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国家自然科学基金(20776119): 作品数：12 被引量：55H指数：5; 相关作者：范代娣马晓轩朱晨辉薛文娇骆艳娥更多>>; 相关机构：西北大学西安航空发动机集团有限公司西安巨子生物基因技术股份有限公司更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划陕西省教育厅科研计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程生物学更多>>

Optimal strategy of ph control in the production of HLC Ⅱ by recombinant Escherichia coli: ＜正＞Human-like CollagenⅡ（HLCⅡ） is one derivative of human -like collagen family.It plays an important role in n...; Weizhuo Wang~(1,2),Daidi Fan~(1,2),Yan’eLuo~(1,2),Jiaqing Guo~(1,2) 1 Biomaterials and fermentation engineering center,Xi’an,China; 文献传递

重组大肠杆菌生产类人胶原蛋白Ⅱ的发酵pH优化被引量：5: 2010年; 为了实现类人胶原蛋白（HLCⅡ）的规模化生产,对重组大肠杆菌BL21 3.7在30 L发酵罐中发酵生产类人胶原蛋白Ⅱ过程中的关键参数pH进行了系统的研究.将发酵过程中pH控制在6.0~7.8之间,监测pH对细胞生长以及类人胶原蛋白Ⅱ的产量的影响,从而确定出合理的pH控制策略增加类人胶原蛋白Ⅱ的产量.由实验数据可得,在pH7.5条件下细胞浓度达到最大,为68.5 g/L,但HCLⅡ的浓度为8.5 g/L.在pH6.8条件下,HLCⅡ浓度达到最大,为10.5 g/L,但其细胞浓度只有60.9 g/L.同时,对发酵过程中代谢副产物有机酸的含量也进行了监测,随着发酵过程pH值的升高,总有机酸的量也相应的增加,当发酵过程pH控制在7.8时,总有机酸达到最大,为15.61 g/L.为了提高目标产物的产量,采用pH两阶段控制策略控制发酵,最终类人胶原蛋白Ⅱ浓度可达到11.3 g/L,较恒pH条件下提高了7.61%.; 王维卓范代娣骆艳娥马晓轩朱晨辉郭佳庆; 关键词：重组大肠杆菌有机酸

脐静脉内皮细胞的提取与形态学观察被引量：2: 2009年; 目的获取胶原酶灌注法提取脐静脉内皮细胞的有效方法。探讨内皮细胞培养过程中生长因子的添加浓度，并对内皮细胞进行形态学观察及鉴定。方法采用血球计数法对在不同时间和不同胶原酶浓度下提取的脐静脉内皮细胞进行计数。同时采用MTT法探讨了生长因子（Endothelia Cells Growth Supplement，ECGS）的浓度对脐静脉内皮细胞生长的作用，并用倒置显微镜和HE染色法观察了脐静脉内皮细胞的形态，Ⅷ因子免疫组化对获取的脐静脉内皮细胞进行鉴定。结果当提取时间为10～30min时，随着时间的增加，内皮细胞的提取数量增加；当胶原酶的浓度为0．1％～0．3％时，消化的脐静脉内皮细胞数量逐渐增加。ECGS的浓度为30μg／mL时，促进脐静脉内皮细胞的生长，种植4天后细胞进入平台期。脐静脉内皮细胞体外培养形态为“铺路石”状。Ⅷ因子免疫组化鉴定为阳性。结论胶原酶灌注法是一种快速而有效的获取血管内皮细胞的方法，可以为组织工程血管内皮化提供充足的种子细胞。; 朱晨辉范代娣薛文娇马晓轩俞园园苗芸; 关键词：脐静脉内皮细胞免疫组化

类人胶原蛋白-丝素蛋白血管支架的制备及性能表征被引量：10: 2009年; 为了提高血管支架的力学性能,将生物相容性良好的新型生物材料类人胶原蛋白(基因工程技术、高密度发酵生产)与丝素蛋白以质量比9:1、7:3、5:5复合,采用真空冷冻方法制备管状血管支架。研究了不同配比血管支架材料的表面结构、表面元素组成、力学性能、降解和生物相容性。结果表明:当类人胶原蛋白与丝素蛋白的质量比为7:3混合时,类人胶原蛋白-丝素蛋白管状支架具有均匀的多孔结构,孔径为(60±5)μm,孔隙率达到85%以上;获得了较理想的力学性能:应变为50%±5%,应力为(332±16)kPa;具有相对慢的降解速率;提高了细胞的黏附与增殖,具有良好的生物相容性。; 朱晨辉范代娣马晓轩薛文娇惠俊峰陈岚段志广麻璞; 关键词：类人胶原蛋白丝素蛋白血管支架生物相容性

