江苏省高校自然科学研究项目(05KJB310115)
- 作品数：17 被引量：74H指数：4
- 相关作者：张焕相宋雪慧董运海辛莲周俊松更多>>
- 相关机构：苏州大学滨州医学院山西省人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离与体外培养被引量：10
- 2007年
- 研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在较短的周期内获得大量原代及传代细胞;MEF细胞形态以小梭形为主,呈漩涡状、火焰状生长;增殖速度较快,每1~2d可传一代,按1∶3比例常规传代;5代以内适宜制作饲养层用,5代以后细胞开始变形呈现典型的衰老特征.
- 盛利琴叶荣韩甫蔡东晖张焕相
- 关键词：胚胎成纤维细胞饲养层体外培养
- 不同方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化被引量：2
- 2009年
- 目的观察两种方法体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向神经样细胞分化的效果。方法自大鼠股骨中提取骨髓细胞,利用Percoll法进行BMSC分离、纯化及鉴定。取第5代细胞,应用两种方法进行诱导。方法一(BHA组):200μmol/L丁羟基茴香醚(BHA)、10 ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)和2%二甲基亚砜(DMSO)联合诱导细胞;方法二(RA组):全反式维甲酸(RA)和β-巯基乙醇(β-ME)联合诱导细胞。同时设正常培养的BMSC为对照组。实验过程中对细胞进行形态观察和免疫荧光染色检测神经细胞标志物。结果BHA组诱导5 h,细胞即发生明显的形态改变,出现胞体回缩、突触伸展等神经干细胞的形态特征,而RA组诱导1周未出现神经干细胞形态。免疫荧光染色显示两种方法诱导的细胞均能表达神经前体细胞标志物nestin、β-tubulin和成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE),不表达星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)。BHA组与RA组表达NSE的阳性率分别为80.05%和71.61%,两者相比,差异无统计学意义(P>0.05);对照组不表达NSE,诱导组与对照组比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种方法均能诱导骨髓间充质干细胞定向分化为表达神经细胞标志物的神经样细胞。
- 徐路尧宋琳钱燕翔王敏包普花张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化神经样细胞全反式维甲酸
- Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,在含10%血清的培养基中培养6 d细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点,用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化,免疫荧光染色技术鉴定细胞种类以及Rac1蛋白在细胞内的表达,通过Western blot检测Rac1蛋白的表达变化。结果建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系,此体系底层主要是由Ⅰ型胶质细胞组成的单层细胞,GFAP染色呈阳性;在单层细胞上面有一些小圆形强折光性神经前体细胞生长,βⅢ-Tubulin染色呈阳性。更换无血清培养基后上层神经前体细胞大量增殖,βⅢ-Tubulin、Rac1染色呈阳性。Western blot定量分析结果显示,神经前体细胞增殖过程中Rac1蛋白表达上升,而分化过程中Rac1蛋白的表达下降。结论Rac1蛋白表达与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关,可能参与了神经前体细胞的增殖分化过程。
- 宋雪慧辛莲周俊松董运海张焕相
- 关键词：神经前体细胞增殖分化
- 丝素蛋白在组织工程中的应用被引量：16
- 2007年
- 目的:总结丝素蛋白在生物材料和组织工程领域的应用,分析和展望丝素蛋白材料在医学生物领域的应用前景。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1993-01/2007-01关于丝素蛋白和组织工程的文章。检索词为“silk,tissue engineering”,并限定文章的语言种类为English。同时利用计算机检索中国期刊全文数据库1994-01/2007-01的相关文章,限定文章语言种类为中文,检索词为“丝素蛋白、组织工程”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①丝素蛋白的性质、在组织工程中的应用。②骨髓间充质干细胞与丝素蛋白复合的相关性研究。③丝素蛋白的改性、修饰在生物学领域的应用。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集到符合上述要求的文献96篇,排除45篇重复性研究。48篇符合纳入标准:其中13篇关于丝素蛋白的结构和性质的,7篇关于丝素蛋白表面修饰的,篇关于丝素蛋白和组织工程的。28资料综合:实验证明丝素蛋白可以多种形式(薄膜、膜、网状结构、海绵状等)在体外支持干细胞的黏附、增殖和分化,体内促进组织的修复,尤其是干细胞组织工程中三维的丝素蛋白支架扩大了丝素作为生物材料的应用,成为最有前景的生物材料之一。结论:丝素蛋白作为一种新的生物材料应用越来越受到关注。而且,通过多种方法改进、表面修饰等技术控制丝素蛋白的分子结构和形态,使得丝素蛋白在生物材料和组织工程领域的应用变得更为广泛。
