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IL-13及其变异体对气道平滑肌细胞信号传导的影响被引量：5: 2006年; 目的探讨野生型人IL-13(whIL-13)及其变异体(mhIL-13,Arg130Gln)对培养的气道平滑肌细胞(AM-SCs)信号传导的影响。方法利用不同浓度的whIL-13及mhIL-13分别对AMSCs进行刺激,收集细胞,流式细胞仪检测STAT-6磷酸化情况,从而判断这两种蛋白分子在信号传导上的差异。结果whIL-13及mhIL-13引起的STAT-6磷酸化随浓度增加而增强。mhIL-13在较低浓度(0.3 ng/ml)即可引起STAT-6磷酸化,而whIL-13则需要更高浓度(1 ng/ml);相同浓度时STAT-6磷酸化情况在两种蛋白分子间具有显著性差异;mhIL-13作用强度大约为whIL-13分子的3-5倍。结论mhIL-13分子致气道平滑肌细胞STAT-6磷酸化能力明显强于whIL-13,低浓度mhIL-13即可在体外培养的AMSCs中引起信号传导。; 王育文许勇臣姜晓峰; 关键词：变异体气道平滑肌细胞信号传导

哮喘患者血清IL-13、TNF-α与IgE的测定及意义被引量：6: 2004年; 目的　探讨支气管哮喘患者IL 13、TNF α与IgE的变化及其在哮喘发病中的意义。方法　采用固相ELISA法检测 5 7例支气管哮喘患者和 2 3例健康者血清IL 13、TNF α和IgE浓度。结果　支气管哮喘组IL 13、TNF α与IgE水平均显著高于健康组 (P <0 .0 1)。IL 13水平在外源性哮喘急性期明显高于内源性哮喘急性期 (P <0 .0 1) ,而缓解期无明显差异 (P >0 .0 5 )。TNF α水平在急性期和缓解期无明显差异 (P >0 .0 5 )。经直线相关分析显示 ,支气管哮喘组IL 13与IgE呈正相关 (r=0 .88,P <0 .0 1)。结论　IL 13、TNF α升高是哮喘发病的重要因素 ;IL; 王金辉姜晓峰刘彦虹; 关键词：支气管哮喘 IL-13 TNF-Α IGE

分子信标毛细管电泳技术联合检测哮喘患者白细胞介素13基因多态性被引量：5: 2004年; 目的　利用分子信标杂交和毛细管电泳理论 ,建立一种新的基因突变检测方法 ,应用于疾病的基因诊断。探讨白细胞介素 (IL) 13外显子 4单核苷酸多态性 (SNP)A2 0 4 4G与中国北方人群哮喘易感性的相关关系。方法　扩增 32例有明显支气管哮喘家族史的患者和 2 0名健康对照者的IL 13exon 4 ,所得PCR产物与分子信标杂交 ,利用毛细管电泳检测杂交产物 ,并进行序列测定。结果分子信标和毛细管电泳 ,联合检测支气管哮喘患者IL 13exon 4第 2 0 4 4位基因型 ,为A的频率是31 2 % ,为G是 6 8 8% ,与测序结果相同。经统计学分析 ,支气管哮喘患者与健康对照者的等位基因频率差异具有显著意义 (χ2 =2 4 3,P <0 0 1)。结论　分子信标毛细管电泳联合技术高效、特异、灵敏 ,可对PCR产物进行分析 ,适用于碱基突变的检测。IL 13+2 0 4 4位A/G多态性与支气管哮喘的发病密切相关。; 姜晓峰王金辉吕富桢; 关键词：哮喘白细胞介素13 基因多态性

IL-13及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位: 2006年; 目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白真核表达载体,转染C0S-7细胞,以激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及其在细胞内的分布情况。结果:两种融和蛋白表达载体均构建正确,将其转染COS-7细胞后,在阳性克隆胞浆内均可见明亮的绿色荧光,胞核空虚。结论:成功构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达,表达的两种融和蛋白细胞内分布特征没有区别,均位于胞浆内。; 王育文许勇臣姜晓峰; 关键词：白细胞介素-13 变异体绿色荧光蛋白

野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析: 2006年; 目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白。方法:用PCR扩增IL13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL13’)基因。将IL13和IL13’基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL13和pET30a(+)IL13’,分别命名为pETIL13和pETIL13’。以重组体转化E.coliBL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达。表达产物用NiNTA层析柱进行纯化。纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性。结果:在E.coliBL21(DE3)中表达了IL13/IL13’His6融合蛋白。经SDSPAGE显示,融合蛋白的Mr约17000,经Westernblot证实为人IL13。表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白。复性后的包涵体检测具有生物学活性。结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础。; 姜晓峰郭晓英万丽平; 关键词：原核表达活性分析

白细胞介素13及变异体刺激呼吸道平滑肌后差异蛋白分析: 2007年; 目的应用双向电泳及质谱技术对野生型及变异型白细胞介素13(IL-13)刺激后的ASMC 总蛋白进行差异比较研究,借此分析差异表达蛋白与支气管哮喘的关系,为哮喘的治疗提供新的靶标。方法用固相 pH 双向电泳分离,分别给予野生型 IL-13及变异型 IL-13刺激的 ASMC 总蛋白组成分,找出异常 IL-13处理后与野生型 IL-13处理后有明显差别的蛋白斑点,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF)进行鉴定部分差异蛋白质。结果获得了分辨率高,重复性好的电泳图谱,在野生型 IL-13刺激组和变异型 IL-13刺激组分别平均有(840±21)个和(892±17)个蛋白点(n=3)被检测,匹配的点数为(685±19)个,选取5个未匹配点做质谱分析,鉴定其中3个分别为 stathmin 1,Ribosomal protein p0,NADH dehydrogenase。结论本研究结果显示不同处理组的ASMC 总蛋白表达存在差异,这些差异蛋白有可能为阐明野生型 IL-13及其变异体引发哮喘机制提供新的实验证据。; 姜晓峰郭晓英梁红艳杜雪飞辛瑜薛丽傅松滨; 关键词：白细胞介素13 肌细胞平滑肌电泳

白细胞介素13与其受体间作用机制的探讨被引量：9: 2005年; 白细胞介素13(IL13)与其受体间的作用是体现生物学活性的基础,而IL13氨基酸残基突变产生的不同型体能改变这种作用机制,使受体信号增强或减弱,随之生物学活性发生变化,了解这种机制,将为临床上防治IL13相关疾病提供新的策略。; 许勇臣姜晓峰; 关键词：白细胞介素13 受体蛋白质分子结构

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国家自然科学基金(30371364)