国家自然科学基金(30371343)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 相关作者：刘哲伟肖宗慧韩继生姚海兰任红雁更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 针对2B区域的短双链RNA抑制柯萨奇B3病毒感染HeLa细胞的特性研究被引量：2
- 2007年
- 为了研究短双链RNA(Small interfering RNA,siRNA)对柯萨奇B组3型病毒(CVB3)复制的影响及其作用特性,合成针对CVB3基因组2B区的siRNA-2B,脂质体法转染HeLa细胞后感染CVB3病毒,观测转染效率及存留时间、毒性作用、病毒致细胞病变效应、病毒滴度、病毒RNA含量、siRNA-2B对重组基因的特异性降解及培养上清有限稀释后再感染情况。结果发现siRNA-2B能高效转染入HeLa细胞并存留长达48h,高剂量的siRNA-2B对培养细胞无明显毒性,siRNA-2B能特异性针对2B区有效地降解病毒RNA,能明显抑制病毒RNA的复制。随着转染浓度的增加,siRNA-2B的抗病毒作用逐渐增强。siRNA-2B还能明显降低CVB3的再感染能力。这些结果提示,针对基因组2B区的siRNA-2B可以明显抑制CVB3基因复制,有效控制病毒再感染,并具有高效性、特异性和量效关系等特点。为siRNA可能成为预防和治疗CVB3感染的新途径奠定基础。
- 姚海兰肖宗慧任红雁韩继生刘哲伟
- 关键词：RNAISIRNA柯萨奇B3病毒抗病毒效应
- 反义寡聚核苷酸抗柯萨奇A24病毒感染的研究被引量：1
- 2007年
- 目的针对柯萨奇病毒A组24型(coxsackievirus A24,CVA24)基因组特殊功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用。同时进行抗病毒作用的量效评价。方法通过抑制空斑形成实验、病毒致细胞病变作用及免疫印迹等实验,了解反义核酸抑制及阻断CVA24病毒感染细胞的能力,及经反义核酸抑制后病毒结构蛋白在感染细胞中的表达状况,并对抗病毒效果较好的反义核酸进行量效关系测定。结果从本实验所设计的8条反义核酸中,筛选出5条能较好抑制CVA24的反义核酸序列,分别为SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568。当病毒感染量为1 MOI时,5μmol/L的上述反义核酸的病毒活性抑制率均在50%以上。经过量效关系分析显示,0.3μmol/L的SCA568已经对细胞产生较强的保护作用,对病毒空斑形成抑制程度达80%;在2.5μmol/L的SCA568保护下,病毒空斑抑制率达到90%以上,是几条反义核酸中抗病毒效果最好的一条。SCA568对病毒早期结构蛋白的表达有较强的抑制作用。而抗病毒效果稍差的SCA723,随浓度的增加也表现出一定程度对病毒蛋白表达的抑制作用。结论本实验所筛选的5条反义核酸SCA547、SCA551、SCA554、SCA558、SCA568能较好地抑制CVA24活性,为进一步研究反义核酸治疗和预防CVA24感染、防止CVA24引起的流行性出血性结膜炎的暴发流行打下基础。
- 孙红妹肖宗慧刘哲伟
- 关键词：反义寡聚核苷酸HELA细胞
- 短双链RNA对柯萨奇B组3型病毒体外感染的抑制作用研究被引量：2
- 2007年
- 目的利用RNA干扰技术，在细胞、蛋白和基因水平上观察短双链RNA对柯萨奇病毒体外感染Hela细胞的增殖抑制作用、对病毒RNA复制和蛋白合成的影响。方法应用病毒致细胞病变作用保护实验、空斑形成减少实验、Western Blot、RT-PCR等方法，在体外检测其抗CVB3病毒作用。结果设计、合成的8条SiRNA中，针对基因组2B、VP4、2A、3C区的SiRNA-2、SiRNA-3、SiRNA-6、SiRNA-7具有不同程度的抑制病毒作用。其中，病毒基因组2B的SiRN．2作用效果最好，对Hela细胞CVB3感染72h后致细胞病变和空斑形成的抑制率为95％，抑制病毒蛋白的合成，病毒基因的复制水平也显著降低，在病毒0．1、0．01、0．001、0．0001 MOI感染水平上对CVB3致细胞病变作用的抑制率分别为30％、70％、88％和99％（48h）。结论针对CVB3基因组2B的SiRNA-2具有较强的抑制柯萨奇B3型病毒感染的作用。
- 韩继生肖宗慧姚海兰任红雁刘哲伟
- 关键词：RNA
