国家自然科学基金(30471540)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用
- 2008年
- 目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分析证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论:HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。
- 牟丹蕾王英鹏姜泓王平忠于旭肖书渊孙永涛聂青和王临旭张岩李新红黄长形白雪帆
- 关键词：汉坦病毒蛋白酪氨酸激酶
- 用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序
- 2007年
- 目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础.
- 牟丹蕾姜泓王英鹏李光玉潘蕾李新红王临旭张岩黄长形白雪帆
- 关键词：汉坦病毒
- 整合素αvβ3与病毒感染被引量：3
- 2007年
- 姜泓白雪帆
- 关键词：病毒感染整合素粘附分子跨膜糖蛋白异源二聚体磷脂酰肌醇
- 汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究被引量：1
- 2007年
- 汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1ITAM样基序多肽，应用体外蛋白激酶共沉淀实验，分别从Jur—kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5～9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶；然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析，进一步确证了G1ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用，而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明，HTNVG1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序，该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用，为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热（HFRS）免疫信号传递中的作用奠定了基础。
- 牟丹蕾王英鹏姜泓肖书渊于旭李光玉王平忠孙永涛聂青和黄长形白雪帆
- 关键词：汉坦病毒蛋白酪氨酸激酶信号转导
