“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A58)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：岳华汤承李定霏傅安静马丽更多>>
- 相关机构：西南民族大学西南大学河南农业职业学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 实时荧光定量RT-PCR检测中、强毒力新城疫病毒RNA被引量：8
- 2007年
- 根据新城疫病毒(NDV)核苷酸序列,设计针对中、强毒力NDV F基因编码融合蛋白裂解位点的核苷酸序列引物和TaqMan探针,建立了实时荧光定量反转录荧光定量PCR(RRT-PCR)检测中、强毒力NDV RNA的方法。该方法能从含有NDV系疫苗毒、NDV标准强毒株F48E9(基因型)、分离鸡源强毒株(基因型)和鸽源强毒株(基因型)样本中检出NDV RNA,不与NDV弱毒株(LaSota、Clone30、B1、V4)、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒及健康鸡组织RNA发生交叉反应,对NDV核酸的最小检出量为60个拷贝,具有检测速度快、特异性强、灵敏度高、重复性和稳定性好等特点。从9个临床样本中均检测出阳性信号(9/9),PCR产物经测序证明均含有NDV强毒株F基因裂解位点;用其中8份病料接种SPF鸡胚分离病毒,分离率为5/8。
- 岳华俞宁汤承李名杨
- 关键词：鸡新城疫病毒毒力
- 短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖被引量：9
- 2007年
- 以新城疫病毒(NDV)NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA(shRNA)的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3hNP基因的表达量降低2.3倍,6h降低21.1倍,9h降低9.8倍;ndv1能在48h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使105ELD50NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使106ELD50 NDV感染后17h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制ND VNP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础.
- 岳华汤承李定霏傅安静马丽
- 关键词：RNA干涉新城疫病毒鸡胚成纤维细胞鸡胚
- 快速诊断鸽瘟方法的研究被引量：5
- 2007年
- 从疑似鸽瘟的6例临床病例中分离到5株鸽Ⅰ型副黏病毒(SCP1～SCP5),经本实验室建立的检测中、强毒力新城疫(NDV)病毒的SYBRGREENⅠRT-PCR(RRT-PCR)方法诊断,确诊为中、强毒力新城疫毒感染,用常规RT-PCR扩增SCP1包括F蛋白裂解位点的基因片段,并进行克隆、序列测定。分析表明,SCP1编码F蛋白的基因片段裂解位点处的序列为112K-R-114Q-K-R-117F,与新城疫强毒在这一区域的序列相符;与21株已报道的NDV进行核苷酸同源性比较,并建立进化树,聚类为基因Ⅵ型。
- 刘小银岳华
- 关键词：新城疫病毒鸽瘟
- siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达被引量：2
- 2007年
- 用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.
- 马莉朱金凤汤承李明义李定霏岳华
- 关键词：RNA干涉SIRNA禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR鸡胚成纤维细胞