Optimization of Fermentation Process for Human-like Collagen Production of Recombinant Escherichia coli Using Response Surface Methodology被引量：8: 2010年; In order to improve the production of human-like collagen III(HLC III)by fed-batch culture of recombinant Escherichia coli BL21,the Plackett-Burman and Box-Behnken design were applied to optimize the fermentation process parameters.Three variables(induction time,inoculum age and pH),which have significant effects on HLC III production,were selected from eight variables by Plackett-Burman design.With the regression coefficient analysis in the Box-Behnken design,a relationship between HLC III production and three significant factors was obtained,and the optimum levels of the three variables were as follows:induction time 3.2h,inoculum age 12.6 h and pH 6.7.The 3D response surface plots and 2D contour plots created by the Box-Behnken design showed that the interaction between induction time and pH and that between innoculum age and pH were significant.An average 9.68 g·L1HLC III production was attained in the validation experiment under optimized condition,which was 80%higher than the yield of 5.36 g·L1before optimization.; 张驰范代娣尚龙安马晓轩骆艳娥薛文娇高鹏飞; 关键词：重组大肠杆菌类人胶原蛋白响应面法发酵过程

响应面法优化一种新型类人胶原蛋白发酵培养基被引量：2: 2009年; 目的借助于MINITAB统计学软件,采用Plackett-Burman设计和响应面优化法对基因工程菌Escherichia coliBL21发酵生产类人胶原蛋白的原始培养基进行优化研究。方法首先利用Plackett-Burman设计筛选出对类人胶原蛋白产量影响显著的3个因素,即葡萄糖甘油1∶4混合碳源、酵母粉和硫酸铵。在此基础上用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,找到后续实验的中心点。再利用Box-Behnken实验设计及响应面分析法进行回归分析,确定主要影响因素的最佳水平。结果优化后的3种主要影响成分为葡萄糖甘油1∶4,混合碳源12.24 g/L,硫酸铵7.12 g/L,酵母粉5.53g/L。结论方程拟合良好,优化后的培养基发酵产量经摇瓶和发酵罐验证,产量分别为5.91g/L和6.12g/L,较优化前分别提高了306%和296%。; 张驰范代娣米钰马晓轩骆艳娥薛文娇; 关键词：类人胶原蛋白重组大肠杆菌发酵

In vitro compound culture of human-like collagen/nano-hydroxyapatite porous scaffolds and cartilage cells: Human-like collagen(HLC)/Nano-hydroxyapatite (nHA)porous scaffold was constructed for the culture of cartilage...; Liping Jia School of Chemical Engineering Northwest University Xi’an; 关键词：CYTOCOMPATIBILITY

类人胶原蛋白人工骨的制备及表征被引量：1: 2008年; 采用冷冻干燥法制备了类人胶原蛋白(RHLC)人工骨复合材料,并对材料的微观形貌、结构、晶粒大小、晶相组成和化学组成进行了分析。结果表明,制备的RHLC复合材料在晶相组成、化学组成和晶体尺寸方面均类似于天然骨。RHLC复合材料有望成为培养自体成骨细胞的理想支架材料。; 俞园园范代娣; 关键词：骨组织工程仿生合成

类人胶原蛋白的聚集行为与固定化方法: 2010年; 类人胶原蛋白(HLC)具有特殊的结构特点,能够和多种生物分子发生相互作用,将其固定化作为介质在分离纯化中具有一定的实用价值。通过考察不同的溶液组成和环境因素对HLC之间聚集行为的影响,使用环氧氯丙烷将HLC固定在Sepharose微球表面制成具有一定分离纯化功能的介质。结果表明:在固定化过程中,HLC浓度的影响较小,而温度、pH值影响较大,葡萄糖、CaCl2对于HLC的自聚合表现出较强的抑制作用。最终确定在温度为45℃,pH=9.0的环境条件下,每1 mL Sepharose微球添加15 mg HLC,葡萄糖质量浓度15%,CaCl2浓度0.3 mol/L的反应体系中,能够有效实现HLC的固定化。; 邢建宇范代娣薛文娇朱晨辉马晓轩马戎; 关键词：环氧氯丙烷固定化

类人胶原蛋白-透明质酸血管支架的性能及生物相容性被引量：18: 2009年; 将类人胶原蛋白与透明质酸按不同比例复合,控制透明质酸的终浓度(W/V)分别为0、0.01%、0.05%、0.1%,用京尼平交联,采用真空冷冻干燥方法构建出血管支架材料。通过扫描电镜、XPS分析、拉力测试、压力爆破实验、细胞毒性实验、血管支架细胞种植实验及小鼠皮下植入等方法对其表面超微结构、表面元素组成、力学性能、细胞毒性等级、细胞相容性、组织相容性进行了研究。结果表明:当透明质酸的含量为0.05%时,类人胶原蛋白-透明质酸支架的孔径比较均匀,孔隙率达94.38%,应力为(1000.8±7.9)kPa,爆破压力为(1058.6±8.2)kPa,细胞毒性实验合格,同时具有良好的细胞相容性、组织相容性及降解性能。; 孙秀娟范代娣朱晨辉马晓轩骆艳娥陈岚郭佳庆; 关键词：类人胶原蛋白透明质酸血管支架生物相容性

国家自然科学基金(20776119)

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