长江学者和创新团队发展计划(IRT0731)
- 作品数：49 被引量：135H指数：6
- 相关作者：姜勇邓鹏胡水旺刘靖华刘芸更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学南方医院东北林业大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学金属学及工艺更多>>
- 基于TAP技术的TAT-PTD相互作用膜蛋白的筛选与鉴定
- 目的:基于串联亲和纯化（tandem affinity purification,TAP）技术的原理,利用硫酸乙酰肝素的类似物—肝素进行干预,筛选与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒（HIV-1）的反式转录激活因子（trans-act...
- 邓鹏冯国开刘芸吴向玲姜勇
- 文献传递
- 小鼠肝脏细胞质膜蛋白质组的提取和二维液相色谱分离
- 2008年
- 目的提取小鼠肝脏细胞质膜蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离细胞质膜蛋白质组的方法。方法采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心分离和富集分小鼠肝脏细胞质膜蛋白,样品经脱盐及用起始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后收集pH8.5～4.0之间的组分进行二维反相高效液相色谱分离,最后将获得的二维UV图通过ProteoVue软件转换成UV/pI图谱。结果成功提取了肝脏细胞质膜蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了小鼠肝脏细胞质膜蛋白的二维UV/pI图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pH8.5～4.0区间的16个组分,并将每个组分分进行二维色谱分离后转换为UV/pI图谱。结论为进一步全面研究小鼠肝脏细胞质膜蛋白功能和疾病差异蛋白质组研究打下了基础。
- 李红梅陈丽夏高晓赵明哲胡水旺姜勇
- 关键词：二维液相色谱蛋白质组肝脏
- 过氧化物酶蛋白1真核表达载体构建及在Hela细胞的表达与定位
- 2012年
- 目的:构建过氧化物酶蛋白1(PRDX 1)的真核表达载体,观察其在Hela细胞内表达及定位。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法扩增得到小鼠PRDX 1编码序列,酶切后克隆至pcDNA3-myc载体。重组质粒通过PCR、酶切、测序证明构建正确后经脂质体转染Hela细胞,然后利用Western blot和荧光显微镜技术观察该融合蛋白在细胞内表达及定位。结果:经鉴定证明重组质粒构建正确;Western blot实验显示,该质粒能够在Hela细胞中特异表达;免疫荧光试验显示,蛋白产物分布在胞浆和胞核,证明该蛋白在细胞内高表达。结论:成功构建带有myc标签的PRDX 1真核表达载体,该质粒能够在哺乳细胞中特异表达并且外源性PRDX 1蛋白分布在Hela细胞胞浆胞核内,为深入研究PRDX 1蛋白在细胞内相关生物学研究奠定了基础。
- 刘震西康瑞霞刘芸胡水旺樊启黄李玉花姜勇
- 关键词：分子克隆
- 细胞信号转导的组学研究策略
- 细胞信号系统(cell signaling system)控制着细胞的代谢、增生、分化、迁移、细胞凋亡、炎症反应和应激适应等功能活动。在真核细胞,各种细胞过程往往并非单个信号转导分子或单一信号通路就能完成的,而是受到多个...
- 姜勇
- 关键词：蛋白质组学信号转导网络蛋白质-蛋白质相互作用质谱分析
- 文献传递
- p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响被引量：6
- 2012年
- 目的:观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO2)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO2诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法:用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO2刺激p38+/+和p38-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果:SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多;p38+/+和p38-/-细胞受NaAsO2刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少;p38+/+细胞受NaAsO2刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而p38-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论:SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO2刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO2诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。
- 叶萍蔡军伟付晓霞崔航刘亚伟陈小欢罗海华李煜生刘芸姜勇刘靖华
- 关键词：亚砷酸钠P38MAPK通路
- p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂研究进展被引量：18
- 2009年
- p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞内应激反应信号通路,与炎症反应密切相关。炎症反应失控是很多疾病产生的重要原因之一,传统抗炎药物的严重副作用使得寻找强效、安全的抗炎药物极为迫切。通过抑制剂调节信号通路的炎症药物研发成为目前发展的趋势,而p38MAPK的中心地位使其成为首选靶点。p38MAPK抑制剂和p38MAPK的研究进展相辅相成,发展迅速。已报道的100多种不同化学结构的p38MAPK特异性抑制剂中已有20多种进入临床试验阶段,但至今尚没有一种化合物被批准应用于临床治疗。我们讨论了p38MAPK抑制剂的研究现状和研究策略。
- 王国军刘亚伟李玉花姜勇
- 关键词：炎症
- 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱
- 具有细胞穿透功能的串联亲和层析分离载体的构建与功能鉴定
- 2010年
- 目的建立基于抗生蛋白链菌素结合肽(SBP)-钙调蛋白结合肽(CBP)分离标签以及细胞穿透肽转录反式激活因子(TAT)和绿色荧光蛋白(GFP)原核表达系统的、具有细胞穿透功能的原核串联亲和层析分离系统。方法应用PCR方法,以pEG-FP-C2载体为模板扩增EGFP序列,以pNTAP载体为模板扩增CBP-SBP序列,采用退火方法得到TAT片段,采用常规酶切、连接方法将EGFP、CBP-SBP和TAT片段依次克隆入pET14b-MCStop载体中,酶切、PCR和测序鉴定无误后,得到pET14b-CBP-SBP-EGFP-TAT重组质粒。将重组质粒转化BL21(DE3)大肠埃希菌,以IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析纯化获得融合蛋白,将不同浓度的融合蛋白加入培养的人肝癌细胞株(HepG2)检测融合蛋白的穿细胞膜功能。结果所构建的pET14b-MCS-CBP-SBP-EGFP-TAT融合蛋白表达载体正确,该载体可在大肠埃希菌内高效表达,用Ni2+-NTA纯化获得了相对分子量约40kD的目的融合蛋白。细胞功能实验结果表明融合蛋白能够穿越细胞膜,且具有浓度依赖性。结论成功构建了pET14b-MCS-CBP-SBP-EGFP-TAT融合蛋白表达载体,并获得了具有良好穿透真核细胞膜功能的融合蛋白,为进一步研究细胞内蛋白相互作用、细胞穿透肽TAT的功能及其穿透细胞的机制奠定了基础。
- 邓鹏刘芸李涛吴向玲刘亚伟姜勇
- 髓样相关蛋白8的内化机制研究
- 目的:MRP8蛋白是钙结合蛋白S100家族成员之一,其单体包含两个EF手型基序。MRP8具有丰富的生物学功能,与炎症高度相关,是许多急性和慢性炎症的重要调控因子。MRP8参与炎症、应激等反应的分子基础,尤其是相关信号过程...
- 吴丽琼刘铮刘爱华邓鹏姜勇
- 关键词：内化机制
- 文献传递
- 串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨
- 2009年
- 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。
- 刘芸邓鹏刘铮徐佳吴向玲姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1
