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树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展被引量：11: 2005年; 树突状细胞 (DC)是目前发现功能最强的专职抗原呈递细胞 (APC) ,DC疫苗的开发研制尚处于早期阶段 ,但已获得的大量有价值的实验数据可以表明 ,DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥出强大的功能。DC体外培养的方法渐趋成熟 ,提高DC生物学功效的手段多彩纷呈 ,日益增多的临床研究工作推动着该领域的迅速发展。作者就DC肿瘤疫苗制备方法及其在临床试验中的应用作一综述 ,并提出该免疫治疗中尚存在的一些问题。; 于哲范清宇; 关键词：树突状细胞融合疫苗肿瘤免疫疗法

幼龄及成龄鼠骨髓基质干细胞生物学特性的比较被引量：3: 2005年; 目的比较幼龄及成龄大鼠骨髓基质干细胞体外培养过程中生物学特性的差异。方法取3周及3月龄SD大鼠股骨骨髓原代培养基质干细胞。第2代细胞添加诱导成骨培养液,分别通过相差显微镜观察细胞生长,MTT法检测细胞增殖,钙钴法、茜素红染色了解体外矿化,测定细胞总蛋白含量,RT-PCR测Ⅰ型胶原mRNA表达,透射电镜了解细胞及胞外基质分泌来比较两者差异。结果幼鼠细胞增殖更快,倍增时间4.8 d;培养第7天出现较多集落;钙钴法、茜素红染色深染细胞数目多,结节典型;细胞总蛋白含量高。成龄鼠细胞增殖相对慢,倍增时间5.4 d;未见细胞集落,钙化呈片状;细胞总蛋白含量较低。两者琼脂糖电泳均可显示Ⅰ型胶原mRNA条带;超微结构内质网丰富,胞外基质为前胶原样结构。结论不同鼠龄的骨髓基质干细胞经体外诱导均可分化为成骨细胞,考虑到细胞增殖及成骨潜能,幼鼠基质干细胞是研究细胞/生物材料相互作用更理想的工具。; 潘朝晖范清宇龙华文艳华; 关键词：骨髓基质干细胞骨组织工程细胞培养

明胶对自固化磷酸钙骨水泥性能的影响被引量：5: 2005年; 目的:了解明胶对自固化磷酸钙骨水泥(CPC)物理性能、超微结构及生物相容性的影响。方法:分别以50g/L明胶和蒸馏水为液相,制备CPC试样,通过测定初步凝结时间和抗压强度,扫描电镜观察凝固体超微形态及大鼠骨髓基质干细胞(BMSC)表面种植试验,比较两者差异。结果:复合明胶的CPC初步凝结时间为(5.31±1.18)min,抗压强度为(9.04±1.35)MPa;对照组初步凝结时间为(20.72±4.13)min,抗压强度为(4.38±1.33)MPa,与实验组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。扫描电镜发现固化体表面为颗粒状晶体,大小约10μm,添加明胶后晶体仍呈颗粒状,互相连接,孔隙较对照组少。细胞可在水泥盘上贴附、生长,实验组细胞数较多。结论:添加明胶可缩短自固化CPC的固化时间,提高抗压强度及生物相容性。; 潘朝晖范清宇蔡和平马保安黄波姜林莉文艳华; 关键词：明胶磷酸钙骨水泥抗压强度生物相容性

SRG基因的克隆及原核表达: 2007年; 目的克隆SRG基因、原核表达并鉴定。方法从培养的人骨肉瘤细胞SOSP-9607中提取总RNA,经RT-PCR获得SRG基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,测序、鉴定。将测序正确的SRG基因亚克隆到pET-28(a+)表达载体中,构建SRG表达载体,IPTG诱导表达2h^6h,做SDS-PAGE分析,鉴定SRG蛋白的表达。结果DNA测序证明,获得了SRG基因,其序列与GenBank中报道序列完全一致。SDS-PAGE分析表明,SRG蛋白获得高效表达,其相对分子质量为22kDa,表达量约占菌体总蛋白的25%。结论SRG基因的克隆和表达均获得了成功,为进一步探讨SRG基因在骨肉瘤诊治中应用奠定了基础。; 闫露高萍栗艳鱼兵; 关键词：逆转录PCR 基因表达

人骨形成蛋白-7基因增强的组织工程化骨修复骨缺损被引量：2: 2006年; 目的:探讨腺病毒介导人骨形成蛋白-7(hBMP-7)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)与聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)生物材料复合后修复兔桡骨缺损的效果。方法:制备含hBMP-7基因的重组腺病毒Ad-BMP-7并感染MSCs。制备新西兰大白兔桡骨1.3cm缺损模型,修复实验分为4组,BMP-7基因转染的MSCs-PLGA复合物组(A组)、未经转染的MSCs复合PLGA修复组(B组)、单纯PLGA修复组(C组)和对照组(D组)。分别于术后8、12周进行大体观察、X线检测和组织学检测。结果:定量检测分析结果证实经转染的MSCs修复骨缺损的成骨速度和成骨量均优于未转染组,单纯PLGA组和对照组均未见骨缺损得到骨性修复。结论:hBMP-7基因转染能够提高MSCs形成组织工程化骨组织和修复骨缺损的能力。; 闫露鱼兵范清宇文艳华; 关键词：骨疾病骨缺损骨形态发生蛋白

