国家自然科学基金(30471626)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 相关作者：罗雯吴兴安徐志凯张芳琳白文涛更多>>
- 相关机构：第四军医大学西安文理学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 植物抗体及其应用被引量：2
- 2005年
- 20世纪80年代末科学家将抗体基因转入烟草表达,标志着植物抗体的诞生。人类既可以以植物为生物反应器异源表达和生产具有药用及商业价值的蛋白质;也可用抗体在植物体中进行免疫调节,以研究植物生理代谢机制,或增加植物抵抗病虫害的能力。本文旨对植物抗体的优越性、表达生产及其在医药学、植物抗病及代谢等领域的进展进行综述和讨论。
- 陈瑛瑛吴兴安
- 关键词：植物抗体转基因植物
- 抗汉滩病毒中和性鼠／人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
- 2008年
- 目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMB IA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。
- 周伟吴兴安罗雯胡刚张芳琳白文涛张亮于澜史梦远徐志凯
- 关键词：汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体
- 抗HTNV mAb 3G1单链抗体基因转化植物的研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建抗HTNV mAb 3G1 scFv的转基因拟南芥植株。方法从含有3G1 scFv基因的重组质粒中酶切获得含有该目的基因的表达框,将其克隆入载体pCAMBIA2301,构建植物表达载体3G1scFv-pCAMBIA2301。通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR和Southern blotting检测是否获得转基因植株。组织化学染色检测标记基因GUS是否表达。结果限制性内切酶酶切鉴定结果证明3G1 scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得3G1scFv-pCAMBIA2301重组质粒。PCR和Southern blotting检测证明获得抗HTNV mAb 3G1 scFv的转基因拟南芥植株。组织化学染色结果表明,标记基因亦高效表达。结论成功地将外源基因转入拟南芥中并表达,为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础。
- 罗雯吴兴安陶贵荣李莺徐志凯
- 关键词：汉滩病毒单链抗体转基因植物
- 抗汉滩病毒鼠源单抗3G1单链抗体转化拟南芥的研究被引量：2
- 2006年
- 目的运用植物转基因技术,探索构建表达抗汉滩病毒鼠源单抗3G1单链抗体基因的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法将鼠源单抗3G1单链抗体基因连接在双元表达载体pBI121CaMV35s启动子下游,构建了能在植物中高效表达的载体pBI121-3G1ScFv。利用根瘤农杆菌介导的抽真空转基因技术,将其转入野生拟南芥中。结果经过酶切分析、PCR验证及抗性筛选,结果表明3G1ScFv基因被导入拟南芥组织细胞,获得9株T0代转基因植株。结论本研究为进一步培育3G1ScFv遗传表达植株奠定了基础。
- 赵咏梅罗雯吴兴安徐志凯
- 关键词：植物表达载体转基因植物
- 生菜基因转化组织培养受体系统的建立被引量：4
- 2010年
- 以散叶生菜大速生(Lactuca sativavar.capatata L.)为试材,以MS为基本培养基,采用不同的激素配比,经愈伤组织诱导、芽分化、生根、移植入土四个步骤的离体培养,获得正常的再生植株,建立了散叶生菜大速生的基因转化受体系统,为下一步的基因转化工作提供了有利条件。高效诱导愈伤组织培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/L NAA,高效诱芽培养基为MS+0.1mg/L6-BA+0.05mg/L NAA。同时确定了子叶外植体对抗生素的敏感性。试验表明,筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压在100mg/L以下,抑菌剂羧苄青霉素或头孢噻肟钠的适宜质量浓度均为300mg/L。
- 罗雯孙东妮王甜王钢
- 关键词：生菜基因转化
- 应用生物信息学网络资源分析预测融合蛋白的二级结构及其理化性质被引量：1
- 2008年
- 目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,探讨分泌型抗成骨肉瘤单链双功能抗体基因的表达。方法:①将单链抗体基因(ScFv)与白细胞介素2基因亚克隆至反转录病毒表达载体PLxSN,重组质粒pL(ScFv-IL-2)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人成骨肉瘤细胞命名为OSC/ScFv-IL-2。②以PCR,RT-PCR以及Western blotting对ScFv-IL-2基因修饰的OSC9901细胞进行鉴定。在构建融合蛋白之后,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。结果:①经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFv-IL-2)SN,并获得高滴度产毒细胞株C26;Western blotting分析证明ScFv-IL-2基因融合蛋白的表达。②运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-IL-2DNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的二级结构及其理化性质。结论:利用生物信息学网络资源可以分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据。
- 史梦远王海涛张芳琳
- 关键词：单链抗体生物医学工程
- 抗汉滩病毒单抗3G1 scFv植物表达载体的构建被引量：2
- 2004年
- 利用PCR方法,从含有3G1scFv基因的重组质粒中扩增出抗体基因,并使基因两端携带合适的限制性酶切位点.将其克隆入植物表达载体pBI121,构建获得3G1scFv pBI121重组质粒.酶切鉴定及测序结果均证明重组质粒构建成功.将重组植物表达载体转入农杆菌LBA4404,为进一步构建转基因植物的研究奠定了基础.
- 罗雯张九东白文涛吴兴安胡刚张芳琳
- 关键词：汉滩病毒单链抗体植物表达载体
- 抗HTNV单抗1A8鼠/人嵌合Fab抗体植物表达载体的构建
- 2005年
- 利用PCR方法,从含有1A8VLCκ基因或1A8Fd基因的重组质粒中扩增出1A8VLCκ基因及1A8Fd基因,并使基因两端携带合适的限制性酶切位点,将其克隆入植物表达载体pCAMBIA2301或pBIl21,构建1A8VLKCκ-pCAMBIA2301和1A8Fd-pBI121。用PCR方法改造酶切位点,继而将含有1A8Fd基因的植物表达框克隆入1A8VLCκ-pCAMBIA2301,构建获得1A8Fab-pCAMBIA2301重组质粒,并导入农杆菌GV3101。为进一步在植物中表达该抗体片段奠定了基础。
- 罗雯白文涛吴兴安张九东
- 关键词：汉坦病毒抗体
- 抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的构建抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。方法从含有1A8scFv基因的重组质粒中酶切获得携带Nos终止子的抗体基因片段,将其与CaMV35S启动子相连克隆入载体pCAMBIA2301,构建1A8scFv基因的植物表达载体1A8scFv-pCAMBIA2301。通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR及Dotblot检测是否获得转基因植株,ELISA和固相酶联斑点实验检测表达产物的生物学活性。结果酶切鉴定结果证明1A8scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得1A8scFv-pCAMBIA2301重组质粒。PCR及Dotblot检测证明获得抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。ELISA和固相酶联斑点实验结果证明在转基因拟南芥中成功表达了具有生物学活性的抗汉坦病毒mAb1A8scFv片段。结论成功地将外源基因转入拟南芥中并表达,为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础。
- 罗雯吴兴安李莺徐志凯
- 关键词：汉坦病毒单链抗体植物表达载体拟南芥
