福建省科技计划重点项目(2010Y0058)
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
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- 三聚氰胺多克隆抗体的制备、分离纯化及ELISA方法的测试研究被引量：6
- 2011年
- 目的:制备具有高特异性的三聚氰胺多克隆抗体,建立三聚氰胺快速检测方法。方法:通过抗原偶联嫁接技术,将不具备免疫原性的三聚氰胺与特定蛋白连接,制备免疫抗原(MB1st、MB2st、KM和ML2)。对家兔进行皮下多点注射,初次免疫后取抗体血清,用SDS-PAGE检测血清中IgG的产生情况。采用酶联免疫吸附法测定各抗体血清的效价,最终以亲和层析法纯化血清,获得高特异性的抗体。将纯化后的抗体包被于酶标板上,建立三聚氰胺ELISA方法,并验证其有效性。结果:通过SDS-PAGE证明免疫前、后血清中IgG显著增长。进一步使用间接ELISA法测得各兔血清效价。MB1st免疫的效果最佳,其抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的36.97%上升至纯化后的75.57%。MB2st免疫的抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的30.80%上升至纯化后92.43%。KM免疫的抗体血清效价较低,其对三聚氰胺的竞争率由纯化前的11.95%上升至纯化后的96.09%。ML2免疫效价低,且其抗体血清在纯化前、后均对三聚氰胺没有显著的竞争性。由此建立ELISA方法,并初步验证了该方法的有效性。结论:本试验中制备的三聚氰胺抗体血清,经分离、纯化后得到对三聚氰胺具有较高竞争性的多克隆抗体,为建立酶联免疫方法,以检测食品中三聚氰胺含量提供了理论基础。
- 李昊翁惠玲黄启龙沈晓妙高小尧严晟旻张志善王浙峰饶平凡
- 关键词：三聚氰胺多克隆抗体酶联免疫吸附特异性
