国家自然科学基金(30471836)
- 作品数：10 被引量：36H指数：4
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- 骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑损伤的基础研究与应用前景被引量：3
- 2007年
- 近年研究发现骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在体外适当的诱导条件下可分化为具有成熟神经元功能的神经细胞,移植到脑损伤模型体内后能明显改善神经功能。本文就BM-MSCs诱导分化为神经细胞的基础研究及其在缺血性脑损伤治疗中的应用作一综述。
- 王燕贲晓明
- 关键词：骨髓细胞诱导分化神经细胞脑损伤
- 小鼠非黏附骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究
- 2010年
- 目的探讨小鼠非黏附骨髓间充质干细胞（non-adherent bone marrow-derived mesenchymal stem cell，NA—BM—MSC）在体外、体内尤其是缺血损伤的脑内向神经元样细胞分化的能力。方法传代纯化后的NA—BM-MSC经表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导后，通过甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色检测神经元特异性核蛋白和神经中间丝蛋白的表达情况；将来自β-半乳糖苷酶转基因小鼠的NA—BM-MSC在立体定位仪下移植到小鼠缺血损伤的脑内，8周后通过LacZ组织化学染色和免疫组织化学染色检测供体细胞在缺血脑内微环境中存活以及神经元特异性核蛋白的表达情况。结果NA—BM-Msc经过诱导能够表达神经元特异性核蛋白和神经中间丝蛋白并有尼氏体形成；移植到损伤脑内后，LacZ组织化学染色发现在缺血侧供体细胞能够存活，免疫组织化学单、双染显示在缺血坏死区及周围都检测到了β-半乳糖苷酶阳性的供体细胞，其中的部分阳性细胞还同时表达神经元特异性核蛋白。结论NA-BM-MSC在体外能够分化成神经元样细胞，在小鼠缺血损伤的脑组织内也能够存活、迁移，部分细胞还能分化为神经元样细胞。
- 王燕陈燕玲贲晓明周晓玉苗登顺
- 关键词：间质干细胞细胞分化神经元脑缺血
- 小鼠非黏附骨髓间充质干细胞移植到缺血性脑损伤部位向神经元样细胞的分化被引量：1
- 2009年
- 背景:小鼠非黏附骨髓间充质干细胞在体外可以不断形成成纤维细胞集落形成单位,并且可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出一定的多分化潜能。目的:探讨小鼠非黏附骨髓间充质干细胞移植到缺血损伤脑内后分化为神经细胞的能力。方法:取β-Gal转基因小鼠,分离双侧股骨、胫骨,全骨髓法分离总骨髓细胞,采用反复转移非黏附的骨髓细胞培养法收集纯化后的第5代非黏附骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为1×1012L-1备用。两组C57BL/6J小鼠均建立大脑中动脉阻塞模型,造模后7d,细胞移植组将第5代非黏附骨髓间充质干细胞悬液3μL定向移植到小鼠脑损伤处,模型组注射等量生理盐水。移植8周后观察供体细胞在缺血脑内微环境中的存活、分布及分化能力。结果与结论:LacZ组织化学染色发现,8周后供体细胞仍可以表达β-Gal蛋白,在缺血侧供体细胞能够存活。免疫组织化学单染和双染后发现,在缺血模型的坏死区及坏死边缘区均可检测到β-Gal阳性的供体细胞,部分细胞还同时表达神经细胞特异性蛋白NeuN及神经胶质细胞特异性标记GFAP。提示小鼠非黏附骨髓间充质干细胞在缺血动物模型的脑内能够存活、迁移,部分细胞还能分化为成熟的神经元样细胞或神经胶质细胞,参与脑损伤修复。
- 吴玉新王燕贲晓明
- 关键词：骨髓间充质干细胞脑缺血神经元
- 表皮生长因子干预小鼠非黏附骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落形成及向神经元样细胞的分化被引量：6
- 2010年
- 背景:非黏附骨髓间充质干细胞在体外可以不断形成成纤维细胞集落形成单位,并且可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出一定的多分化潜能。目的:探讨表皮生长因子对非黏附骨髓间充质干细胞形成成纤维细胞集落的影响,及其在体外向神经细胞分化的能力。方法:分离小鼠双侧股骨、胫骨,全骨髓法分离总骨髓细胞,采用反复转移非黏附的骨髓细胞培养法纯化非黏附骨髓间充质干细胞。取第5代总骨髓细胞和非黏附骨髓间充质干细胞,加入含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的神经细胞诱导液培养2周。观察非黏附骨髓细胞产生成纤维细胞集落形成单位的能力,表皮生长因子对成纤维细胞集落形成单位的影响,甲苯胺蓝和免疫细胞化学染色鉴定相关蛋白的表达。结果与结论:总骨髓细胞、反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位。给予表皮生长因子处理后,非黏附骨髓间充质干细胞成纤维细胞集落形成单位的效率明显增高。诱导2周后,免疫细胞化学染色显示,总骨髓细胞和非黏附骨髓间充质干细胞均表达神经细胞特异性蛋白NeuN和NF-200;经甲苯胺蓝染色在部分细胞中可见神经元特异性标记尼氏体。证实表皮生长因子可有效促进小鼠非黏附骨髓间充质干细胞形成成纤维细胞集落形成单位的效率,经反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞能够诱导分化为神经细胞。
