国家自然科学基金(81070097)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 相关作者：韩雅玲闫承慧陶杰田孝祥张剑更多>>
- 相关机构：沈阳军区总医院中国科学院辽宁中医药大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科技厅科技攻关项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9表达及斑块形成的影响被引量：10
- 2012年
- 目的探讨黄芪水提取物对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠主动脉粥样硬化斑块部位基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及斑块形成的影响。方法将48只8周龄雄性ApoE^-/-小鼠给予高脂饮食喂养，小鼠20周龄时根据随机表按照完全随机法分为4组各12只，即对照组、阿托伐他汀组、黄芪水提取物低剂量组及黄芪水提取物高剂量组。对照组给予生理盐水0．2ml／d，阿托伐他汀组给予阿托伐他汀10mg·b^-1·d^-1，黄芪水提取物低剂量给予黄芪水提取物1．25g·kg^-1·d^-1、黄芪水提取物高剂量给予黄芪水提取物5g·kg^-1·d^-1灌胃。予给药12周末处死各组小鼠。应用ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白（oxLDL）含量；HE染色、油红O染色观察小鼠主动脉粥样斑块内脂质的形成；用免疫荧光、免疫组化染色法检测观察粥样斑块部位巨噬细胞浸润水平及MMP-9表达。结果黄芪水提取物明显降低ApoE^-/-小鼠，其中黄芪水提取物高剂量组血清oxLDL含量明显低于对照组[（5．2±6．1）μg／ml比（15．8±5．4）μg／ml，P〈0．01]；与对照组比较，黄芪水提取物高剂量组ApoE^-/-小鼠动脉粥样斑块面积明显减小（17．24％±4．22％比49．87％±9．37％，P〈0．01），动脉管壁斑块弥漫程度较轻（P〈0．01）。黄芪水提取物高剂量组斑块中Mac3表达低于对照组（P〈0．01）；黄芪水提取物高剂量组与对照组主动脉斑块中MMP-9阳性表达面积平均吸光度值（MA）分别为0．0154±0．0014与0．0263±0．0065（P〈0．01）。结论黄芪水提取物能够抑制ApoE^-/-小鼠动脉MMP-9表达，延缓动脉粥样硬化斑块形成。其机制可能是通过降低ApoE^-/-小鼠血清oxLDL水平，抑制巨噬细胞的浸润、迁移及分泌MMP．9，从而抑制斑块形成。
- 游洋段岩张效林康建闫承慧张秀莉丰加涛韩雅玲
- 关键词：动脉粥样硬化基质金属蛋白酶9载脂蛋白E类
- 过表达CREG抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡
- 2013年
- 目的:探讨E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)在高糖引起的人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)损伤中的作用,为寻找糖尿病血管病变新的治疗靶点提供实验依据。方法:采用胶原酶消化法分离原代HUVECs,并用内皮细胞标志物CD31免疫荧光染色进行鉴定。分别用含有5.5 mmol/l葡萄糖(正常糖对照组)、5.5 mmol/l葡萄糖+27.5 mmol/l甘露醇(渗透压对照组)或33 mmol/l葡萄糖(高糖组)的培养液培养HUVECs 48 h。Western Blot检测剪切体caspase-3表达;Annexin V/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡。通过感染表达CREG基因的腺病毒获得CREG过表达的HUVECs,Western Blot及流式细胞术评价CREG过表达对HUVECs凋亡的影响。结果:高糖处理48 h后,HUVECs内剪切体caspase-3的蛋白表达增加,细胞凋亡率增加;过表达CREG后,高糖处理的HUVECs内剪切体Caspase-3表达和凋亡细胞比例均明显降低,但仍高于正常糖对照组。结论:CREG过表达可抑制高糖引起的HUVECs凋亡。
- 田孝祥陶杰张剑孙鸣宇彭程飞闫承慧韩雅玲
- 关键词：高糖内皮细胞凋亡
- CREG低表达饲养层STO细胞的建立被引量：1
- 2012年
- 目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)自我更新的影响及作用机制,本研究拟通过RNA干扰方法建立CREG低表达的饲养层STO细胞,为深入研究奠定基础。方法:用Western Blot方法检测饲养层细胞系STO及ESC细胞系R1中CREG基因的表达。利用Lipofectamine 2000向STO细胞中分别转染RNA干扰空对照载体,含有无意义随机序列的对照载体以及含有4种不同CREG干扰序列的载体。用1.0μg/ml嘌呤霉素筛选1 w,荧光显微镜下挑取绿色荧光蛋白表达较高的克隆进行扩增。Western Blot方法鉴定CREG基因干扰效率,获得CREG表达最低的饲养层细胞克隆。将ESC R1接种到该克隆上,不添加白血病抑制因子,连续培养3代,用碱性磷酸酶染色判断其是否分化。结果:R1几乎不表达CREG,而STO细胞高表达CREG。Western Blot结果证实筛选到的STO克隆3A干扰效果最好,达到85%。在不添加白血病抑制因子的情况下,碱性磷酸酶染色表明R1细胞在该株饲养层细胞上连续培养3代后未见明显分化。结论:成功获得CREG低表达饲养层STO细胞,为深入探讨CREG对ESC自我更新的作用及机制奠定了基础。
