国家自然科学基金(31271995)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 相关作者：曾会才陈汉清曾涛袁贵祥郭素霞更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学广东省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 巴西蕉诱导的香蕉枯萎病菌1号和4号小种致病相关基因表达分析被引量：1
- 2015年
- 目前对于香蕉枯萎病菌的致病分子机制尚不十分清楚。为了阐明枯萎病菌的致病分子机制,从香蕉枯萎病菌1号(Foc1)和4号小种(Foc4)的比较蛋白质组学分析发现的表达量差异较大的蛋白中,选取了9个致病相关蛋白或潜在的致病基因,利用荧光定量PCR方法进行基因表达谱分析。结果显示:与对照相比,巴西蕉处理的Foc4中,上调表达的基因有:酰胺转移酶基因(amidotransferase)、线粒体过氧化物还原酶基因(mitochondrial peroxiredoxin)、几丁质酶基因(chitinnase 1)、羧肽酶基因(carboxypeptidase cpds),差异表达不明显的有腺苷激酶基因(adenosine kinase)、NADP-依赖型甘油脱氢酶基因(NADP-dependent glycerol dehydrogenase)、磷酸甘油酸激酶基因(phosphoglycerate kinase)、谷胱甘肽还原酶基因(glutathione reductase)、酰胺酶基因(amidase family protein)。Foc1中,与对照相比,上调表达的基因有:腺苷激酶基因、NADP-依赖型甘油脱氢酶基因,下调表达的基因有:酰胺转移酶基因、羧肽酶基因。综合分析显示,酰胺转移酶、过氧化物酶、几丁质酶、羧肽酶基因可能在Foc4的致病作用中起作用。
- 肖义炜李春强李文彬孙建波曾会才彭明
- 关键词：香蕉枯萎病尖孢镰刀菌古巴专化型致病相关基因
- 尖镰孢古巴专化型Focr4-1701突变体的生物学表型研究被引量：5
- 2013年
- 由尖镰孢古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)引起的香蕉枯萎病是香蕉生产中的毁灭性病害之一。Foc有4个小种,其中4号小种(Focr4)因其寄主范围广且无高抗病性的香蕉品种,对香蕉产业的危害最大,其致病机制至今尚不清楚。为研究其致病机制,本文对Focr4野生型菌株(Focr4-193-6)、因其T-DNA插入导致致病性严重减弱的突变体Focr4-1701、T-DNA插入标签基因敲除子△Focr4-1701及敲除基因互补子△Focr4-1701-cp-1为材料,从致病性测定、玻璃纸穿透试验、孢子形态观察、产孢量与孢子萌发率测定、粗毒素测定等方面对其与致病性相关的生物学表型进行了测定。结果表明:T-DNA插入突变体Focr4-1701和基因敲除突变体△Focr4-1701接种后的香蕉植株叶片没有表现发病症状,敲除基因互补菌株与野生型菌株一样表现出发病症状;T-DNA插入突变体和基因敲除突变体不能穿透玻璃纸生长,T-DNA插入突变体及基因敲除突变体在产孢量、孢子萌发率和产毒素能力上均极显著低于野生型菌株及互补菌株。这些表型性状差异说明Focr4-1701致病性严重减弱可能是T-DNA插入位点标签基因失活后导致了菌丝体侵染能力下降及产毒素能力降低造成的。
- 蒋艳琴曾涛陈汉清林妃袁贵祥郭刚曾会才
- 关键词：香蕉枯萎病菌突变体生物学特性
- 香蕉枯萎镰刀菌致病性快速测定方法的建立被引量：4
- 2015年
