国家自然科学基金(30672101)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：石建党张琚杜小玲周颖苗琳更多>>
- 相关机构：南开大学天津中医药大学天津市第三中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 雌激素快速激活MAPK途径促进前列腺间质细胞的增殖被引量：3
- 2008年
- 为研究雌激素促进前列腺间质细胞增殖的机理,使用雌二醇(E2)或BSA雌二醇(BSA-E2)处理前列腺间质细胞系wpmy-1,用MTT法及细胞计数法检测细胞增殖情况;用实时RT-PCR以及Western印迹方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达水平;用抗磷酸化ERK1/2抗体检测细胞内MAPK途径的激活情况.结果显示,2种形式的雌二醇均能促进前列腺间质细胞系wpmy-1的增殖,并且显著上调增殖相关核抗原PCNA的表达水平;2种形式的雌激素均能快速激活wpmy-1细胞内的MAPK信号通路;MAPK途径的特异性抑制剂PD98059能够显著降低雌激素对细胞增殖以及PCNA表达水平的上调作用.结果表明,雌激素能够通过膜受体快速激活前列腺间质细胞中的MAPK信号通路,进而促进前列腺间质细胞的增殖.
- 张智松刘杰杜小玲段磊张琚石建党
- 关键词：雌激素MAPK途径增殖
- TAT-GFP-ER融合蛋白的原核表达与鉴定
- 2008年
- 从前列腺中提取总RNA,RT-PCR获得ERβ基因,将其联入pEGFP载体,得到重组质粒pEGFP-ERβ,再将上述质粒的GFP-ERβ片段亚克隆于pTAT-2.1质粒,形成pTAT-GFP-ERβ重组质粒.在BL21工程菌中IPTG诱导表达TAT-GFP-ERβ融合蛋白.用Western Blot鉴定纯化的融合蛋白的免疫原性.用纯化的蛋白转导事先转染ERE-Luc报道质粒的Hela细胞,用Luciferase Assay鉴定转导蛋白的生物学活性.证明TAT-GFP-ERβ蛋白具有完整的生物活性.
- 于林王春雨杨睿王亮石建党张琚
- 关键词：TAT蛋白转导原核表达雌激素受体Β
- BPH-1通过分泌PGE2上调前列腺间质细胞ERRα的表达被引量：2
- 2008年
- 雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptorα,ERRα)是一类可以直接或间接参与雌激素应答反应的孤儿核受体,它与雌激素受体(estrogen receptor,ER)在结构上有很强的同源性.雌激素效应在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasis,BPH)的发生和发展中起着重要的作用.通常,孤儿核受体的转录活性多受一些非经典激素如维生素A衍生物、前列腺素类、固醇的调控.本文研究前列腺上皮细胞分泌的活性因子对间质细胞ERRα表达调控的分子机制.收集前列腺增生上皮细胞系BPH-1和前列腺癌上皮细胞系DU-145的条件培养液(condition medium,CM)培养间质细胞,采用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测前列腺间质细胞(prostatic stromal cells,PrSC)中ERRα的表达,筛选CM中影响ERRα表达的活性因子.研究结果显示,BPH-1的CM可以上调ERRα的表达,而DU-145的CM对ERRα的表达没有影响;BPH-1中合成前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的限速酶———环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA表达水平和PGE2的分泌水平明显高于DU-145中COX-2表达水平和PGE2分泌水平;用经添加COX-2抑制剂NS-398的培养液处理BPH-1,其CM中PGE2的浓度明显下降,并失去了对ERRα表达的上调作用;添加PGE2可上调间质细胞中ERRα的表达.结果表明,BPH-1通过分泌PGE2促进间质细胞ERRα的表达,提示:在良性前列腺增生的发生和发展中,上皮细胞的旁分泌作用可促进间质细胞由ERRα介导的雌激素效应.
- 苗琳石建党周颖杜小玲吴荃王克明张琚
- 关键词：良性前列腺增生前列腺素E2
- 实时定量PCR技术检测前列腺癌微小转移的研究被引量：2
- 2008年
- 通过利用TaqMan定量PCR检测前列腺增生和前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)和前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达量,建立了一种通过检测患者外周血单个核细胞中前列腺特异基因表达水平检测前列腺癌微小转移的方法.实验结果表明,PSA在转移癌、局限癌和增生患者组中与GAPDH的相对表达量分别为(2.63×10-3±3.4×10-4),(2.6×10-4±3.9×10-5)和(2.6×10-5±4.5×10-6),各组间有显著性差异(p<0.001);PSMA在各组间的相对表达量分别为(6.4×10-3±9.3×10-3),(5.0×10-4±8.3×10-5),(2.4×10-5±7.2×10-6),各组间亦存在着显著性差异(p<0.001).因此用定量PCR技术检测外周血中PSA和PSMA的表达水平,可区分前列腺转移癌、局限癌和增生患者,该方法可用于前列腺癌的早期诊断.
- 杨睿张立国符蓉王春雨刘树业石建党张琚
- 关键词：实时定量PCRPSAPSMA前列腺癌
- 雌二醇通过TGFβ1促进前列腺间质细胞MMP-2的表达被引量：2
- 2009年
- 基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在前列腺间质细胞中表达,转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)可以通过上调基质金属蛋白酶的表达促进肿瘤细胞迁移.我们近期发现,雌二醇可以诱导原代前列腺间质细胞TGFβ1表达.由此我们提出,雌二醇通过上调TGFβ1促进前列腺间质细胞MMP-2表达的假说.用实时定量RT-PCR和酶谱电泳技术分别检测添加雌二醇、TGFβ1、雌二醇和TGFβ1中和抗体、TGFβ1和放线菌素D或TGFβ1和放线菌酮,对前列腺间质细胞系WPMY-1中MMP-2表达的调节作用及其分子机制;荧光素酶活性实验检测TGFβ1对MMP-2启动子活性的影响.结果显示,雌二醇和TGFβ1均以剂量依赖方式促进WPMY-1中MMP-2蛋白水平表达,而对其mRNA表达没有调节作用.雌二醇可以在转录和翻译水平上促进TGFβ1表达;TGFβ1不能促进MMP-2启动子的活性;雌二醇对MMP-2蛋白表达的促进作用可以被TGFβ1中和抗体阻断.放线菌酮而非放线菌素D可以抑制TGFβ1对MMP-2表达的上调作用.表明雌二醇可以在TGFβ1的介导下促进WPMY-1中MMP-2的表达;TGFβ1对MMP-2表达的促进作用是一种转录后的调节机制.结果提示,雌二醇上调间质细胞MMP-2的表达可能是雌激素参与前列腺癌转移和进展的机制之一.
- 苗琳周颖石建党杜小玲焦鸿丽张琚
- 关键词：基质金属蛋白酶-2转化生长因子Β1前列腺癌转移