- 吴玉新王燕贲晓明
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经细胞表皮生长因子
- 表皮生长因子对非黏附骨髓间充质干细胞克隆形成效率的影响被引量：4
- 2009年
- 背景：目前普遍认为骨髓间充质干细胞是一类高度黏附的成纤维样细胞，但也有研究显示处于非黏附状态的骨髓间质细胞也具有自我复制及多向分化潜能。目的：探讨表皮生长因子对骨髓中存在的非黏附骨髓间充质干细胞产生成纤维细胞集落形成单位的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-07／12在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料：4周龄雄性C57／BL6小鼠6只，由南京医科大学实验动物中心提供。表皮生长因子为美国Sigma公司产品。方法：全骨髓法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，调整细胞浓度为2×10^9L^-1。收集第3代细胞，分别接种于向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞分化的培养液中进行诱导。取30mL骨髓间充质干细胞悬液，平均分到两管中，表皮生长因子处理组加入终浓度为10μg／L表皮生长因子，空白对照组加入普通完全培养基，采用反复转移非黏附骨髓细胞培养法，每天将非黏附骨髓细胞转移到新的培养皿，原来的皿中为总骨髓来源的贴壁细胞，转移第1次定义P01，第2次为P02，依次类推，培养12d终止。主要观察指标：骨髓间充质干细胞的鉴定结果，亚甲基蓝染色显示每皿细胞克隆的形成情况，计算克隆形成区域占皿底面积的百分比及克隆数目。结果：非黏附骨髓间充质细胞在第4天转移到新的培养皿后，继续培养仍能够贴壁生长，并逐渐扩增形成克隆；诱导后能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。给予表皮生长因子处理后，无论是总骨髓来源的贴壁细胞，还是反复转移的非黏附骨髓间充质干细胞，均能够不断产生成纤维细胞集落形成单位，且数量明显多于空白对照组（P〈005）。表皮生长因子处理组总骨髓来源的贴壁细胞、P01-P05非黏附骨髓间充质干细胞所形成的贴壁细胞数分别是空白对照组�
- 王燕陈燕玲贲晓明苗登顺
- 关键词：表皮生长因子
- 非黏附骨髓间充质干细胞的体外培养与鉴定被引量：7
- 2008年
- 目的探讨小鼠骨髓中是否存在非黏附间充质干细胞(BM-NA-MSC),体外能否形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-F),能否在适当的条件下分化为脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞。方法分离小鼠总骨髓细胞,体外培养,每天转移未贴壁的非黏附骨髓细胞(NA-BMC)到新培养环境中继续培养,每组细胞长满12 d后,亚甲基蓝染色显示形成的克隆,计数克隆个数;在总骨髓细胞培养到第4天时收集未贴壁的NA-BMC到新的培养皿中,待细胞贴壁生长达融合后传代纯化,取第5代细胞接种于向脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞诱导分化的培养液中,2周后分别进行油红染色、抗Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色及茜素红染色检测脂肪滴、Ⅱ型胶原和钙化结节的形成和表达。结果小鼠骨髓细胞体外培养条件下不仅总骨髓细胞可以形成CFU-F,而且反复转移的NA-BMC也能不断形成CFU-F;给予适当的诱导条件,非黏附来源的骨髓细胞体外能够分化为产生油滴的脂肪细胞、表达Ⅱ型胶原的软骨和具有钙化能力的成骨细胞。结论小鼠骨髓中存在一类NA-MSC,体外可以形成CFU-F,还可分化为脂肪、软骨和成骨细胞,表现出一定的多分化潜能,为下一步作为种子细胞用于移植实验的研究提供了前提。
- 王燕陈燕玲贲晓明喻文亮周晓玉苗登顺
- 早产儿脑损伤的高危因素被引量：17
- 2008年
