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快速高效植物瞬时表达的实验室烟草无土栽培体系的构建被引量：3: 2012年; 目的构建适用于快速高效植物瞬时表达系统的实验室烟草无土栽培体系。方法优化烟草的无土栽培条件,基于Geminivirus新型植物高效瞬时表达系统,观察烟草品种、侵染时机、侵染工程菌浓度、侵染后叶片采收时间对无土栽培烟草表达绿色荧光蛋白(GFP)的影响,以Western blot和ELISA分析GFP表达情况。结果烟草无土培育的最佳条件为:光照强度9000LX/层,光照时间16 h/d,日/夜温度28/21℃,相对湿度80%。侵染工程菌的最佳D600为0.8;叶片采收最佳时间为侵染后4 d;本明烟和豫烟5号最佳侵染时机分别为第6周和第5周;工程菌pBYGFPDsRed.R/LBA4404侵染的本明烟和豫烟5号均能高效表达GFP;豫烟5号的平均生物量高于本明烟。结论基于人工气候箱成功构建了实验室烟草无土栽培体系,并可实现GFP在本明烟和豫烟5号的快速高效表达。; 莫倩珍麦荣嘉杨志晓陈敏芳杨铁钊赖华芳杨培梁陈强周晓红; 关键词：烟草无土栽培绿色荧光蛋白

弓形虫mMAG嵌合型类病毒颗粒在烟草中的高效瞬时表达研究: 弓形虫是一种重要的机会性致病原虫,可引起人兽共患弓形虫病,研制价廉易用的动物用弓形虫转基因植物口服疫苗,对于保护畜牧业和切断人类弓形虫病传播途径,具有重要意义。Magnifection新型植物高效瞬时表达技术平台的成功构...; 莫倩珍麦荣嘉陈敏芳赖华芳陈强周晓红; 关键词：转基因植物无土栽培; 文献传递

植物偏爱密码子优化HPV18L1全长基因的重叠PCR合成被引量：6: 2009年; 目的以重叠PCR方法合成植物偏爱密码子优化后的人乳头瘤病毒18L1全长基因。方法自GenBank获取国内外所发布的HPV18L1全长基因序列,经生物信息学分析后选定目标序列,经Synthetic Gene Designer及JCat(JavaCodon Adaptation Tool)分析软件将此序列原始密码子改造为植物偏爱密码子,在C端加入蛋白纯化标签His-tag,获得改造后的HPV18L1全长序列(mHPV18L1)。结合酶切位点分析将mHPV18L1设计为204～477bp的五个大片段LS1-LS5,再将每个大片段分割成57～59bp的5～11个寡聚核苷酸短链,设计合成5对内引物和1对外引物,经重叠PCR扩增获得mHPV18L1全长基因,纯化后将其克隆入pMD18T载体,酶切、测序鉴定插入子。结果以重叠PCR成功扩增获得mHPV18L1全长,pMD18T-mHPV18L1重组质粒经酶切、PCR鉴定均得到预期1749bp大小的片段,并经测序验证。结论获得以植物偏爱密码子进行序列优化的mHPV18L1全长基因及其重组质粒pMD18T-mHPV18L1,为后续mHPV18L1的植物转化研究奠定了一定的工作基础。; 赵莹张丽仪刘昌政周晓红; 关键词：重叠PCR 密码子优化

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国家自然科学基金(30872204)