国家自然科学基金(81160122)
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
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- 缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞ATP水平和细胞色素C表达的影响被引量：5
- 2014年
- 背景脑膜上皮细胞（MECs）是构成脑脊液-视神经屏障的主要细胞成分。脑脊液-视神经屏障的损害可能会导致脑脊液组分的失衡，使视神经受到各种致病因素的攻击。目前对于MECs在视神经疾病中的病理作用研究甚少，机制尚不明确。目的探讨缺氧条件下人MECs的功能变化，为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株分别制备成密度为2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔和1×10^4个／孔的细胞悬液，各取100μl分别接种于96孔板中，分别在常规培养基及体积分数21％O2（常氧组）和1％O2（缺氧组）环境下孵育2d，采用MTS法测定和比较不同氧环境下人MECs的吸光度（A490）值；采用CASY1法检测和比较不同氧环境下细胞体积及直径的变化；采用光度计测定MECs暴露不同氧环境下1d、2d后线粒体产生ATP量的变化；采用免疫荧光技术测定不同氧环境下细胞内细胞色素C的表达和定位。结果缺氧组2．5×10^3个／孔、5．0×10^3个／孔、1×10^4个／孔细胞密度组MECs的增生值（A490）分别为0．399±0．009、0．393±0．009和0．496±0．026，分别较相应的常氧组的0．424±0．131、0．413±0．111和0．537±0．021明显下降，差异均有统计学意义（t=3．777，P=0．004；t=3．251，P=0．009；t=3．037，P=0．013）。与常氧组细胞比较，缺氧组细胞的直径和体积均明显增加[（20．970±0．127）μm vs．（21．198±0．048）μm，t=-3．762，P=0．006；（5805±73）fl vs．（6026±106）fl，t=-4．124，P=0．002）]。缺氧组和缺氧＋底物组细胞分别培养2d后，细胞中ATP产生量分别为（0．900±0．225）mmol／（L·g）、（0．952±0．075）mmol／（L·g），均明显低于常氧组的（1．389±0．145）mmol／（L·g）和常氧＋底物组的（1．401±0．122）mmol／（L·g），差异均有统计学意义（P=0．001、0．002、0．001）。常氧组细胞中细�
- 辛晓蓉巩天祥赵莉李新章
- 关键词：缺氧细胞色素C
- 谷氨酸对视神经脑膜上皮细胞的兴奋性毒性作用及其氧化应激机制被引量：3
- 2017年
- 背景作为脑脊液－视神经屏障的主要细胞成分，视神经脑膜上皮细胞（MECs）直接与脑脊液相接触，脑脊液中的组分改变可影响MECs的功能，进而对视神经的功能产生不利影响。
目的探讨脑脊液中兴奋性神经递质谷氨酸对MECs功能的影响，为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株制备成悬液并接种于96孔培养板中，密度为1×104/孔，分别在培养液中用添加100、200、400、600、800和1 000 μmol/L谷氨酸孵育12、24、36、48和72 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用MTS法测定各组MECs的增生率（吸光度A490）值。采用600 μmol/L谷氨酸分别孵育MECs 24 h和48 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用实时定量PCR法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）mRNA和热休克蛋白90（HSP90）mRNA的相对表达量；采用ELISA法检测细胞的总抗氧化能力（T-AOC），并通过荧光探针DCFH-DA观察细胞活性氧（ROS）的荧光强度。结果培养MECs生长良好，培养后72 h约80%细胞达到融合。不同浓度谷氨酸培养组随着谷氨酸浓度的增加及作用时间的延长细胞增生率逐渐下降，总体比较差异均有统计学意义（F浓度＝52.501，P〈0.001；F时间＝8.505，P〈0.001）。