云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目(2005PY01-24)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李鸿钧孙茂盛张光明谢天宏奎翔更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达被引量：1
- 2008年
- 将甲肝病毒vp1编码基因（aa 24-171）和戊型肝炎病毒ORF2基因（aa 431-615）通过一段编码柔性甘氨酸链（Gly4 Ser Gly4）的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因（AEAg342）.将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础.
- 奎翔李鸿钧谢天宏张光明刘馨易山杨芳彭梅马开利孙茂盛
- 关键词：甲型肝炎病毒戊型肝炎病毒基因克隆
- 甲/戊型肝炎重组抗原的表达、纯化及与传统甲肝疫苗免疫原性的比较被引量：1
- 2010年
- 目的比较基因工程重组抗原与传统疫苗的免疫原性;探讨同一载体表达不同抗原的能力和抗原间的相互作用。方法将编码甲型肝炎病毒Vp1aa24-171和戊型肝炎病毒ORF2aa431-615的重组表达质粒pBV220-EAAg342及pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL-21,筛选出高效表达的菌种进行目的蛋白的表达。用DEAE-sepharose FF和CM-sepharoseFF离子层析交换柱纯化表达重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting方法进行分析鉴定。用纯化的重组蛋白及传统甲肝疫苗灭活疫苗与减毒活疫苗免疫小鼠,比较特异性抗体的产生水平。结果表达的重组蛋白相对分子质量约为36000,表达量约占菌体总量的25%;且重组嵌合抗原EAAg342可以形成直径10～20nm的类病毒(virus-like particles,VLP)颗粒。Western blotting证实2种重组蛋白均能分别与甲型肝炎和戊型肝炎患者阳性血清发生特异性反应。免疫小鼠后可诱导产生高滴度的抗戊肝特异性抗体;而抗甲肝特异性抗体水平与传统甲肝疫苗相比较低。结论使用原核系统表达的甲/戊肝重组抗原能够高效表达,2种不同的融合蛋白均分别具有良好的抗原性和免疫原性,具有开发双价疫苗及同时诊断甲型戊型肝炎试剂盒的前景。
- 庞媛玉李鸿钧奎翔谢天宏张光明孙茂盛
- 关键词：甲型肝炎病毒戊型肝炎病毒免疫原性
- Neurturin嵌合神经营养因子重组腺病毒的构建及体外活性测定被引量：2
- 2010年
- Neurturin是神经营养因子家族成员,研究发现体外表达的重组Neurturin能够促进多巴胺能神经元的存活,对帕金森氏病的基因治疗有重要意义。但有研究指出野生型Neurturin在细胞中不能完成加工进而不能被分泌到胞外。因此实验对野生型Neurturin进行改造,将NGF的信号肽与Neurturin的成熟肽进行拼接,形成一种嵌合的NGF/NTN基因,并将该基因插入重组腺病毒基因组中,在AD-293细胞中包装获得重组腺病毒。通过免疫荧光和Westernblotting证实Neurturin能够在胞内表达,并且能够对其进行加工最后分泌至胞外。最后通过鸡胚背根神经节培养实验证明该嵌合基因能够表达具有明显活性的Neurturin。
- 王文举孙茂盛严敏李鸿钧
- 关键词：NEURTURIN嵌合基因重组腺病毒体外活性帕金森氏病
