“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A12)
- 作品数：3 被引量：30H指数：2
- 相关作者：马鸣潇费东亮金宁一夏志平金扩世更多>>
- 相关机构：军事医学科学院锦州医学院吉林出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项吉林省科技厅发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测被引量：12
- 2006年
- 利用杆状病毒表达系统对H 5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm-T-H 5HA质粒用B amHⅠ及N otⅠ酶切,获得HA基因片段,同时杆状病毒转座载体质粒pF astB acⅠ也用B amHⅠ及N otⅠ酶切,然后用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pF astB ac-H 5HA。再将该重组质粒转化DH 10 B ac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒B acm id-H 5HA。将B acm id-H 5HA转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和W estern b lotting检测表明,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。
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- 关键词：禽流感病毒HA基因杆状病毒
- 共表达H5、H7亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒构建被引量：2
- 2006年
- 以鸡痘病毒（FPV）疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素（AIV HA）基因串联后（拥有同一个阅读框）和鸡白细胞介素-18（IL-18）基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子1（P7.5）下游,构建了携带AIV HA基因和鸡白细胞介素-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-H7-IL18;用相同的方法构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-IL18;将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子（ATI-P7.5×20）下游,构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因、H7亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出H5HA-H7HA融合蛋白基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-H7HA-IL18,H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18以及单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA.这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础.
- 王振国金宁一马鸣潇费东亮贾雷立金扩世尹革芬
- 关键词：血凝素基因重组禽痘病毒
- 检测禽流感病毒RT-PCR一步法的建立及H5、H9亚型的鉴定被引量：16
- 2005年
- 目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型。方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIVRT-PCR一步法。根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-PCR一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性。结果所建立AIV系列RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点。结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析。
- 马鸣潇金宁一王振国朱光泽费东亮郑敏尹革芬葛淑敏金扩世夏志平金明兰
- 关键词：裂解位点禽流感病毒H9亚型特异性引物PCR检测方法