- 段巧艳段祥张焕相
- 关键词：丝素蛋白生物材料
- 大鼠大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究
- 2008年
- 目的建立大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的方法。方法原代培养并鉴定骨髓间充质干细胞;用条件培养基、无血清培养基、DMEM分别诱导骨髓间充质干细胞6h和24h;用免疫荧光染色的方法鉴定由骨髓间充质干细胞分化而来的神经样细胞。结果骨髓间充质干细胞表达CD106、CD90、CD29和CD44标记物,不表达CD71、CD45和CD34,回收得到的条件培养基可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞,这些神经样细胞的免疫荧光染色呈β微管蛋白Ⅲ、胶质原纤维酸性蛋白、巢蛋白阳性,且阳性比例明显高于实验对照组,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论大脑皮层细胞条件培养液能促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化。
- 周俊松董运海钱燕翔徐路尧宋琳宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经样细胞细胞分化
- 无血清培养条件下神经元前体细胞的增殖
- 2008年
- 目的:建立新生大鼠大脑皮层细胞原代培养体系并进行神经元前体细胞的增殖研究。方法:原代混合培养新生大鼠大脑皮层细胞;混合培养体系用血清培养基培养6d后换用无血清培养基培养,免疫细胞化学显色鉴定此培养过程中不同时间点的细胞类型,并在不同时间段加入BrdU,用于分析神经元前体细胞的增殖状况。结果:换用无血清培养基培养后,出现明显的细胞分层现象;神经元及其前体细胞的比例逐渐上升,而神经干细胞和星形胶质细胞的比例缓慢下降;增殖细胞的比例在0～24h、24～48h、48～72h时间段里逐渐增加,而在72～96h、96～120h时间段里逐渐减少。结论:新生大鼠大脑皮层细胞混合培养体系在无血清培养条件下促进神经元前体细胞的增殖。
- 周俊松董运海宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：神经元前体细胞神经元无血清培养基增殖
- 大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化及神经蛋白的动态表达
- 2008年
- 背景:现阶段骨髓间充质干细胞定向诱导分化为神经元样细胞的方法并不统一。目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经样细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的动态表达。设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2006-09/2007-01在苏州大学生命科学学院完成。材料:清洁级SD大鼠2只。胎牛血清为杭州四季青产品,成纤维生长因子、丁羟基茴香醚为Sigma公司产品,二甲基亚砜为Amresco产品。方法:Percoll法体外分离培养、扩增纯化大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞密度为5×107L-1。设立2组,诱导组用含10%胎牛血清和10μg/L成纤维生长因子的L-DMEM培养基预诱导24h后,再以含2%二甲基亚砜和200μmol/L丁羟基茴香醚的L-DMEM无血清培养基诱导1,3,5h。对照组始终用含10%胎牛血清的L-DMEM进行培养。主要观察指标:细胞形态学变化,免疫荧光染色鉴定神经细胞表型。结果:预诱导24h,胞体由原来的长梭形变成多角形或不规则形,伸出多个短棒状突起,可见2～3个核仁,细胞间漩涡状生长趋势消失,排列无规律;诱导1～3h,细胞逐渐变圆,胞质收缩明显,折光性增强,双级或多极的突起互相连接呈网状;诱导5h,突起出现一、二级分支。诱导1h后部分细胞表达神经前体细胞表面抗原巢蛋白;3h后巢蛋白达高峰,同时表达成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白;5h后巢蛋白表达下降,神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白达高峰。对照组细胞形态无明显变化,巢蛋白表达为阴性。结论:在添加化学诱导剂之前先使用成纤维生长因子进行预诱导,能促进骨髓间充质干细胞向神经前体细胞和神经元转化,且在诱导分化过程中神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致。
