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人乳头瘤病毒16,18型核酸检测质控物的研制及应用被引量：3: 2007年; 目的研制得到能模拟真实临床标本的人乳头瘤病毒(HPV)高危型16,18核酸检测质控物,并探讨其用于临床实验室室间质量评价的有效性。方法采用分子克隆方法得到含 HPV-16靶基因的重组质粒载体,转染已含 HPV-18的宫颈癌上皮细胞系(HeLa),获得含 HPV-16,18核酸的上皮细胞原液,经适当灭活后甲醇固定。将该细胞原液适当稀释后,组成含阴阳性共12份标本的样本盘,发至全国各开展临床 HPV-16,18检测的实验室,对回报结果进行分析。结果细胞原液经1:10,1:50,1:100,1:500稀释,实时荧光 PCR 检测,HPV-16 Ct 值分别为29.10,31.19,32.15和32.73,HPV-18 Ct 值分别为30.32,32.13,32.22和35.55。质控物在4℃可稳定40 d 以上,盲邮至新疆乌鲁木齐、内蒙古呼和浩特和厦门的样本,返回后检测无明显变化。44个临床实验室对高浓度样本的检测符合率平均为95.1%,对低浓度样本的检测符合率为57.4%。对阴性样本符合率为98.3%。结论获得可模拟临床标本的 HPV-16,18核酸检测质控物,质评结果表明可有效地用于临床实验室室间质评。; 谢珊李金明; 关键词：乳头瘤病毒聚合酶链反应

标准物质在乙型和丙型肝炎病毒核酸检测标准化中的重要性被引量：9: 2007年; 病毒核酸是HBV 和HCV 感染诊断和治疗监测的重要标志物,病毒核酸标准物质是不同实验室间检测结果可比性试剂溯源性、测量程序的评价和质量控制的物质基础。无生物传染危险性且稳定的标准物质的研究是 HBV 和 HCV 核酸检测标准物质的发展方向。; 李金明; 关键词：乙型肝炎病毒丙型肝炎病毒核酸检测

含风疹病毒部分核酸序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：7: 2005年; 目的　构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶 (RNase)的特性。方法　用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶HindⅢ酶切,获得所需要的目的片段,并与用HindⅢ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1 Ru。再转化E ColiBL21 DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果　成功构建了新的表达载体pNCCL1 Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性。结论　我们构建的表达载体pNCCL1 Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品。; 彭建明李金明徐克前王忠芳王露楠邓巍; 关键词：风疹病毒病毒样颗粒包膜蛋白核糖核酸酶核酸序列 IPTG

一致-简并杂交寡核苷酸引物设计用于未知病原微生物检测的进展被引量：3: 2006年; 近年研究发现，暴发的“非典型性肺炎”，禽流感及四川发生的猪链球菌感染等要么是已发现的病原微生物家族中的新成员，要么是原来不感染人的动物病原体。因此，快速、及时、准确定性检测这些病原体，对防治疾病具有重要意义。; 谢珊李金明; 关键词：病原微生物检测引物设计寡核苷酸猪链球菌感染杂交非典型性肺炎

External quality assessment on detection of hepatitis C virus RNA in clinical laboratories of China被引量：6: 2008年; 就象许多研究的背景在欧洲国家执行了，一个优秀保证节目被临床的实验室的国家中心在中国(NCCL ) 建立了。结果证明外部优秀评价显著地为丙肝的量的评估改进实验室性能病毒(HCV ) RNA.Methods 浆液面板 annuatly 被送到两次在中国执行了 HCV RNA 察觉的临床的实验室。由 5 组成的每块面板编码了样品。所有实验室被请求在包含了质或量的测试调查结果，使用的试剂和仪器的相关信息的严峻的结果上在要求的时间时期和报告以内执行察觉。所有积极样品在合作研究和指定为?ㄠ?敯瑳慲楤汯?敒?瑬?的比较目标价值( TG )的范围为 HCV RNA 对第一个国际标准被校准???????愠潰瑰獯獩???剅?洠乒???????????吗? 挠汯牯'虘b ？？; WANG Lu-nan ZHANG Rui SHEN Zi-yu CHEN Wen-xiang LI Jin-ming; 关键词：聚合酶链反应丙型肝炎病毒

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究被引量：3: 2008年; 目的研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体（chlamydia trachomatis，CT）PCR检测质控物，并进行稳定性研究。方法在充分查阅文献的基础上，明确国内外已有文献报道的CTPCR检测的靶序列，选择最普遍应用的cT质粒序列，采用重叠（overlap）PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的CT质粒序列的重组真核表达载体，即pTARGETTM-CT质粒。然后，将载体以脂质体转染的方式转染人宫颈上皮细胞（HTB-SiHa细胞）中，收集细胞，经含20％小牛血清的细胞培养液稀释，即成为能模拟cT检测临床样本的细胞质控物。最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性。结果成功构建了含CT质粒（178-610）、（1219—1993）、（2471-3260）、（5239-864）、（6722-499）等5个片段的重组真核表达载体，并转入HTB—SiHa细胞中，得到了可模拟临床样本的CTPCR检测的质控物。采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CTPCR检测试剂盒对转染后样本进行检测，得到阳性结果；定量为3．21×10^8拷贝／ml；倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3．3；对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现，在各温度下保存的样本经检测后的结果间差异无统计学意义，所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月。结论利用重叠PCR与双酶切的方法。建立了一种将多间隔片段连接并构建人同一载体的简便有效的方法。成功地得到了可模拟临床标本的CTPCR检测质控物。; 霍虹王清涛王露楠李金明; 关键词：衣原体沙眼聚合酶链反应

