国家高技术研究发展计划(2009AA02Z104)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- 人血浆脂联素分离纯化及活性鉴定
- 2011年
- 目的:从人血浆中分离纯化各亚型脂联素(APN),建立人血浆APN活性的检测方法,同时获得制备抗APN各亚型特异性抗体所需的抗原。方法:将-80℃保存的人血浆融解后稀释,采用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化人血浆中不同亚型的APN。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western blot)和ELISA检测纯化的产物及回收率。通过孵育人脐静脉内皮细胞后,检测磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)的水平反映APN的活性。结果:所获不同亚型的APN均具有生物学活性,高聚体APN激活AMPK的能力最强。APN活性回收率为40%。结论:建立了一种能够快速、简便从人血浆中分离纯化APN及其亚型并保持其天然的生物学活性的方法,为APN的深入研究奠定了基础。
- 廉坤王海昌王汝涛靳温孙璐马新亮陶凌
- 关键词：脂联素分离纯化活性鉴定
- 抗TNF-α中和抗体通过升高脂联素水平减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用被引量：2
- 2012年
- 目的:阐明心肌缺血/再灌注(MI/R)时,脂联素(APN)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系,以及使用中和抗体阻断TNF-α可否提高血浆APN,进而发挥心肌保护作用。方法:96只成年雄性C57小鼠和36只ob/ob小鼠均采用30 min缺血/再灌注(I/R)建立MI/R模型。96只C57小鼠分为假手术组、手术+盐水对照组及手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=32);36只ob/ob小鼠分为ob/ob假手术组、ob/ob手术+盐水对照组及ob/ob手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=12)。假手术或缺血20 min后,腹腔注射给予单次抗TNF-α中和抗体或盐水干预。分别采用ELISA检测TNF-α与APN血浆水平;小鼠心脏超声评估心脏LVEF;伊文氏蓝/TTC染色检测心脏梗死面积;以及TUNEL/Caspase-3活性检测观察心肌细胞凋亡。结果:血浆ELISA测定发现,MI/R后,小鼠血浆TNF-α水平在再灌后1 h即显著升高,后缓慢下降。注射抗TNF-α中和抗体可在再灌后1 h即中和TNF-α(P<0.01),同时在再灌注3 h、8 h、1 d及3 d后4个时间点,较给予盐水对照显著升高血浆APN(P<0.01)。通过小鼠心脏超声、伊文氏蓝/TTC染色和TUNEL/Caspase-3活性检测发现,与给予盐水的对照相比,腹腔注射抗TNF-α中和抗体可提高小鼠的心肌功能(P<0.05)、减少梗死面积(P<0.01)及心肌细胞的凋亡(P<0.01)。而在ob/ob小鼠中,通过以同样的实验方法证实,单次注射抗TNF-α中和抗体已不能提高血浆APN的含量,其减轻心肌损伤的作用同样被显著削弱,但给予APN球状片段仍可发挥心肌保护作用。结论:以抗TNF-α的中和抗体阻断TNF-α可逆转MI/R后血浆APN的降低并发挥心肌保护作用,提示抗TNF-α中和抗体发挥的心肌保护作用可能部分通过提高APN实现。
- 高超刘毅杨强孙璐杨璐陶凌王海昌
- 关键词：脂联素小鼠
- 白黎芦醇减轻Ⅱ型糖尿病小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨白黎芦醇(RSV)减轻Ⅱ型糖尿病(T2DM)小鼠心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)的作用及其机制。方法:采用喂养高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立T2DM小鼠模型。造模成功后立即给予RSV(10 mg/kg)每日1次灌胃,连续3周。实验分为正常假手术组、正常手术对照组、DM假手术组、DM手术对照组、RSV组、CpC组,每组20只。手术方式采用心脏冠状动脉左前降支结扎30 min、再灌注3 h或24 h。抑制剂组于术前1 h腹腔注射Compound C(20 mg/kg)。用TTC染色法检测心肌梗死(MI)面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,ELISA法检测caspase-3活性、血浆脂联素(APN)水平,Western blot法检测AMPK、p-AMPK及脂肪组织APN的含量。结果:喂养高脂饮食结合小剂量STZ能够成功建立T2DM小鼠模型。与DM手术对照组相比,RSV饲喂能够减轻T2DM小鼠MI/RI,减小MI面积、减少心肌细胞凋亡(P<0.01),降低caspase-3的活性(P<0.05)。RSV还能够上调脂肪组织APN表达,逆转T2DM小鼠低APN血症(P<0.01)。AMPK抑制剂Compound C可显著减弱RSV的心肌保护作用(P<0.05)。结论:RSV可通过逆转T2DM小鼠的低脂联素血症,在MI/RI时发挥对心肌的保护作用。
- 杨强王海昌高超冯世栋孙璐刘毅陶凌
- 关键词：白藜芦醇脂联素小鼠
- 脂联素与冠状动脉慢血流现象的关系被引量：1
- 2012年
- 目的探讨脂联素(APN)与冠状动脉慢血流现象(CSFP)之间的关系。方法采用校正TIMI帧计数(CTFC)将入选病例分为两组:CSFP组35例及对照组35例。所有患者均于冠脉造影术中肝素抗凝管取血浆5 ml,静置离心,-80℃冻存。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测APN水平。常规化验血常规、肝、肾功、血脂、血凝全套、空腹血糖、糖化血红蛋白。分析APN与CSFP之间关系。结果两组基线资料相当,冠脉CSFP组脂联素水平较对照组明显减低。结论 APN水平减低与CSFP密切相关。
- 常快乐王斌廉坤孙璐王海昌陶凌
- 关键词：冠状动脉慢血流脂联素冠状血管造影术动脉粥样硬化
- 强化他汀治疗对经皮冠状动脉介入术患者冠状动脉无复流及血浆相关因子的影响被引量：7
- 2012年
- 目的研究强化他汀治疗对择期经皮冠状动脉介入术（PCI）患者术中无复流发生率及血浆脂联素（APN）、高敏C反应蛋白（hs—CRP）的影响。方法84例择期PCI患者随机分为强化他汀组及常规他汀组，强化他汀组患者在术前2天给予阿托伐他汀80mg／d进行预处理，术后给予阿托伐他汀40mg／d，1个月。常规他汀组患者术前2天给予阿托伐他汀20mg／d，术后给予阿托伐他汀20mg／d，共用1个月。分别检测术前、术后及术后1个月、3个月两组患者的APN、hs—CRP、高密度脂蛋白（HDL—C）、低密度脂蛋白（LDL—C）水平；观察术中无复流现象发生率及主要终点。结果30天内两组患者均未出现重大不良心血管事件，两组患者LDL—C、hs．CRP水平均降低，APN、HDL—C水平均升高。强化他汀组患者LDL—C、hs—CRP水平较常规他汀组明显下降（P〈0．05），APN、HDL—C水平明显升高。强化他汀组患者术中发生无复流现象3例，常规他汀组发生无复流现象6例，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论强化他汀治疗能够降低择期PCI患者血浆炎性因子水平，升高血浆脂联素水平，减少PCI术中无复流的发生率，对择期PCI患者围手术期有很好的疗效和安全性。
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- 关键词：强化他汀治疗脂联素无复流现象PCI围手术期