重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用被引量：1: 2008年; 目的:构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用。方法:通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果:流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv/tBid。重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高(16.1% vs 4.5%);TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征。结论:重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。; 裘秀春单乐群纪振钢杨彤涛龙华许彦鸣周勇马保安杨安钢范清宇; 关键词：TBID 人表皮生长因子受体2 融合蛋白骨肉瘤细胞

人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX的建立及多药耐药机制研究被引量：1: 2011年; 目的建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系,探讨骨肉瘤细胞多药耐药的发生机制。方法采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系(MG-63/PTX),并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细胞系和耐药细胞系的细胞膜表面P-gp蛋白表达率、罗丹明123排出情况,RT-PCR检测细胞内耐药基因的变化,免疫细胞化学法检测细胞内P-gp蛋白的表达,Westernblotting法检测细胞内P-gp蛋白的表达。结果历时12个月建成人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX,能在含PTX1μg/mL的培养基中稳定生长并传代,其对PTX的耐药指数为69.8,并与卡铂、顺铂、表柔比星、甲氨蝶呤、阿霉素等多种化疗药物存在不同程度的交叉耐药性;罗丹明123排出实验显示MG-63/PTX内罗丹明含量明显低于亲本细胞;RT-PCR结果显示在MG-63/PTX细胞系中存在MDR1、MRP1、LRP、ABCG2基因的表达,而在MG-63细胞系中无MDR1基因的表达。免疫细胞化学、流式细胞仪及Western blotting实验均显示在MG-63/PTX中存在P-gp的表达。结论 MDR1/P-gp在多药耐药的特性上起着至关重要的作用,而且骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础。; 纪振钢李钊韩忠孝裘秀春胡运生陈翔马保安周勇马琼赵艳立范清宇; 关键词：骨肉瘤耐药细胞系多药耐药

磷酸钙/纤维蛋白胶复合支架材料的结构及力学性能分析被引量：23: 2006年; 用可吸收磷酸钙骨水泥和纤维蛋白胶按一定比例体外构建复合支架材料，通过XRD、SEM、抗压实验和空隙率测试等方法对其结构及力学性能进行分析。结果发现：由于加入纤维蛋白胶，复合支架材料在一定程度上延长了磷酸钙骨水泥的初凝时间，但并不影响磷酸钙骨水泥的终凝时间；同时，加入纤维蛋白胶改变了骨水泥固化体的微观结构，提高了骨水泥的抗压强度，其最大抗压强度达到14MPa，弹性模量在96．64～269．39MPa之间，空隙率为38．8％。与在同样条件下制备的磷酸钙骨水泥比较，复合支架材料的抗压强度增强了55．6％，而空隙率仅仅下降了6．9％；XRD分析显示，复合支架材料并不影响磷酸钙骨水泥的最终的转化，其结晶结构仍是羟基磷灰石结构，是更好的骨组织工程支架材料。; 胡运生范清宇马保安周勇胡作启叶先贤; 关键词：磷酸钙骨水泥纤维蛋白胶

大鼠骨肉瘤模型的建立被引量：11: 2005年; 为建立大鼠骨肉瘤动物模型的方法, 用30只6周龄SD大鼠随机分为3组,将大鼠骨肉瘤细胞系UMR 106分别以105,106, 107个数量注入大鼠股外侧皮下。接种后,每周观察肿瘤生长情况,测量肿瘤直径,绘制肿瘤生长曲线,连续5周。第6周取肿瘤病理材料,常规切片,HE染色,光镜下观察。结果 105个细胞及106个细胞组肿瘤生长情况不佳;107个细胞组肿瘤发生率达到100%。说明大鼠骨肉瘤细胞系UMR 106具有较强的致瘤性,应用该细胞系建立的动物模型为骨肉瘤综合治疗奠定了动物实验基础。; 于哲范清宇张婷; 关键词：肿瘤转移骨肉瘤动物模型

辛伐他汀诱导促进骨形成蛋白-7基因修饰的兔间充质干细胞的成骨转化被引量：2: 2009年; 目的:研究辛伐他汀诱导对骨形成蛋白-7(BMP-7)基因修饰的间充质干细胞(MSCs)增殖和分化表型的影响。方法:将辛伐他汀诱导和未经诱导的兔MSCs分别转导BMP-7基因后,Westernblotting检测转导后细胞BMP-7的表达;通过观察细胞生长以及碱性磷酸酶活性和测定骨钙素含量,分析辛伐他汀诱导对BMP-7基因修饰的MSCs的增殖和分化表型的影响。结果:转导后BMP-7基因在诱导组和未诱导组MSCs中均有表达,诱导组细胞BMP-7表达量、碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均比较未诱导组明显增高。结论:转导前辛伐他汀诱导能够促进BMP-7基因修饰的MSCs的成骨转化。; 闫露栗艳沈敏; 关键词：干细胞辛伐他汀成骨转化

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国家自然科学基金(30330610)

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