国家自然科学基金(39670038)
- 作品数：3 被引量：25H指数：3
- 相关作者：齐眉卞继峰周亚滨赵蔚明贾继辉更多>>
- 相关机构：山东医科大学山东大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HPV16 L1-E7重组腺病毒rAd5 HPV16 L1-E7的构建及克隆表达被引量：17
- 2000年
- 目的 :研制人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗和嵌合病毒样颗粒疫苗。方法 :以HPV16型野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术构建可表达HPV16主要衣壳蛋白L1( 1 30 1aa)和转化蛋白E7( 1 60aa)融合基因的重组质粒 pUC19L1 E7,HPV16L1 E7DNA片段经质粒 pBSL1 E7转入腺病毒Ad5穿梭质粒 pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10 共转染 2 93细胞 ,制备重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP。结果 :成功构建了HPV16L1 E7重组质粒 pUC19L1 E7,制备HPV16L1 E7重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7,HPV16L1 E7融合蛋白可在 2 93细胞中高效表达 ,可达细胞总蛋白的 10 %以上 ,并装配成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论 :成功制备了可高效表达HPV16L1 E7嵌合L1 E7VLP的重组腺病毒rAd5HPV 16L1 E7载体疫苗 ,为HPV重组腺病毒疫苗用于宫颈癌的防治打下了基础。构建的 pUC19L1载体可以比较方便的插入外源基因 ,用来构建多价疫苗 。
- 卞继峰于修平齐眉王芸杨海宁胡海燕耿昭赵蔚明周亚滨贾继辉栾怡
- 关键词：乳头瘤病毒重组腺病毒分子克隆减毒疫苗
- HPV16L1 ORF的基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2000年
- 目的 :获得足够量的人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)L1融合蛋白及含HPV 16L1ORF序列的基因重组体。方法 :通过PCR扩增获得HPV16L1基因片段 ,将此片段插入原核细胞表达载体pGEMEX 1,构建相应的重组表达质粒 pGEMEX L1,将此质粒转化大肠杆菌JM 10 9(DE3) ,得到的转化子经IPTG诱导表达后进行菌体蛋白的Westernblotting免疫印迹分析。结果 :HPV16L1基因重组体构建成功 ,克隆的目的基因片段在大肠杆菌中产生的融合表达产物在Westernblotting检测中具有和抗HPV16L1阳性血清反应的抗原性。结论 :HPV16L1基因片段可在大肠杆菌中得到有效表达 。
- 齐眉于修平卞继峰赵蔚明董杰德贾继辉周亚滨栾怡陈华波
- 关键词：乳头瘤病毒大肠杆菌分子克隆
- 人乳头瘤病毒16型野毒株L1-E7融合基因重组腺病毒载体构建及在293细胞中表达嵌合病毒样颗粒的研究被引量：5
- 2001年
- 目的 制备人乳头瘤病毒HPV16L1 E7重组腺病毒 ,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法 以HPV16型的野毒株HPV16 114/K为模板 ,利用PCR克隆技术制备HPV16L1 E7融合基因pUC19L1 E7,含L1的 1～ 30 1氨基酸 (AA)和E7的 1～ 6 0AA的编码DNA序列 ;并转入腺病毒穿梭质粒pCA14L1 E7,与腺病毒质粒pBHG10共转染 2 93细胞 ,筛选重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7。以PCR、ELISA和Westernblot方法鉴定重组病毒及其表达的L1 E7蛋白 ,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1 E7VLP ,电镜观察VLP的形态结构。结果 PCR DNA序列分析表明成功构建了HPV16L1 E7重组质粒pUC19L1 E7;并获得HPV16重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7,在 2 93细胞中可高效表达L1 E7蛋白 ,并形成嵌合病毒样颗粒 (cVLP)。结论 构建的重组腺病毒rAd5HPV16L1 E7可有效表达HPV16L1 E7cVLP ,可进一步用于动物实验 。
- 卞继峰于修平赵蔚明杨海宁王芸胡海燕周亚滨贾继辉栾怡齐眉耿昭
- 关键词：乳头状瘤病毒病毒样颗粒腺病毒载体
