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肿瘤坏死因子-α预刺激对培养树突状细胞形态学的影响被引量：2: 2002年; 目的研究肿瘤坏死因子(TNF)-α预刺激对树突状细胞形态学的影响。方法Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血,获得单个核细胞。培养基用含有10%胎牛血清的RPMI1640,分两组进行培养。一组用TNF-α预刺激4h后加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白细胞介素-4(IL-4),每48h再次加入上述3种细胞因子;另一组则在培养初始加入GM-CSF及IL-4,每隔48h再次加入上述2种细胞因子,第5天加入TNF-α。两组中所用细胞因子浓度完全一样,且均于第8天收获细胞,前者记作T-DC,后者记作DC。光镜及扫描电镜观察DC形态学变化及差异。结果T-DC与DC相比,具有更多、更典型的树突状突起。结论TNF-α预刺激DC前体细胞4h与TNF-α在培养第5天加入相比,所诱导出的DC的树突状形态更为明显、典型。; 潘春华罗荣城; 关键词：细胞形态学树突细胞粒细胞巨噬细胞集落刺激因子白细胞介素4

一种新的蛋白酪氨酸磷酸酶基因的克隆、定位和组织表达谱研究被引量：2: 2001年; 从人胎肝cDNA文库分离出一长度为 5 2 48bp的cDNA克隆 ,该基因包含 2 6个外显子和 2 5个内含子 ,染色体定位于在某些肿瘤细胞中易缺失的 3p2 1.1- 2 1.33。其可读框编码 16 36个氨基酸 ,该蛋白属于蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族 ,其C端有一个典型的PTP结构域 ,N端含有约 80 0氨基酸残基的BRO1样结构域及随后 2个可能的SH3结构域结合位点 ,在这两个结构域之间及C末端还各有一个脯氨酸富集区。Northern杂交和点杂交分析显示 ,该基因以大约 5 .4kb的单一转录物广泛表达于人体各种组织 ,而且在人部分肿瘤细胞中高表达。结果提示 ,人源PTP -TD14是一个新的蛋白酪氨酸磷酸酶。; 瞿祥虎翟云魏汉东鱼咏涛贺福初; 关键词：蛋白酪氨酸磷酸酶 CDNA克隆组织表达谱基因克隆基因定位

抑瘤素表达产物诱导大鼠肝干细胞WB-F344体外分化被引量：1: 2007年; 目的:抑瘤素是一种肝细胞促分化因子,能够诱导胚胎肝细胞分化为具有各种代谢功能的成熟肝脏。构建以抑瘤素为主的肝干细胞体外诱导微环境,观察其诱导大鼠肝脏来源的干细胞WB-F344体外分化。方法:实验于2002-10/2004-07在解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成。①实验材料:表达抑瘤素的CHO-OSM-EGFP细胞株由李晓利等构建。WB-F344细胞由姚鹏博士惠赠。②实验方法:将终浓度为20%稳定表达抑瘤素的中国仓鼠卵巢细胞上清中加入浓度为1U/mL胰岛素、1×10-7mol/L地塞米松,与WB-F344细胞共培养。空白对照组中未加入诱导分化成分CHO-OSM-EGFP细胞上清、胰岛素、地塞米松。③实验评估:采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡,光学显微镜观察细胞形态,RT-PCR分析白蛋白及甲胎蛋白基因表达。结果:①诱导后的WB-F344细胞较空白对照组G2/M+S期细胞所占比例明显减低,增殖指数下降约2.8倍,G0/G1细胞所占比例明显增加。②实验组WB-F344细胞形态发生明显改变,由最初的多角形变为长梭性,细胞伸出小管状伪足,核质比例下调,形态趋于成熟大鼠肝脏实质细胞。③RT-PCR结果显示,诱导后WB-F344细胞表达白蛋白,不表达甲胎蛋白。诱导前WB-F344细胞表达甲胎蛋白,不表达白蛋白。结论:在以抑瘤素为主的诱导微环境中,WB-F344细胞表现出生长抑制。; 李晓利王强赵士富崔春萍姚鹏尉承泽; 关键词：细胞周期干细胞分化

凝集素FRIL体外维持造血干/祖细胞长期活存的机制初探被引量：1: 2004年; 谢小燕谢超李锦白慈贤裴雪涛; 关键词：造血干细胞祖细胞细胞周期

人格拉利素新抗菌肽的抗菌作用研究被引量：2: 2007年; 目的:进一步证实人格拉利素(hGlyrichin)抗菌肽的抗菌功能。方法:根据人格拉利素的氨基酸序列,设计并合成了19个氨基酸长度的多肽(pCM-19),采用试管法和菌落生成法分析该肽对靶细菌生长的影响。结果与结论:pCM-19溶液与不同靶细菌共孵育后,明显抑制了细菌的生长,对实验室常用的BL-21工程菌和多种致病菌(包括杆菌、球菌)的生长都有抑制作用。更为有趣的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制作用,显示了其在抗耐药菌感染中的良好前景。; 尹丽莉杨超文杨瑞馥端青何君赵光沙继斌胡锴勋赵士富; 关键词：抗菌肽抗菌药氨基酸序列

人源性多肽pCM1-9抗菌机制的初步研究被引量：3: 2006年; 目的:初步分析人源性多肽pCM1-9的抗菌作用机制。方法:利用荧光素掺入破损细胞膜的原理,采用流式荧光激活细胞分析(FACScan)和扫描电子显微镜分析pCM1-9对靶菌膜的作用机制。结果:FACS分析法结果显示pCM1-9处理后的大肠杆菌PI着染细菌比例明显高于未处理组,并且随作用时间的延长,PI着染BL-21菌比例增大,20 m in时达最高水平,20 m in以后反而降低;扫描电子显微镜观察到pCM1-9处理后的大肠杆菌有明显的表面形态学的改变,如细菌体积缩小、细菌表面出现皱缩、凹陷似有孔洞形成。结论:人源性多肽pCM1-9可能作用于细菌细胞壁和(或)细胞膜,通过改变其通透性而发挥杀菌作用。; 尹丽莉杨超文杨瑞馥何军赵光杨素霞沙继斌胡凯勋赵士富; 关键词：荧光素大肠杆菌抗菌作用

