四川省杰出青年科技基金(200930421)
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 相关作者：刘孟良王潇娣徐志文周远成朱玲更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：四川省杰出青年科技基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪嵴病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 为建立一步法检测猪嵴病毒的实时荧光定量PCR检测方法,通过对猪嵴病毒3D区的PCR扩增后,连入pMD19-T载体,制备阳性标准品,进行实时荧光定量PCR。结果显示,该方法能检测出的最低拷贝数为100拷贝,扩增效率为91.8%,相关系数r2=0.992。通过对扩增曲线、熔解曲线等试验数据的分析,得出该检测方法具有良好的稳定性和较高的精确度。本研究建立的实时荧光定量PCR为一种可靠的猪嵴病毒检测方法。
- 刘孟良王潇娣徐薇薇周远成陈雷朱玲徐志文
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 猪巨细胞病毒四川株gB基因的克隆表达及抗原性分析
- 2012年
- 为研究猪巨细胞病毒(PCMV)SC株gB蛋白的免疫学活性,采用PCR扩增PCMV SC株gB全基因和不含跨膜区及信号肽的gB基因片段,将后者克隆至pET-30a(+)载体,转化Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导以获得高效表达。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,分别用琼脂扩散试验和Western-blot对多克隆抗体和复性的gB蛋白进行检测。结果显示,扩增的PCMV gB基因全长2 580bp,编码860个氨基酸。与国内外参考株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为97.8%～99.5%和96.6%～99.0%;与其他9株β疱疹病毒核苷酸和氨基酸序列相似性分别为33.3%～41.4%和13.3%～49.4%;系统进化分析显示,PCMV与人疱疹病毒6型和7型属于一个分支。gB肽链N端1～23位氨基酸为信号肽,729～751位氨基酸间含有跨膜区。构建的表达载体pET30a-gB-B在Rosetta(DE3)感受态细胞中经IPTG诱导后以包涵体形式表达出大小约80ku的蛋白。所制备的血清琼扩抗体效价为1∶16,Western-blot显示重组gB蛋白可与PCMV阳性猪血清反应。结果表明,PCMV gB基因较为保守,与国内外不同地区的PCMV毒株具有较高的相似性,所表达的重组蛋白具有很好的抗原性。
- 朱玲史小红王潇娣梅淼周远成刘孟良吴云飞徐志文郭万柱
- 关键词：GB基因原核表达抗原性
