艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2008ZX10002-002)
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 相关作者：李津马锐杨旭琴赵铠徐静更多>>
- 相关机构：北京天坛生物制品股份有限公司北京大学北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项留学人员科技活动项目择优资助经费国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎疫苗无／低应答的应对策略
- 2010年
- 乙型肝炎（乙肝）疫苗接种者中约有5％～10％的接种者对乙肝疫苗形低应答。应对乙肝疫苗无应答的策略包括改良疫苗、优化疫苗接种策略及改善机体状况。
- 王娟许丽锋徐静
- 关键词：乙型接种
- 酵母工程菌细胞高密度发酵的研究进展被引量：2
- 2009年
- 构建重组酵母工程菌表达抗原或细胞因子等,是研发新生物制品的趋势之一,实现酵母工程菌的高密度发酵是维持制品生产规模和降低成本的重要技术途径。本文就影响酵母工程菌高密度发酵的因素,包括菌株的生物学特性和发酵工艺特点、培养基种类及配方、发酵罐结构及性能、发酵过程各项重要工艺参数或变量的控制等及在生物制品和生物制药行业中酵母工程菌细胞高密度发酵的进展作一综述。
- 朱亭玉马民强李津张博润
- 关键词：高密度发酵酿酒酵母汉逊酵母毕赤酵母
- 乙型肝炎病毒核心抗原的原核表达及纯化被引量：2
- 2011年
- 目的原核表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg),纯化HBcAg病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),并对其理化性质进行鉴定。方法根据大肠杆菌密码子偏爱性对HBcAg基因进行密码子优化,全基因合成优化基因,克隆至载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-HBcAg,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。重组蛋白经盐析和层析纯化后,经SDS-PAGE、Western blot、电镜观察、等电点分析、高效液相色谱(HPLC)分析和N-末端氨基酸测序等进行鉴定。结果重组表达质粒经酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为21 000,为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的21.6%;纯化后其纯度可达99.4%,具有良好的反应原性,VLP形成良好,结构均一,等电点在pH 6.0～6.9之间,HPLC分析形成T3和T4两种不同结构,N-末端序列正确,无氨基酸降解。结论已成功构建了HBcAg原核表达质粒,并获得了高纯度的HBcAgVLP,为进一步研究HBcAg VLP的生物学特性奠定了基础。
- 李计来徐静王娟吴刚崔文禹赵莉许丽锋
- 关键词：病毒样颗粒原核细胞基因表达纯化
- 重组汉逊酵母表达的HBsAg纯化工艺中内毒素的去除效果被引量：3
- 2012年
- 目的分析重组汉逊酵母表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)各纯化工序样品中内毒素的去除效果。方法采用鲎试剂法检测重组汉逊酵母表达的HBsAg小量工艺探索、中量工艺验证、中试纯化工艺中破碎细胞、微滤、超滤、硅胶吸附、层析、除菌过滤各工序样品的内毒素含量,计算内毒素去除率,分析各纯化工序与内毒素去除率的关系,并以重组酿酒酵母表达HBsAg各纯化工序中样品作为对照。结果重组汉逊酵母表达的HBsAg纯化过程中内毒素含量由细胞破碎样品的241 EU/ml以上降至除菌过滤样品的1.0 EU/ml以下。微滤和超滤样品内毒素去除率平均可达56%和86%,占总体纯化工艺中内毒素去除率的90%以上。结论重组汉逊酵母表达HBsAg纯化工序微滤、超滤和疏水层析均可有效去除内毒素,以超滤去除内毒素效果最明显,为重组汉逊酵母纯化工艺去除内毒素的研究提供了技术参数和实验依据。
- 刘英微王曦张德有杨旭琴许宁张昀苏锦锋何亚丽王树毅李津
- 关键词：汉逊酵母内毒素类纯化
- 乙肝病毒X基因可调控表达细胞模型的构建
- 2013年
- 利用四环素诱导型慢病毒系统(Lentil-XTMTet-On Advanced Inducible Expression System)构建了含有乙肝病毒X基因(HBx)的可诱导表达载体质粒,利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控元件rt-TA和HBx基因的病毒颗粒,滴度达到108LPs/mL。将两种病毒先后感染HepG2肝癌细胞系,分别利用G418和Puromycin抗生素筛选获得整合有HBx基因的稳定细胞株。在体系中加入Dox时,应用RT-PCR和Western blot方法验证了HBx基因的可诱导表达。可诱导表达细胞模型构建成功,为进一步研究HBx基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了一种较理想的试验模型。