- 目的探讨引起早产儿脑损伤的高危因素,以降低其发病率,改善神经发育预后。方法对2005年8月-2007年8月本院NICU收治的130例早产儿于出生第1、3、4、7、15天及第1、3、6个月行颅脑超声检查,Ⅰ、Ⅱ级脑室内出血(IVH)为轻度脑损伤;Ⅲ、Ⅳ级IVH/脑室周围白质软化(PVL)为重度脑损伤。应用SPSS11.5统计软件对其胎龄、出生体质量、母亲有无妊娠高血压综合征、胎膜早破、分娩方式(阴道分娩、剖宫产)、患儿产前有无宫内窘迫、产时有无窒息、窒息复苏(包括气管插管或面罩加压给氧)、是否给予肺泡表面活性物质、出生后有无呼吸暂停、惊厥、低氧血症、高碳酸血症、低碳酸血症、酸中毒、有无吸氧、是否采用鼻塞持续呼吸道正压(nCPAP)或呼吸机辅助通气17个项目行Logistic回归分析。结果130例早产儿中,颅脑超声检出脑损伤88例,发生率66.7%。其中,轻度脑损伤29例(占33%)(IVHⅠ级5例,Ⅱ级24例);重度脑损伤59例(占67%)[IVHⅢ级53例,Ⅳ级1例,PVL5例(伴IVHⅠ级1例,Ⅱ级、Ⅲ级各2例)]。胎龄越小、出生体质量越低,脑损伤发生率越高;窒息复苏、出生后低氧血症及采用nCPAP或呼吸机辅助通气也是早产儿脑损伤较重要的高危因素,这些因素均可影响早产儿脑血流自主调节功能,触发或加重脑损伤。结论小胎龄、低出生体质量、窒息复苏、低氧血症及辅助通气等为早产儿脑损伤高危因素,通过影响早产儿脑血流自主调节功能,进而影响脑血流动力学参数,导致早产儿脑损伤的发生。
- 陆亚东刘登礼贲晓明
- 关键词：脑损伤高危因素胎龄出生体质量窒息复苏脑血流
- 外周血多潜能间充质干细胞的研究进展
- 2008年
- 外周血中存在着少量的多潜能间充质干细胞。它们具有类似骨髓间充质干细胞的生物学特性，可以自我增殖，能多向分化。在体外诱导和体内可以分化形成中胚层及其他胚层组织。目前人们还不清楚外周血间充质于细胞的起源和去向，但推测它们的存在可能跟骨髓多潜能间充质干细胞的系统迁移及造血形成细胞，间充质细胞共同前体的存在等相关。
- 陈燕玲王燕贲晓明
- 关键词：干细胞细胞系
- 表皮生长因子对外周血间充质干细胞原代克隆形成的影响及其传代后多向分化潜能被引量：1
- 2009年
- 背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差。目的:观察表皮生长因子对体外分离培养的原代小鼠外周血间充质干细胞克隆形成的影响,以及外周血间充质干细胞传代后的多向分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-09在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成。材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16只,购于南京医科大学骨与干细胞研究中心实验动物中心。重组人表皮生长因子为Sigma公司产品。方法:无菌条件下从小鼠心脏采血,裂解红细胞后应用贴壁法分离外周血间充质干细胞,通过传代进行纯化和扩增。将原代细胞分2组进行体外培养,实验组向α-MEM培养液中加入10μg/L表皮生长因子,对照组给予不含表皮生长因子的α-MEM培养液,16d后行亚甲基蓝染色,计算克隆面积。取第3代外周血间充质干细胞,以1×104/cm2密度接种后,分别向成骨和脂肪方向诱导分化。主要观察指标:外周血间充质干细胞的生长特性,外周血间充质干细胞体外诱导成骨、成脂能力。结果:倒置相差显微镜下,外周血间充质干细胞贴壁生长,形态类似于骨髓间充质干细胞,呈成纤维细胞样;但其形成克隆的时间较骨髓间充质干细胞有所推迟,且原代细胞克隆形成率低于骨髓间充质干细胞;亚甲基蓝染色结果示实验组外周血间充质干细胞克隆形成率明显高于对照组(P<0.05)。外周血间充质干细胞成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、总胶原染色及茜素红染色均呈强阳性;成脂诱导后油红染色呈阳性,有一定数量的脂滴形成。结论:外周血中存在少量的间充质干细胞,能自我增殖,表皮生长因子可有效促进原代外周血间充质干细胞克隆的形成;体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨和成脂分化特性。
- 陈燕玲王燕贲晓明周晓玉苗登顺
- 关键词：表皮生长因子
- 儿童骨髓间充质干细胞体外培养与富集效率的研究被引量：2
- 2008年
- 目的比较密度梯度离心法和全骨髓培养法分离培养儿童骨髓间充质干细胞(BMSCs)获得的细胞纯度与克隆形成效率。方法取等量抗凝的儿童骨髓分别以密度梯度离心法和全骨髓培养法分离培养BMSCs,传代至第3代分别计数2种方法所得BMSCs的细胞总数,流式细胞仪检测表面标记物及其纯度,对第5代BMSCs分别绘制生长曲线,全骨髓培养法培养至第6代流式细胞仪再检测表面标记物及其纯度。结果2种方法均能有效培养出BMSCs,BMSCs强表达CD105及CD13,低表达CD34;3mL骨髓样本用全骨髓培养法扩增至第3代平均可获得3.15×107个细胞,而密度梯度离心法3mL骨髓只获得1.08×107个细胞,二者有显著性差异(P<0.05);密度梯度离心法第3代BMSCs纯度达95%以上,全骨髓培养法第3代BMSCs纯度约85%,多次换液传至第6代纯度可达到95%以上;2种方法第5代BMSCs生长曲线近似,接种后0～3d为生长潜伏期,3～6d为对数生长期,之后进入平台期,无显著性差异(P>0.05)。结论密度梯度离心法分离培养BMSCs,可在短时间内获取纯度较高的BMSCs;全骨髓培养法分离培养BMSCs,可从少量标本获得最大数量的BMSCs,多次换液传代也可获得纯度较高的BMSCs。
- 周莉张兰芳陆勤方拥军杨引贲晓明
- 关键词：骨髓间充质干细胞儿童
