广州市教育局市属高校科研项目(10A259)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：刘忠民李风梅孟艳辉林勇平郑卫东更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院广州医科大学广东省计划生育科学技术研究所更多>>
- 发文基金：广州市教育局市属高校科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人前蛋白转化酶枯草溶菌素9的cDNA克隆和表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体并诱导其表达,制备其蛋白的多克隆抗体。方法聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列;扩增产物经TA克隆、双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)的感受态细胞中,诱导表达;用纯化检测过的目的蛋白免疫新西兰兔,最后采集全血收集血清,获得多克隆抗体,并对该抗体进行免疫印迹及效价测定。结果 PET-28b-pcsk9原核表达载体构建成功,用诱导表达的目的蛋白免疫动物,收集血清获得多克隆抗体。对多克隆抗体进行纯化,免疫印迹检测结果证明自制多克隆抗体特异性良好,效价测定为1:13 200。结论成功构建了pcsk9原核表达载体pET-28b-pcsk9,且获得了其蛋白的多克隆抗体。
- 李风梅俞辉宋金龙刘忠民
- 关键词：PCSK9多克隆抗体
- 应用ALM-ASA法检测PCSK9基因F216L、D374Y多态性
- 2012年
- 目的:研究PCSK9基因F216L、D374Y、N425S位点多态性与冠心病的相关性。方法:采集2009-2011年冠心病(CAD)患者血液标本288例,健康人血液标本300例;分别提取基因组DNA,应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法(ALM-ASA),检测PCSK9基因F216L、D374Y和N425S位点的多态性,并用基因测序法验证结果。血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平采用酶法测定。结果:广东地区CAD患者和健康人群基因中尚未发现N425S多态性位点;F216L、D374Y位点等位基因频率、基因型频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。CAD患者组和对照组之间TC、LDL-C、HDL-C水平差异具有统计学意义(P<0.05)。CAD患者组中,FF与FL基因型、DD与DY基因型之间,TC、TG、LDL-C、HDL-C水平的差异无统计学意义(P>0.05)。FF与FL基因型、DD与DY基因型之间的冠脉病变支数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:广东地区人群的基因尚未发现N425S多态性位点,尚未发现PCSK9基因F216L、D374Y多态性与TC、TG、LDL-C、HDL-C水平及冠心病存在相关性。
- 刘忠民孟艳辉高飞喻辉李凤梅
- 关键词：冠心病低密度脂蛋白胆固醇
- PCSK9基因I474V多态性与冠心病相关性的研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨人蛋白原转化酶枯草杆菌蛋白酶9(PCSK9)基因I474V位点在冠心病(CAD)患者和健康人群中的分布特点以及与血脂水平、CAD发生、病变程度的相关性,为阐明CAD的遗传发病机理、患者危险性分级评估等提供实验依据。方法采集经冠状动脉造影确诊的CAD患者血液标本288例,健康对照者血液标本300例,提取基因组DNA模板,应用双向等位基因特异性引物聚合酶链反应(Bi-PASA PCR)技术检测PCSK9基因I474V多态性位点,并用基因测序法验证结果。血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平用酶法测定。结果 PCSK9基因I474V多态性位点主要以II和IV基因型存在。CAD组和对照组在I474V位点的等位基因频率、基因型频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。CAD组和对照组之间TC、LDL-C、HDL-C水平差异具有统计学意义(P<0.05),TG水平差异无统计学意义(P>0.05)。CAD组中II和IV基因型之间TC、TG水平的差异具有统计学意义(P<0.01),HDL-C、LDL-C水平差异无统计学意义(P>0.05)。与非I474V携带者比较,I474V携带者血TC、TG水平增高。IV基因型的冠状动脉病变支数明显高于II基因型(P<0.05)。结论 PCSK9基因I474V多态性位点主要以II和IV基因型存在,CAD患者PCSK9基因I474V位点的基因型与TC、TG水平升高相关联,同时与CAD病变严重程度存在一定关联。
- 林勇平孟艳辉郑卫东刘忠民
- 关键词：基因冠心病
- 人前蛋白转化酶枯草溶菌素9基因的研究进展被引量：5
- 2014年
- 前蛋白转化酶枯草溶菌素9(Pcsk9)是枯草蛋白酶亚家族的一种新的前蛋白转化酶,是影响血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的因素之一,同时也是心脑血管疾病的重要影响因子。Pcsk9通过介导LDL受体(LDLR)的降解,参与脂质代谢,从而改变LDL-C的血浆浓度。pcsk9基因多态性会引起不同的血浆胆固醇水平改变。抗Pcsk9特异性抗体可改变其血浆浓度,从而控制血浆LDL-C的水平,降低心脑血管疾病的患病风险。本文旨在就Pcsk9结构、功能、多态性以及抗体研究的进展作一综述。
- 李风梅刘忠民
- 关键词：低密度脂蛋白胆固醇多态性抗体
- 人血清胎盘生长因子浓度与冠心病的相关性研究被引量：1
- 2012年
- 目的比较冠心病患者和健康人血清中胎盘生长因子(PIGF)水平,探讨其与冠心病、冠脉病变程度、心肌损伤的相关性。方法采用ELISA法测定87例冠心病患者(冠心病组)及61例健康人(对照组)血清的PIGF水平,分析血清PIGF水平与冠心病的相关性;将冠状动脉造影结果与血清PIGF水平进行比较,分析血清PIGF水平与冠心病患者冠脉病变支数及Gensini冠脉病变积分之间的相关性;以cTnI0.03ng/ml和0.1ng/ml为分界值,将冠心病组分成冠心病Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组,比较各组之间血清PIGF水平。结果冠心病组血清PIGF水平为(11.55±3.10)ng/ml,高于对照组的(5.81±2.21)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。血清PIGF水平与冠脉病变支数和Gensini冠脉病变积分均无相关性(P>0.05)。冠心病Ⅱ组和冠心病Ⅲ组血清PIGF水平分别为(13.12±2.45)、(14.62±3.25)ng/ml,与冠心病Ⅰ组的(9.10±2.31)ng/ml比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清PIGF水平与冠心病、心肌受损之间存在相关性,PIGF水平与冠脉梗塞的严重程度的相关性需进一步研究。
- 林勇平曾翠云孟艳辉刘忠民
- 关键词：冠心病胎盘生长因子急性心肌损伤
