国家自然科学基金(30671569)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 一种提取细胞结合性马立克病毒基因组的新方法及其高效转染
- 2009年
- 卢占军秦爱建郅晓尹天燕
- 关键词：病毒基因组宿主细胞马立克病毒密度梯度离心法病毒DNAVIRUS
- MDV-1 CVl988／Rispens疫苗株UL13蛋白序列分析及其原核表达
- 马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型UL13基因与单纯疱疹病毒UL13基因、人巨细胞病毒pUL97及埃波斯坦-巴尔病毒BGLF4等同源,属于疱疹病毒UL97蛋白激酶亚家族,编码病毒自身蛋白激酶,在病毒复制及传播中发挥重要作用。本...
- 张晨飞秦爱建邓绪方薛敏尹天燕王平平
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 马立克氏病病毒Ⅰ型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2009年
- 【目的】寻找MDV-1 UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能。【方法】用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART(www.gcua.de)分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析确定UL13的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清;通过NCBI的protein blast功能及Cn3D 4.1在线软件分析UL13保守结构域。【结果】PCR扩增出UL13基因,序列分析结果表明,UL13的259～400aa、431～513aa两个片段抗原性强,且稀有密码子较少;保守结构域分析发现UL13催化中心主要位于152～297氨基酸残基间,且在激酶SubdomainⅦ的保守甘氨酸残基被丝氨酸替代,SubdomainⅧ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换。利用大肠杆菌表达的UL13第259～400aa片段免疫小鼠制备出多抗血清能与真核表达产物反应。【结论】MDV-1UL13催化中心主要位于152～297氨基酸残基间,体外表达的基因产物诱导机体产生了抗UL13激酶的特异性抗体。
- 张晨飞秦爱建邓绪方苏钰文薛敏尹天燕王平平
- 关键词：CVI988
- 重组人腺病毒表达的MDV-1 VP22蛋白的不同定位模式
- 2009年
- 目的:研究MDV-1 CVI988 VP22蛋白的转导机制及细胞定位机理,分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素。方法:构建表达VP22蛋白的重组人腺病毒,将重组病毒感染的AD-293细胞裂解产物加至正常的MDBK细胞上,通过免疫荧光(IFA)及Western blot鉴定VP22的蛋白转导功能。观察感染后不同时间VP22在AD-293细胞上的定位,并与瞬时表达的VP22蛋白定位比较。结果:重组人腺病毒表达的VP22在MDBK细胞上能够进入几乎所有的细胞,说明VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能。进一步鉴定VP22的细胞定位发现,在重组病毒感染的AD-293细胞中,VP22首先聚集于细胞核周围,随后以特殊的荧光粒子的形式散在于胞质中,而AD-293细胞中瞬时表达的VP22及MDV感染的CEF中VP22均均匀分布于细胞核。结论:重组人腺病毒表达的VP22蛋白具有很强的蛋白转导功能,不同重组病毒表达的VP22在细胞中的定位模式有所差别。
- 张晨飞秦爱建陈娟娟钱琨杜静尹天燕邵红霞金文杰
- 关键词：重组腺病毒转导