- 建立致病性变异突变体库是研究香蕉枯萎镰刀菌致病机理的有效方法,此方法需要对大量突变体进行致病性测定,经典的根部接种测定方法耗时长达40 d,工作量十分巨大。因此,建立一种简便快速的致病性测定方法是高效建立香蕉枯萎病菌致病性变异突变体库的关键。本研究以香蕉巴西蕉和粉蕉叶片为材料,采用香蕉离体叶片分别接种香蕉枯萎病菌1号小种、4号小种、致病性丧失突变体、致病性严重减弱突变体,分别置于20℃、25℃、30℃、35℃、37℃条件下进行保湿培养3 d、5 d、7 d,观察发病情况,测定病斑大小。并通过根部接种法对离体叶片接种法的结果进行验证。结果表明,离体叶片测定法和根部接种法测定的结果一致,最佳致病温度30℃。从而建立了一种简便快速的香蕉枯萎病突变体致病性测定方法(离体叶片接种法)。运用该法在适宜的条件下可以准确、可靠、快速和简便测出香蕉枯萎病菌致病性,大大提高了突变体致病性测定筛选的效率。
- 符冬妹陈汉清郭素霞王婷婷曾会才
- 关键词：离体叶片致病性测定
- 土壤中香蕉枯萎病菌FOC4的实时荧光定量PCR检测被引量：4
- 2019年
- 香蕉枯萎病发病率与土壤中香蕉枯萎病菌FOC4的数量密切相关。为了在香蕉定植前准确检测土壤中FOC4的数量,本研究以本实验室克隆的FOC4特异性基因片段作为标准线性片段,设计特异性荧光定量引物:以标准线性片段为模板建立荧光定量标准曲线,以无FOC4的土壤配置FOC4孢子浓度梯度标准土样,采用MoBio土壤基因组DNA提取试剂盒提取总DNA,以各FOC4孢子浓度梯度(1.66×10~3~1.66×108)的标准土样所提取的总DNA为模板进行实时荧光定量PCR,测定各标准土样中FOC4数量。以标准土样FOC4线性片段基因拷贝数的结果与FOC4线性片段基因100%提取率时的理论拷贝数的比值作为该标准土样FOC4基因组的提取率,对待检测土样FOC4的定量检测值进行校正,建立了一套较准确检测土壤FOC4数量的实时荧光定量PCR技术,其检测下线可达400个孢子/克土。应用该项技术对南天黄品种蕉园10个枯萎病病株的土样和10个未发病植株的土样和巴西蕉园5个发病植株的土样进行实际定量检测。结果表明,南天黄发病植株、未发病植株和巴西蕉发病植株的土样中FOC4的数量分别为每克土5 100~11 000个孢子/克土,3 500~7 800个孢子/克土和11 800~101 000个孢子/克土。本研究可准确检测土壤中的FOC4含量,同时也为香蕉枯萎病的防控措施的制定提供了帮助。
- 魏森陈汉清曾涛曾涛畅文军曾会才
- 关键词：土壤香蕉枯萎病菌荧光定量PCR拷贝数
- 香蕉枯萎病4号小种T-DNA插入突变体Focr4-1453表型特征及致病性分析
- 2014年
- 尖孢镰刀菌古巴转化型是引起香蕉枯萎病的主要病原菌,呈世界多态性分布,其致病机理尚不清楚。Focr4-1453为T-DNA插入突变体库中筛选出的一株与致病性相关的突变体。在克隆出其失活基因之后,将野生型菌株中的相同基因进行敲除和互补,得到敲除突变体ΔFoc4-1453和互补突变体ΔFoc4-1453-cp-1。对获得的3株突变体进行生物学表型研究发现,这些菌株的菌落生长速度、产孢能力以及孢子萌发率较野生型菌株明显降低,且无法透过玻璃纸进行生长。致病性测定试验表明,该基因失活会导致病原菌侵染能力显著减弱。
- 袁贵祥曾涛郭素霞陈汉清曾会才
- 关键词：香蕉枯萎病致病性测定生物学表型
- 19个华蕉类栽培品种的SCAR标记鉴别被引量：3
- 2015年
- 针对华蕉(Cavendish,AAA)类主栽品种在命名过程中出现的"同物异名"现象较突出的问题,本研究利用SCAR(sequence characterized amplified regions)标记对华蕉品种进行快速鉴别。通过对19个华蕉类品种进行RAPD(random amplified polymorphic DNA)多态性分析,共获得5条具有差异性的DNA片段,并对其进行测序分析,将其转化成相应的5对SCAR引物,再分别以19个华蕉类栽培品种的基因组DNA为模板进行SCAR-PCR扩增。利用这5对SCAR标记在不同华蕉类栽培品种中的差异片段,建立快速鉴别19个华蕉品种的路线图。结果表明:组合使用这5对SCAR引物可以快速、稳定的区分其中的7个华蕉类栽培品种,而其余12个品种则被划分为4个组。本研究将多个SCAR标记进行联合分析,实现快速、稳定、高效的鉴别华蕉类栽培品种,有利于在分子水平上为华蕉类栽培品种的鉴别提供分子依据。
- 吴斌陈汉清王必尊曾会才谢艺贤黄秉智
- 关键词：RAPD标记SCAR标记栽培品种