- 田孝祥张剑陶杰孙鸣宇闫承慧韩雅玲
- 关键词：RNA干扰饲养层细胞胚胎干细胞自我更新
- CREG基因敲除小鼠胚胎干细胞的筛选及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)在发育过程中的作用,本研究拟通过高浓度药物筛选获得基因敲除的小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)。方法:用0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml、2.5 mg/ml及3.0 mg/ml 6个浓度的G418培养CREG杂合型(CREG其中一个等位基因被新霉素抗性neo基因替代)小鼠ESC 2周,确定最佳的G418筛选浓度。挑取该浓度下存活的ESC克隆进行扩增。将每个ESC克隆一半冻存,另一半贴壁培养。待ESC生长至80%融合后分别提取基因组DNA和蛋白。PCR方法扩增CREG基因明确基因组中是否存在CREG基因,WesternBlot方法鉴定是否有CREG蛋白表达。结果:确定2.0 mg/ml G418为最佳的筛选浓度。在该浓度下,共获得存活的克隆10个,PCR证实C2及C7克隆基因组中没有CREG基因,Western Blot证实C2及C7无CREG蛋白表达。结论:成功获得CREG基因敲除的小鼠ESC 2株,为深入研究CREG功能奠定了基础。
- 田孝祥张剑陶杰孙鸣宇闫承慧韩雅玲
- 关键词：基因敲除胚胎干细胞
- 肿瘤坏死因子α通过RhoA-ERK信号通路调控人脐静脉内皮细胞单层通透性的实验研究被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）单层通透性改变的效应分子,以寻找内皮细胞损伤修复的有效治疗靶点.方法 应用TNF-α刺激体外培养的HUVEC,观察HUVEC骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变.应用荧光免疫组织化学和Western blot方法检测TNF-α刺激前后细胞中RhoA和MAPK信号通路的改变.并通过添加特异性分子抑制剂Y27632和PD98059阻断RhoA和ERK表达,观察细胞F-actin及细胞单层通透性的改变.进一步应用持续活化型RhoA和主导抑制型RhoA逆转录病毒分别感染改变人HUVEC,改变细胞中RhoA的活化状态,观察TNF-α刺激前后细胞骨架蛋白及单层细胞通透性的变化.并确定RhoA与ERK的相互作用.结果 TNF-α刺激引起HUVEC中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强,呈现时间和剂量依赖性趋势.其中TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后细胞单层通透性最强,HRP-BSA渗漏最大浓度为40 ng/ml.同时,细胞中活化RhoA的表达明显增加.TNF-α刺激前后细胞中MAPK信号转导蛋白JNK、P38和ERK1/2总蛋白均无明显改变,但p-JNK、p-p38和p-ERK表达均显著增加.其中,应用Y27632抑制RhoA的活化或PD98059阻断p-ERK表达后,TNF-α刺激的HUVEC中F-actin重构现象消失,同时细胞单层通透性增加也受到明显抑制,HRP-BSA渗漏浓度从40 ng/ml下降至12.5 ng/ml（P〈0.05）.进一步应用持续活化型RhoA感染人HUVEC细胞,发现RhoA活化的HUVEC单层通透性明显高于GFP感染组,HRP-BSA在TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后渗漏浓度从达到50 ng/ml（P〈0.05）,同时p-ERK表达也明显增加.而应用TNF-α刺激后,抑制型RhoA感染的HUVEC的骨架蛋白与单层细胞通透性均无明显变化.同时,p-ERK活化也受到明显抑制.结论 RhoA-pERK通路的活化介导了TNF-α诱导的HUVEC通透性增加,特异性抑制RhoA-ERK通路可以阻断TNF-α引起的内皮细胞通透性增加.
- 闫承慧于海波黄明方李杰张效林韩雅玲
- 关键词：内皮细胞肿瘤坏死因子Α
- 骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死机制的研究进展被引量：2
- 2011年
- 心肌梗死（myocardial infarction，MD是由于冠状动脉循环改变引起冠状血流和心肌需求之间不平衡而导致的心肌损害，是临床上一种严重的缺血性心脏病（ischemic heart isease，IHD）。梗死的心肌细胞逐渐被瘢痕组织取代，由于瘢痕组织缺乏弹性，难以满足心脏收舒功能的要求，
- 栾波李杰韩雅玲
- 关键词：骨髓间充质干细胞心肌梗死细胞移植