实验后24 h和48 h谷氨酸处理组细胞中SOD mRNA相对表达量均明显低于同时间点正常对照组，差异均有统计学意义（t＝20.278、t＝16.724，均P〈0.001）；谷氨酸作用MECs后24 h细胞中HSP90 mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（t＝5.065，P＝0.002）。实验后24 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（30.835±2.094）nmol/（min·L），低于正常对照组的（32.873±2.317）nmol/（min·L），但差异无统计学意义（t＝1.599，P＝1.414）；实验后48 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（29.561±1.831）nmol/（min·L），低于正常对照组的（33.680±2.039）nmol/（min·L
- 辛晓蓉巩天祥洪缨党鸿
- 关键词：谷氨酸
- 糖尿病视网膜表面膜细胞成分的研被引量：1
- 2013年
- 目的探讨在视网膜内界膜完整的情况下糖尿病视网膜表面膜中的主要细胞成分,推测这些增殖细胞的来源,为糖尿病视网膜表面膜形成的病理机制提供新的思路。方法视网膜表面膜为糖尿病视网膜表面膜,10眼来自玻璃体视网膜手术眼,2眼取自尸体眼(生前为糖尿病视网膜表面膜眼),这些病例中内界膜都保持完整。通过HE染色、免疫组织化学和电镜检查研究表面膜的细胞成分。结果神经纤维酸性蛋白、S-100蛋白、神经元特异性烯醇化酶、波形蛋白在视网膜表面膜表达阳性,提示表面膜中的主要细胞成分为星形胶质细胞。电镜观察可见具有规则圆核、细胞质中有成熟线粒体和高尔基器的星形胶质细胞,细胞表面见长的胞突和微绒毛,表面膜中见纤维性胶原。结论星形胶质细胞可能在糖尿病视网膜表面膜形成中发挥重要的作用。内界膜完整的情况下出现的表面膜,星形胶质细胞为其主要细胞成分。
- 辛晓蓉巩天祥
- 关键词：内界膜S-100蛋白神经元特异性烯醇化酶波形蛋白
- 视神经脑膜上皮细胞研究进展被引量：1
- 2014年
- 目前视神经疾病基础研究的热点大多侧重于神经胶质细胞、视网膜神经节细胞上,而对于包绕视神经的脑膜以及覆盖视神经脑膜的主要细胞成分——脑膜上皮细胞在视神经疾病中作用的研究甚少。脑膜上皮细胞直接与脑脊液相接触,在脑脊液和视神经之间参与屏障的形成,在保持屏障完整性上发挥重要作用。视神经脑膜上皮细胞在各种应激下可能发生结构和功能变化,从而影响脑脊液和视神经之间屏障的正常生理作用,可能成为导致视神经疾病的机制之一。本文综述了脑膜上皮细胞在维持脑脊液和视神经屏障中作用的最新研究进展,为进一步研究视神经疾病提供理论基础。
- 辛晓蓉巩天祥
- 关键词：视神经脑脊液
- 缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞内质网和线粒体膜电位的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较MECs的总抗氧化能力(total anti-oxidative capacity,T-AOC);采用MitoTracker Red检测和比较MECs在正常氧和缺氧环境下作用2 d的线粒体膜电位的变化;通过测定钙联蛋白的荧光染色,以评价MECs暴露于氧化应激环境后对内质网功能的影响。结果与对照组相比,缺氧组的氧化应激能力降低,结果显示T-AOC下降。对照组和缺氧组细胞分别培养1 d后,细胞中T-AOC分别为(0.012 4+0.001 1)U·L-1和(0.011 9+0.009 0)U·L-1,差异无统计学意义(t=0.915、P=0.382)。分别培养2 d后,缺氧组细胞中T-AOC(0.010 7+0.008 3)U·L-1低于对照组(0.012 9+0.008 7)U·L-1,差异有统计学意义(t=4.616、P=0.001)。不同氧环境作用于细胞2 d后,采用共焦显微镜荧光探针方法分析作用于对照组和缺氧组的MECs线粒体膜电位的变化,结果发现缺氧组细胞荧光强度与对照组相比明显减低;同时通过荧光显微镜观察发现,缺氧组MECs钙联蛋白绿色荧光强度较对照组明显增强。结论缺氧通过影响MECs内质网及线粒体功能而影响其氧化应激能力。
- 辛晓蓉巩天祥
- 关键词：缺氧内质网线粒体膜电位
