国家自然科学基金(30371416)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：薛武军田普训李钊伦姜亚卓丁小明更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院第三军医大学西南医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠骨髓CD117^+造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞及其鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的建立可以在体外稳定地获得大量高纯度未成熟树突状细胞的方法,并对获得细胞进行形态、功能以及表面标志的鉴定。方法取健康C57小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117^+造血干细胞;使用SCF+IL-3进行体外扩增,在此基础上使用GM-CSF+IL-4+IL-10诱导其定向分化为未成熟树突状细胞;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,并使用流式细胞计数法检测其表面标志的表达,对其鉴定。结果SCF+IL-3可以分别在3、5、7d时体外扩增造血干细胞达10.34±1.43、22.65±2.71、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为未成熟树突状细胞,后者具有吞噬功能,表面树突较为短小,呈毛刺状,表面标志表达情况为CD11c^+、I-A/I-E^(low)、CD40-、CD80-、CD86-。结论使用该方法可以有效地获得大量高纯度的未成熟树突状细胞并对其进行鉴定。
- 姜亚卓田普训丁小明李兆伦管智慧丁晨光薛武军
- 关键词：CD117造血干细胞树突状细胞定向分化
- sCD40LIg重组腺病毒载体的构建鉴定和体外表达被引量：3
- 2005年
- 目的构建含有分泌型人胞外区CD40L融合蛋白(sCD40LIg)基因的重组腺病毒载体,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。方法分别以质粒pAdCTLA4Ig和pGEM-T-easy-sCD40L为模板,通过PCR扩增获得人源IgGFc和sCD40L基因全部序列。分别回收用连接酶连接,以连接产物为模板PCR,获得sCD40LIg基因全部序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游BglⅡ及XhoⅠ位点之间,获得重组质粒pAdTrack-sCD40LIg。将正确重组体pAdTrack-sCD40LIg转化含腺病毒骨架质粒的pAdEasy-1-BJ5183细菌行同源重组。提取重组成功质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因,Western blot分析蛋白表达等方法鉴定重组的腺病毒。结果成功构建了含有sCD40LIg基因的重组腺病毒并在体外表达。结论该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达及在移植排斥的基因治疗中的作用提供了一定的基础。
- 李钊伦田普训薛武军吴军贺伟峰易绍萱陈希炜张小容
- 关键词：重组腺病毒基因表达免疫耐受
- MACS系统对小鼠造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨经MACS系统在体外获得大量高纯度未成熟树突状细胞(imDC)的方法,并对其细胞表面标志、形态和功能进行鉴定。方法:对健康C57小鼠的骨髓通过MACS系统分离、纯化CD117+造血干细胞(HSC);使用SCF+IL-3行体外扩增,并采用GM-CSF+IL-4+IL-10诱导其定向分化为imDC;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,采用流式细胞计数法检测、鉴定其表面标志物的表达。结果:SCF+IL-3可以分别在3、5、7d时体外扩增HSC达10.34±1.43倍、22.65±2.71倍、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为imDC,且具有吞噬功能,表面树突呈毛刺状、较为短小,imDC并表达CD11c+、I-A/I-Elow、CD40-、CD80-、CD86-。结论:本方法可稳定、有效地获得大量高纯度的imDC。
- 姜亚卓田普训丁小明薛武军丁晨光
- 关键词：造血干细胞未成熟树突状细胞定向分化
- 人CD_(40)L胞外区和人CTLA_4Ig双基因共表达腺病毒载体的克隆和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :构建人CD40 L胞外区和CTLA4Ig双基因共表达重组腺病毒载体并鉴定。方法 :RT -PCR扩增人CD40 L胞外区片段 ,与致瘤素信号肽连接后构建穿梭质粒 ,经酶切、插入、同源重组 ,获质粒pAdshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,经 2 93细胞包装 ,获共表达双基因的腺病毒pAdvshCD40 L -IRES2 -CTLA4Ig ,并行凝胶电泳、PCR、共聚焦显微镜检测。结果 :电泳、PCR扩增出了 6 0 0bp和 4 0 0bp的特异性片段、共聚焦显微镜观察到CD40 L绿色荧光和CTLA4Ig红色荧光的共表达。结论 :成功构建了人CD40 L胞外区和CTLA4Ig共表达双基因重组腺病毒载体。
- 田普训吴军张寅生李钊伦薛武军贺伟峰易绍萱陈希炜张小容
- 关键词：重组腺病毒CTLA4IG免疫耐受
- 人sCD40L-Ig重组腺病毒载体的构建、表达及功能检测被引量：3
- 2005年
- 目的:构建含有分泌型人胞外区CD40L融合蛋白(sCD40L-Ig)基因的重组腺病毒载体,确定其表达和功能学意义。方法:通过PCR获得人源IgGFc和sCD40L基因并予以连接,将其插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组质粒pAdTrack-sCD40L-Ig。将其与pAdEasy-1-BJ5183菌行同源重组后,用293细胞包装,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blot分析等方法鉴定重组腺病毒,并进行双向混合淋巴细胞反应(MLR)以确定其功能。结果:所构建的sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确。原代腺病毒的滴度达到2.69×1011pfu/L,并有相对分子质量(Mr)为61×103的目的蛋白表达。MLR显示,重组腺病毒对淋巴细胞的增殖有抑制作用。结论:成功地构建了含有sCD40L-Ig基因的重组腺病毒,并对MLR有抑制作用。
- 李钊伦田普训薛武军
- 关键词：重组腺病毒混合淋巴细胞培养免疫耐受
