长江学者和创新团队发展计划(IRT0459)
- 作品数：24 被引量：51H指数：4
- 相关作者：杨安钢孟艳玲温伟红薛茜贾林涛更多>>
- 相关机构：第四军医大学第四军医大学西京医院第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 重组抗HER2 ScFv／tBid基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用
- 2006年
- 目的:构建重组抗HER2 ScFv／tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。方法:将重组抗HER2 ScFv／tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT- PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。结果:转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv／tBid表达后有促凋亡作用。结论:重组抗HER2 ScFv／tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。
- 王芳王立锋裘秀春许彦鸣鲍炜孟艳玲王成济范清宇杨安钢
- ImmunoAIF△1-480融合蛋白对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用被引量：2
- 2008年
- 目的:观察免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:利用PCR的方法将九聚精氨酸编码序列(R9)与AIFC-末端结构域编码区重组,然后将R9-AIF△1-480基因与pCMV-e23sFv载体重组,构建免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480真核表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞株,通过RT-PCR、Westernblot、流式细胞术(FCM)等方法检测重组基因在转染细胞中的表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的特异性杀伤活性。结果:经过酶切鉴定与测序证实,带有Im-munoAIF△1-480基因的真核表达载体构建成功,经RT-PCR、Westernblot可检测到培养上清中免疫促凋亡基因的表达,用FCM检测发现融合蛋白ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞SGC-7901和SKBR-3有明显的促凋亡活性,而对不表达HER2分子的ECV-304细胞几乎没有影响。结论:Immuno-AIF△1-480可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞。
- 韩涛张勇孙书明任君琳李伟郭张燕孟艳玲杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子细胞凋亡
- 靶向于HER2的siRNA表达载体在人乳腺癌细胞SKBr-3中的表达被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨针对HER2分子的RNA干涉对乳腺癌细胞生长的影响.方法:人工合成DNA,经退火磷酸化后克隆入pSUPER载体.基因转染后通过观察细胞形态和细胞计数等方法验证发夹状小干涉RNA(siRNA)对细胞生长状态的影响,以激光共聚焦检测基因表达情况.结果:siRNA表达载体转染后可以引起SKBr-3细胞大量死亡,间接免疫荧光检测出HER2蛋白表达降低.结论:针对HER2进行RNA干涉可在体外抑制SKBr-3细胞生长.
- 鲍炜张立红付海京贾林涛张勇刘家云任新玲温伟红孟艳玲王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉基因治疗
- HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法:构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果:成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论:RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。
- 鲍炜付海京贾林涛张勇刘家云任新玲温伟红孟艳玲杨安钢
- 关键词：HER2基因RNA干涉胃肿瘤
- TRBP及其截短体真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建TRBP及其截短体真核表达载体,并检测其在HeLa细胞中的表达。方法:设计引物扩增TRBP全长及其截短体TAB、TAC、TBC基因序列,然后将各基因片段克隆入真核表达载体pFlag-CMV4。用脂质体法转染HeLa细胞,经Western blot方法检测目的基因在转染细胞中的表达。结果:经过酶切鉴定与测序证实,TRBP全长及其截短体TAB、TBC、TAC基因真核表达载体构建成功,经Western blot可检测转染细胞中各基因的表达。结论:成功构建了TRBP全长基因及其截短体TAB、TAC和TBC基因真核表达载体,在转染细胞中可以检测到目的基因的表达。
- 韩涛张勇孙书明孟艳玲李伟郭张燕杨安钢
- 关键词：RISCMIRNA真核表达
- miRNA在免疫系统中的研究进展被引量：10
- 2010年
- 薛茜杨安钢
- 关键词：MIRNA核苷酸免疫系统
- HER2 siRNA抑制肺癌细胞增值的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的构建针对HER2的RNA干涉载体,观察对HER2表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响。方法设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pcD-NA3质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2的mRNA表达,Western Blot和间接免疫荧光法检测HER2的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长。结果成功构建了HER2特异性RNA干涉载体pcDNA3～siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2的mRNA及蛋白表达均降低;G_1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05)。结论成功构建了HER2 RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G_1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段。
- 任新玲钱桂生付海京鲍炜杨安钢
- 关键词：SIRNARNA非小细胞肺癌
- siRNA抑制HER2/neu过表达肺腺癌细胞生长和增殖
- 2006年
- 背景与目的:30%NSCLC存在HER2/neu过表达,与肿瘤发生、转移、肿瘤血管形成、抗凋亡及化疗耐药等有关。本文通过RNA干涉抑制肺腺癌细胞SPC-A-1 HER2/neu过表达,观察肿瘤细胞周期、增殖及集落形成能力的变化。方法:构建针对HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染SPC-A-1,通过RT-PCR和W esternB lot检测HER2/neu表达;FCM分析细胞周期;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;平板集落形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力。结果:成功构建了HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染靶细胞后可显著降低HER2/neu表达;与亲代细胞相比,G0/G1期细胞增加17.1%,S期细胞减少12.8%;细胞生长速度减慢,集落S1抑制率达到49.0%。结论:针对HER2/neu的siRNA可以显著降低肺腺癌细胞过表达HER2/neu,肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,造成细胞增殖减慢,集落形成能力明显下降。因此,siRNA对过表达HER2/neu肺癌的治疗具有潜在应用价值。
- 任新玲钱桂生付海京鲍炜王涛张瑞张立红贾林涛杨安钢
- 关键词：SIRNAHER2/NEU肺腺癌集落形成
- 针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响.方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1,RTPCR检测HER2/neu的mRNA表达,Westernblot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长.结果:肺腺癌细胞系SPCA1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPERsiHER2;瞬时转染SPCA1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05).结论:成功构建了HER2/neuRNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPCA1HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.
- 任新玲钱桂生鲍炜付海京贾林涛张瑞王涛许彦鸣杨安钢
- 关键词：SIRNARNA干涉HER2/NEU癌细胞生长
- 重组抗HER2 ScFv/tbid基因的表达及其对乳腺癌SKBr-3细胞的促凋亡作用被引量：1
- 2006年
- 目的:观察构建的重组抗HER2ScFv/tbid基因在SKBr-3细胞中的表达及其对转染的SKBr-3细胞的作用.方法:用限制性内切酶双酶切已构建的pcDNA-bid质粒,获得带有PE转膜结构域和tbid的重组基因,将所获基因插入到真核表达载体pCMV单链抗体基因ScFv23e的下游,转染SKBr-3细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达,MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况.结果:转染SKBr-3细胞后,检测出目的蛋白的表达.MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制.间接免疫荧光双标记染色检测tBid的表达,并可观察到Cytc在细胞质中存在,SKBr-3细胞出现凋亡.结论:重组抗HER2ScFv/tBid分子可以在转染的SKBr-3细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.
- 王芳裘秀春王立锋许彦鸣赵晶孟艳玲贾林涛王成济范清宇杨安钢
- 关键词：BID乳腺肿瘤
