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禽呼肠病毒P10、P17非结构蛋白基因的克隆及序列分析被引量：4: 2006年; 根据GenBank上的禽呼肠病毒（ARV）S1基因序列，设计并合成了一对跨越P10和P17非结构蛋白基因的特异性引物，对13个ARV毒株进行RT—PCR扩增、克隆及序列测定。结果显示，13个ARV毒株的P10蛋白基因ORF全长均为297bp，编码98个氨基酸；P17蛋白基因ORF全长为441bp，编码146个氨基酸。这13个ARV毒株P10、P17蛋白基因核苷酸同源性分别在96．6%～100%和95．2％～99．3%之间，推导的氨基酸同源性分别在98．2％～100%和91．9%～99．0%之间。将这13个ARV毒株与Gen Bank上其他正呼肠病毒毒株，包括番鸭株（DRV）和飞狐上分离到的内尔森海湾病毒（Nelson Bay Vir US，NBV）及两个澳洲分离株（ARM—1和SOM-4）进行同源性比较和遗传进化树分析，结果表明，呼肠病毒有地域和种类的差别。; 秦春香谢芝勋谢丽基; 关键词：禽呼肠病毒克隆

禽呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及纯化: 2008年; 对重组表达质粒σNS-pGEX-4T-1 IPTG的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验。当细菌的D600值为0.55～0.65时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol//L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为28～37℃,表达的目的蛋白相对分子质量约为66200,约占菌体总量的31.5%～33.3%。37℃及32℃诱导时,目的蛋白σNS主要以包涵体的形式存在;28℃诱导时目的蛋白主要以可溶性的方式表达。利用28℃诱导表达目的蛋白,用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化,测定纯化蛋白的纯度与浓度,并对纯化的蛋白进行Western-blot分析。结果显示,纯化后的目的蛋白纯度达93%,质量浓度为0.91g/L,并能与禽呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应。; 谢丽基谢芝勋刘加波唐小飞邓显文庞耀珊谢志勤; 关键词：呼肠孤病毒纯化

禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立被引量：7: 2007年; 用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒(ARV)P17非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV S1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0.2 mmol/LIPTG诱导,表达的融合蛋白分子质量为42.4 ku,占菌体总蛋白的34%。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后,纯度达到85%。Western-blotting显示,纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应,说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。; 谢芝勋秦春香谢丽基; 关键词：禽呼肠孤病毒原核表达酶联免疫吸附试验

禽呼肠孤病毒μNS非结构蛋白基因的克隆及序列分析被引量：1: 2007年; 根据GenBank中禽呼肠孤病毒(ARV)M3基因序列,设计并合成了一对跨越μNS非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV的10个毒株进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定。结果表明,10个毒株μNS蛋白基因ORF的核苷酸序列全长均为1908 bp,编码635个氨基酸。这10个毒株之间的核苷酸及推导的氨基酸同源性分别都在98%以上。将它们与哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)、番鸭呼肠孤病毒(DRV)等进行核苷酸及推导的氨基酸序列比较,并进行遗传系统树分析,结果表明ARV与MRV有较大的差异,与DRV差异较小。; 秦春香谢芝勋谢丽基; 关键词：禽呼肠孤病毒克隆

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广西壮族自治区科技攻关计划(023500124)