沙眼衣原体聚合酶链反应检测研究进展被引量：7: 2006年; 霍虹王清涛李金明; 关键词：聚合酶链反应检测沙眼衣原体实验室诊断方法人类免疫缺陷病毒传播疾病无症状携带者

乙型肝炎病毒DNA标准物质的研究被引量：13: 2007年; 目的研制国内用于HBVDNA扩增检测的血清标准物质。方法用HBVDNA阴性血浆将阳性血浆稀释至含量约1．00×10^6拷贝／ml，0．5ml／支分装，然后进行真空冷冻干燥。检测方法采用实时荧光定量PCR方法和罗氏公司的PCR内标定量方法。检测室温14d、37K27d、2～8℃6个月和-20℃时制备物的HBVDNA含量变化，确定其在不同条件下的稳定性。2年内不定期检测8次-20℃和-70℃保存时制备物的HBVDNA含量变化，确定其长期保存的稳定性。取30份样本分别检测其HBVDNA含量，并与混合后样本的HBVDNA含量进行比较，确定制备物的均匀性。制备标准品的HBVDNA含量通过与国际标准物质比对及根据国际标准物与制备标准物的吸光度值建立的标准曲线计算获得。结果该标准物质HBVDNA定值为（1．03±0．21）×106U／m1。稳定性实验表明制备物在室温、37℃和2～8℃时的HBVDNA含量与对照组（-20℃）比较，差异无统计学意义（f值分别为0．152、0．949、1．300，P值均〉0．05）；-20℃保存2年的制备物HBVDNA含量与对照组（-70℃）比较，差异无统计学意义（t=0．449，P〉0．05）。均一性检测结果表明瓶间不精密度为4．46％，批内精密度和总精密度差异无统计学意义（F=1．0250，P〉0．05）。结论该制备物达到了国家一级标准物质的要求，可以作为用于核酸扩增检测的HBVDNA标准物质。; 王露楠邓巍申子瑜陈文祥李金明; 关键词：肝炎病毒乙型 DNA 标准物质

内含人前列腺特异性抗原 mRNA 的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达被引量：1: 2006年; 目的构建原核表达系统,表达内含人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)mRNA 部分序列的病毒样颗粒,该病毒样颗粒因噬菌体蛋白包被重组 RNA 而使其包裹的RNA 具有耐核糖核酸酶(RNase)的特性。方法采用聚合酶链反应扩增人前列腺特异性抗原cDNA 的部分保守区域,进行 TA 克隆后用限制性内切酶 Hind Ⅲ酶切获得所需要的目的片段,与用Hind Ⅲ酶切的表达载体 pNCCL1相连接.构建一新的表达载体 pNCCL1-PSA,再转化 E.Coli BL21-DE3,用 IPTG 诱导表达噬菌体 MS2包膜蛋白,包膜蛋白可进行自我组装成病毒样颗粒并将 PSAmRNA 部分序列包裹到病毒样颗粒内。结果成功构建得到了新的表达载体 pNCCL1-PSA,经原核表达得到耐 RNase 的内含 PSA mRNA 部分 RNA 序列的病毒样颗粒。结论本研究得到的表达载体 pNCCL1-PSA 及原核表达系统.可以作为以后构建和制备耐 RNase 的 PSA mRNA 标准品和质控品的的平台,为实验室 PSA mRNA 的检测提供新的标准品及质控品。; 王露楠吴健民彭建明李金明王忠芳邓巍; 关键词：前列腺特异性抗原病毒粒子噬菌体

Lyophilized standards for the calibration of real time PCR assay for hepatitis C virus RNA被引量：3: 2006年; Background Since October 1997, an international standard for hepatitis C virus (HCV) nucleic acid amplification technology assay, 96/790, has been available. We compared a series of lyophilized standards with known HCV RNA concentrations against the international standard in fluorescence quantitative PCR detection. Methods A series of lyophilized sera were calibrated by ROCHE COBAS AMPLICOR HCV Monitor test against the international standard and sent to various manufacturers to analyse the samples using their own kits. Then calibration curves from the series were compared with that obtained from the external standard calibration curve with the manufacture’s series. Results The standard calibration curve with the series of lyophilized serum showed an excellent correlation (R2>0.98), slope and intercept that were similar to those from the manufacture’s series. When the standard calibration curve from the series of lyophilized standards were used to define the values of the given sample, lower coefficients of variation between kits from different manufactures were obtained. Conclusion The results showed that the lyophilized standards could be used to setup the standard calibration curve for clinical HCV RNA quantitative PCR detection.; WANG Lu-nanWU Jian-minDENG WeiSHEN Zi-yuCHEN Wen-xiangLI Jin-ming; 关键词：丙型病毒肝炎聚合酶联反应病理机制

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