- 白荷露刘蕊朱乃硕
- 关键词：乙型肝炎病毒基因慢病毒表达载体四环素调控
- 表达乙型肝炎表面抗原重组酿酒酵母工程菌发酵培养基配方的优化
- 2009年
- 目的优化重组酿酒酵母工程菌发酵培养基的配方,提高其表达HBsAg的水平。方法采用正交试验法对培养基配方进行优化,并对最佳培养基配方进行验证。结果最佳培养基配方为:在每50ml基础培养基中添加50%的甘油0.9ml和50%的蔗糖0.4ml,维持pH值为5.0。与基础培养基相比,以此培养基培养的工程菌表达HBsAg的水平平均可提高26%。结论在发酵过程中适当补充甘油和蔗糖,可以提高重组酿酒酵母工程菌表达HBsAg的水平。
- 王树毅朱亭玉齐璇纪云李贺王明莹周根喜李津
- 关键词：重组酿酒酵母发酵培养基HBSAG正交试验
- WorkBeads系列介质与C4介质层析纯化汉逊酵母表达的HBsAg效果的比较
- 2012年
- 目的比较WorkBeads 40/10000 Bus low系列3146VL、3147L、3148H、3149VH 4型不同丁基密度的疏水层析柱与BIA CIM Monoliths C4纯化汉逊酵母表达的HBsAg的效果。方法将HBsAg溶于不同的上样缓冲液中,分别上样于4型WorkBeads预装层析柱和C4丁基层析柱,用不同的洗脱缓冲液洗脱,分别收集上样流穿峰和洗脱峰,测定HBsAg含量,并计算HBsAg的流穿率和洗脱率,筛选最佳上样缓冲液和洗脱缓冲液。结果 3147L型柱最适于HBsAg纯化工艺,含4%硫酸铵的20 mmol/L PB是理想的上样缓冲液,20 mmol/L PB和含30%异丙醇的20 mmol/L PB均不是理想的洗脱缓冲液。CIMMonoliths C4最佳上样缓冲液是含3%硫酸铵的50 mmol/L MOPS和含4%硫酸铵的20 mmol/L PB;含0.1%Triton-100的50 mmol/L MOPS是最佳的洗脱缓冲液。结论可多次重复使用的WorkBeads系列介质和可耐受高流速的快速纯化介质CIMMonoliths C4均可用于汉逊酵母表达的HBsAg的纯化。
- 李彩梅张德有马锐许宁杨旭琴沈永才王曦刘英微陈兴李津
- 关键词：CIMMONOLITHSC4汉逊酵母
- 罗式电化学发光法在乙型肝炎疫苗质量控制中的应用
- 2009年
- 目的用罗式电化学发光法检测乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的体外相对效力(RP),以取代雅培珠式EIA法。方法分别用科华板式EIA法、雅培MUREX板式EIA法、罗式电化学发光法与雅培珠式EIA法对比检测重组乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的RP值,并分析3种方法的精密性。结果科华板式EIA法和雅培MUREX板式EIA法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量结果与雅培珠式EIA法比较,差异均有统计学意义,且精密性均不佳;罗式电化学发光法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量及疫苗的RP值结果与雅培珠式EIA法比较,差异均无统计学意义,且精密性均良好。结论罗式电化学发光法可以替代雅培珠式EIA法,检测乙肝疫苗(酵母)生产过程中HBsAg含量和疫苗的RP值。
- 朱亭玉王明莹何亚丽苏桂民齐璇柳蔷李津庄辉赵铠
- 关键词：乙型肝炎疫苗乙型肝炎表面抗原
- 表达乙型肝炎表面抗原重组汉逊酵母细胞破碎率的检测被引量：2
- 2010年
- 目的建立快速检测表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)重组汉逊酵母细胞破碎率的方法。方法分别以显微镜计数法和染色后毛细管离心法检测表达HBsAg的重组汉逊酵母细胞破碎率,并采用Lowry法检测细胞破碎前后上清液中蛋白质含量,以间接评价细胞破碎率。3种方法均以表达HBsAg的重组酿酒酵母细胞作为对照。结果显微镜计数法可直接计算出细胞的破碎率,结果可靠,但不同人员检测数据存在差异;毛细管离心法检测细胞破碎率结果与显微镜计数法接近,且较显微镜计数法稳定,汉逊酵母细胞破碎悬液经考马斯亮蓝染色效果较好;Lowry法检测细胞破碎后的蛋白释出度与细胞破碎率呈对应性。结论 3种实验方法均可评价细胞破碎率,毛细管离心法快速简便,在实际生产过程中较为实用。
- 王曦杨旭琴刘英薇许宁马锐张德有程晔李彩梅李津
- 关键词：酵母菌汉逊酵母酿酒酵母着色剂
- 乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展被引量：7
- 2010年
- 目前使用的乙型肝炎疫苗均为重组乙肝表面抗原(HBsAg)疫苗,疫苗中需添加免疫佐剂才能诱导机体产生有效的免疫应答。铝盐佐剂可显著增强HBsAg的体液免疫效果,但不能很好地诱导细胞免疫应答。研究发现,除铝佐剂之外,仍有多种物质具有免疫佐剂效应。本文就免疫刺激性佐剂、可生物降解的颗粒性佐剂、微生物来源的佐剂、植物来源的佐剂及其他类型的佐剂用于乙型肝炎疫苗的效果作一综述。
- 马锐苏锦锋李津
- 关键词：乙型肝炎疫苗佐剂
