江苏省高校自然科学研究项目(01KJB180001)
- 作品数：5 被引量：23H指数：2
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- 相关机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hIFN-λ1(hIL-29)基因在COS-7细胞中瞬时表达和抗病毒效应
- 目的为了克隆hIFN-λ基因并使自主构建的pcDNA3.1A-IFN-λ表达质粒能在真核细胞中获得表达,以进一步研究rhIFN-λ的生物学特性。方法采用RT-PCR 法从病毒诱导的A549细胞mRNA中克隆hlFN.入l...
- 王建红马丽丽谢宇锋盛伟华缪竞诚吴康陈雄艳杨吉成
- 关键词：RT-PCR基因克隆COS-7细胞
- 文献传递
- rhIL-18在不同原核表达系统中的表达和活性比较被引量：2
- 2006年
- 目的研究rhIL-18包涵体、可溶性(His融合型)两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因,回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达,产生rhIL-18包涵体,IPTG诱导pLHis-IL-18表达,产生可溶性rhIL-18蛋白。两者分别刺激人外周血单个核细胞,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。结果两种重组表达载体均表达产生了rhIL-18,且均可刺激人PMBC上清产生IFN-γ,可溶性rhIL-18刺激人外周血产生IFN-γ的能力高于包涵体形式的rhIL-18。结论可溶性rhIL-18具有比包涵体形式的rhIL-18更强的活性,这为IL-18原核表达基因工程药物的开发提供了新思路。
- 张海峰李丽娥盛伟华缪竞诚谢宇锋王金志杨吉成
- 关键词：IL-18包涵体可溶性蛋白IFN-Γ
- 人lamda3干扰素(hIFN-λ3)基因克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 目的构建表达hIFN-λ3基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。方法用口腔滤泡炎病毒VSV刺激A549人肺腺癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得全长cDNA,与pcD-NA3.1/myc—his(-)A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-λ3,并在COS-7细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物的抗病毒活性。结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序确证重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且确为hIFN-λ3,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。结论该研究成功地克隆出hIFN-λ3基因编码序列,并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了rhIFN-λ3蛋白具有抗病毒活性,为今后干扰素的基因治疗奠定了基础。
- 马丽丽王建红盛伟华谢宇锋缪竞诚杨吉成
- 关键词：RT-PCR基因克隆COS-7细胞
- 人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达被引量：16
- 2004年
- 目的 :克隆人IL 2 4基因 ,构建真核表达载体 ,在COS 7细胞中进行表达 ,并检测重组表达蛋白hIL 2 4的抗肿瘤活性。方法 :分离人外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,采用RT PCR技术克隆人IL 2 4基因 ,将其重组于pUC19,双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列 ,构建真核重组表达载体pcDNA3 hIL 2 4 ,进行双酶切和PCR鉴定 ,以质粒pcDNA3 hIL 2 4转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,用RT PCR检测mRNA表达 ,并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果 :成功获得 6 2 1bp的人IL 2 4基因 ,测序正确 ,经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确 ,以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS 7细胞可表达hIL 2 4 ,且所表达的人IL 2 4具有较强的诱导A5 4 9肺腺癌细胞凋亡的作用。结论 :人IL 2 4基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功 ,为研究人IL 2
- 陈雄艳盛伟华谢宇锋缪竞诚白艳艳杨吉成
- 关键词：人IL-24克隆COS-7细胞凋亡
- 重组人IL-18在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用被引量：2
- 2006年
- 目的:获取rhIL-18原核表达产物并研究其活性。方法:用本室构建的含基因重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α,经42℃热诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIL-18蛋白;采用ELISA试剂盒检测rhIL-18刺激PBMC分泌IFN-γ的活性及MTT法检测其对NK细胞杀伤K562细胞自然杀伤活性;同时用荷瘤小鼠模型检测其体内抗瘤功能。结果:诱导含重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α后,蛋白电泳显示出一条相对分子量(Mr)为18 000的蛋白条带;10μgrhIL-18蛋白体外刺激PBMC后,其分泌IFN-γ的能力与对照组相比提高了8倍,细胞毒性提高3倍;同时rhIL-18蛋白能明显抑制肿瘤生长和延长荷瘤鼠生存期。结论:获得了有免疫调节功能和抗肿瘤活性的rhIL-18蛋白,为今后IL-18重组产物的研制和开展肿瘤的生物治疗提供了实验依据。
- 张海峰盛伟华缪竞诚谢宇锋李丽娥马丽丽庄文卓杨吉成
- 关键词：白介素18免疫调节功能抗肿瘤活性
- hIFN-λ1(hIL-29)基因及在COS-7细胞中瞬时表达和抗病毒效应被引量：3
- 2005年
- 目的:克隆hIFN-λ1基因,构建pcDNA3.1A-IFN-λ1表达质粒,并在真核细胞中获得表达,以进一步研究rhIFN-λ1的生物学特性。方法:采用RT-PCR法从病毒诱导的A549细胞mRNA中克隆hIFN-λ1基因,并重组于pcDNA3.1A真核表达载体上。结果:经双酶切和PCR鉴定及DNA序列分析,发现所克隆的基因与GenBank公布的序列一致,并在COS-7细胞中获得了有效瞬时表达。结论:成功克隆了hIFN-λ1基因,并成功地获得了瞬时表达,其rhIFN-λ1表达产物具有抗病毒活性。
- 王建红马丽丽谢宇锋盛伟华缪竞诚吴康陈雄艳杨吉成
- 关键词：基因克隆COS-7细胞
- 人lamda3干扰素(hIFN-λ3)基因克隆及表达
- 目的:构建表达hIFN-λ3基因的真核表达载体,并在COS-7 细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-λ3蛋白。方法:用口腔滤泡炎病毒VSV 刺激A549人肺腺癌细胞,抽提总RNA,经RT-PCR 获得全长cDNA,与p...
- 马丽丽王建红盛伟华谢宇锋杨吉成
- 关键词：克隆COS-7细胞
- 文献传递
