干细胞能够在体外构建组织工程软骨，并能提高支架的力学强度。
- 杨强丁晓明徐宝山赵艳红刘越张杨胡永成马信龙
- 关键词：软骨丝素蛋白干细胞
- PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记,并对标记后细胞的活性、荧光强度(0、14、28 d)、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为(1.56±0.35)×106/g,倒置显微镜下,原代细胞培养4 d开始贴壁,细胞成群生长,14 d铺满瓶底,原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态;P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性;PKH26标记前后细胞活性均在95%以上,1、14、28 d呈递减趋势,但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光,标记后的细胞增殖及基因表达(Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖)与标记前的细胞相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞,且具有软骨样细胞的表型,可以用作种子细胞;PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化,可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。
- 丁晓明徐宝山伍耀宏许海委杨强马信龙张春秋李秀兰张扬
- 关键词：椎间盘牛尾髓核细胞PKH26
- 基于细胞外基质来源的组织工程椎间盘双相支架裸鼠皮下异位构建椎间盘被引量：1
- 2014年
- [目的]探讨椎间盘细胞和细胞外基质来源的一体化纤维环-髓核双相支架在裸鼠体内异位构建组织工程一体化椎间盘的可行性,并采用PKH26荧光标记和小动物活体荧光成像系统无创评估组织工程化细胞-支架复合体在体内生长情况。[方法]纤维环细胞和髓核细胞分别标记PKH26荧光,分别接种入细胞外基质来源的一体化支架不同相中,扫描电镜、Dead/Live荧光染色观察细胞粘附及活性,植入裸鼠背部皮下,6周后利用分子小动物活体荧光成像系统评价组织工程化组织在裸鼠体内生长情况,取材进行荧光显微镜下观察、组织学染色。[结果]扫描电镜观察细胞粘附在双相支架上且周围有基质分泌,Dead/Live染色示细胞在双相支架上活性良好;6周后,活体荧光成像显示椎间盘细胞在支架内生长良好,从髓核往纤维环荧光强度减弱,细胞支架复合体在裸鼠体内形成椎间盘样组织,HE、番红O染色、甲苯胺蓝染色阳性。[结论]天然骨基质明胶和软骨基质来源的一体化纤维环-髓核支架复合椎间盘细胞能够在裸鼠皮下异位构建椎间盘样组织。
- 祁霁舟徐宝山张杨伍耀宏马信龙张春秋李秀兰
- 关键词：椎间盘细胞外基质PKH26裸鼠