UBC家族新成员UBF基因的组织表达谱研究被引量：1: 2004年; 目的和方法 :提取人胎肝和HL 6 0细胞总RNA ,采用RT PCR的方法 ,从中扩增UBF基因 ,并对扩增产物进行测序 ,从而证实UBF基因的天然存在性 ;采用原位杂交的方法研究UBF在 5月龄胎儿的不同组织及HL 6 0细胞中的表达谱及亚细胞定位。结果 :从胎肝和HL 6 0细胞中均扩增得到了完整的UBF基因 ,且其序列与注册序列完全一致 ;原位杂交结果显示UBF在人胚胎多种组织中表达 ,其中胎骨骼肌表达最强 ,胎肾最弱。结论 :UBF基因 ,作为Ubc家族的一个新成员 ,在人胚胎的骨骼肌、肝脏、肾脏、心脏和肺中均有表达 ,且骨骼肌中的表达最强。; 崔春萍张咏鱼咏涛李玉珍耿煜赵士富; 关键词：组织表达谱原位杂交 RT-PCR 泛素

造血干/祖细胞体外定向诱导分化为粒细胞的研究被引量：1: 2002年; 为探讨利用人造血干 /祖细胞体外定向诱导分化的人粒细胞应用于临床大剂量放、化疗后预防感染的可行性 ,利用源自人胎盘脐带血的CD34+ 细胞及SCF ,IL 3 ,IL 6和G CSF的细胞因子组合的培养条件 ,体外进行向粒细胞的诱导分化。结果表明 ,在该体系条件下可诱导分化出约 1 0 0 0倍数量的细胞 ,流式细胞仪检测诱导效率可达 60 %以上 ,且诱导分化的细胞染色体未出现异常 ,裸鼠致瘤实验表明该细胞不具致瘤性 ,细胞体外生长 1 4 - 2 1天为高峰 ,33天后细胞不再增殖 ,且诱导分化出的细胞具有吞噬细菌的功能。结论 :利用细胞工程的方法体外“生产”出的粒细胞具有应用安全性 ,且具备生理状态下产生的此种细胞应具备的基本功能。; 冯凯初飞南雪袁红丰王冬梅张锐白慈贤陈琳裴雪涛; 关键词：CD34^+细胞体外定向诱导分化粒细胞

小鼠胎肝和骨髓细胞基因表达差异的比较研究被引量：3: 2003年; 造血发育经历了从卵黄囊到胎肝、胎脾并最终定位于骨髓的复杂过程。虽然已有部分研究发现决定这一迁移过程的重要因素是造血微环境 ,但缺乏对不同造血器官微环境差别的系统性比较研究。为了探讨胎肝与成年骨髓造血微环境差别的分子基础 ,对小鼠胎肝和骨髓细胞RNA进行cDNA微阵列 (cDNAmicroarray)杂交 ,以生物信息学方法分析杂交结果 ,并以RT PCR和Northernblot对杂交结果进行进一步验证。结果表明 ,在 588种具有重要功能的已知基因中 ,二者相比 ,骨髓高表达的基因有 65种 ,胎肝高表达的基因有 13 1种。进一步分析发现骨髓高表达的基因中与造血相关的基因有 3 9种 ,胎肝高表达的基因中与造血相关的有 71种 ,分别占差异基因群的60 %和 54%。RT PCR和Northernblot验证的结果表明 ,CD18、CD44及PSGL 1基因在骨髓中高表达而在胎肝中低表达或不表达 ,此结果与微阵列杂交结果相符。同时还发现 ,CD18和CD44基因在胎肝中的表达水平随胎龄增加呈下调趋势。结论 :胎肝与骨髓细胞的基因表达谱显著不同 ,其中某些基因的表达随发育阶段不同而变化。这些基因的差异性表达 ,尤其是与造血细胞发育、迁移、植入等密切相关基因的差别性表达 ,可能是胎肝造血兴衰。; 任爱辉张咏赵彦林赵蕾刘新宇赵士富; 关键词：造血干细胞造血微环境胎肝细胞骨髓细胞

小鼠胚胎成纤维细胞差异表达基因的筛选: 2002年; 应用微阵列杂交法对培养前、后的小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)mRNA进行检测 ,找到 2 4类差异表达的基因 ,为进一步筛选MEF可能表达的新基因 ,对培养前 (driver)、后 (tester)的MEFmRNA进行抑制性消减杂交 ,产物与pGEM T载体连接构建cDNA消减文库并转染JM10 9大肠杆菌。随机挑取阳性克隆 ,PCR扩增后对所得的差异表达基因进行测序及生物信息学分析。在随机挑取的 14 5个克隆中 ,测得了 12 8条EST序列 ,经生物信息学分析 ,它们代表了 4 2类不同基因和 3条新基因序列。结果表明 ,培养后MEF相对于培养前胚胎成纤维细胞确实存在差异表达基因群。提示 ,进一步的实验研究可能找出对ES细胞增殖分化有重要调控作用的基因或基因群。; 杨滔张咏崔春萍鱼咏涛尉承泽任爱辉赵士富; 关键词：胚胎学胚胎干细胞纤维母细胞核酸杂交

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国家重点基础研究发展计划(G1999053903)

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