- 段祥段巧艳栾希英张焕相
- 关键词：骨髓间充质于细胞神经元分化
- 诱导分化过程中不同融合状态大鼠骨髓间充质干细胞成骨的差异被引量：2
- 2008年
- 背景:诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的方案已基本成熟,但是诱导过程中影响分化效果的因素仍处于探索阶段。目的:观察诱导时机的选择对大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响。设计、时间及地点:以细胞为对象的观察实验,于2006-08/2007-01在苏州大学江苏省干细胞重点实验室完成,省级重点实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于SD大鼠,雌雄不限,体质量150～200g。方法:采用Percoll淋巴细胞分离液分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。将第3代大鼠骨髓间充质干细胞以5×107L-1密度分组培养,诱导组分别于接种当时、细胞达50%～60%融合时、细胞达85%～95%融合时加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的成骨诱导培养基诱导。非诱导组采用普通培养基培养。主要观察指标:诱导后7,14,21,28d行钙钴染色、Von-Kossa染色、碱性磷酸酶活性检测成骨细胞能力。定期在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化及生长状况。结果:经钙钴染色后,诱导组大部分染色的细胞呈阳性反应,胞浆中可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,大多数多角形细胞呈阳性,如铺路卵石样排列,随着时间的延长,可见片状强阳性细胞,以细胞达85%～95%融合时诱导培养组数量最多,结节体积最大。非诱导组未见片状强阳性细胞。Von-Kossa染色后可见深棕色致密结节。以细胞达85%～95%融合时诱导培养组形成结节较早,同期相比数量较其他组多。细胞内碱性磷酸酶活性检测表明经成骨诱导剂诱导后与同期非诱导组相比细胞内碱性磷酸酶活性明显提高,表现细胞成骨分化特点。结论:初始接种密度相同的情况下,细胞间相互接触程度越高,成骨能力越强。
- 段巧艳段祥栾希英张焕相
- 关键词：间充质干细胞成骨细胞骨组织工程
- 干细胞在脂肪组织工程中的应用被引量：2
- 2007年
- 目的:脂肪组织再生的关键因素在于种子细胞,深入认识脂肪组织工程的现状,分析和展望干细胞在脂肪组织工程中的作用。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1996-01/2006-06的相关文章,检索词为"stem cells,adipose tissue engineering",并限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与干细胞在脂肪组织工程中的应用相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到209相关文献,98文献符合纳入标准,排除的111篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的98篇文献中,分别涉及脂肪组织中的细胞组成、脂肪组织工程的现状、干细胞的来源以及在脂肪组织工程中的应用等内容。资料综合:软组织挫伤、肿瘤及先天畸形等都可能造成大量脂肪组织的缺失从而导致软组织缺损,种子细胞的选择、支架材料、细胞生存环境、将细胞重新植入损伤部位的方法是重建缺损软组织的重要环节。迄今为止,依然没有一种理想的在任何情况下都适用的填充材料,而利用自体脂肪组织移植来治疗软组织缺损的方法尚不成熟。脂肪组织再生的关键因素就是种子细胞,干细胞因其自我复制、自我更新、多能分化的特点成为目前较理想的种子细胞。结论:前脂细胞和脂细胞移植是软组织重建的可行方法,而干细胞诱导生成脂肪组织应用于软组织重建虽然面临伦理和科技上的障碍,但由于它蕴含着巨大的潜力,有望成为推动脂肪组织工程发展的革命性力量。
- 段祥段巧艳张焕相
- 关键词：干细胞脂肪组织工程
- 星形胶质细胞与神经元在蚕丝素纳米纤维上的联合培养被引量：1
- 2009年
- 目的：研究胶质细胞结合丝素纳米纤维对神经元生长发育的作用，为神经干细胞结合丝素蛋白材料用于临床移植修复神经系统损伤提供实验依据。方法：从新生大鼠脑室下区分离细胞与取自混合培养得来的星形胶质细胞共培养在柞蚕、家蚕2种丝素蛋白溶液制成的材料上，分别选取各时间段的细胞进行β-Ⅲ-tubulin特异性免疫荧光显色，并统计不同时间段神经元在丝素材料上的复杂度。结果：神经元与星形胶质细胞共培养在柞蚕丝素无纺布上（TSF）的复杂度明显比家蚕丝素无纺布（SF）高。结论：柞蚕、家蚕丝素无纺布结合星形胶质细胞支持神经元的生长，具有良好的生物相容性；胶质细胞结合柞蚕丝素无纺布比家蚕丝素无纺布更适合神经元的生长发育。
- 王敏张峰苏军包普花刘孟宇李明忠左宝齐张焕相
- 关键词：神经元胶质细胞生物相容性
