广东省自然科学基金(0401397)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- siRNA介导hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞Caspase-3的影响被引量：5
- 2006年
- 目的应用siRNA表达载体介导的RNA i技术,特异地抑制端粒保护蛋白POT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞Caspase-3活化的影响。方法利用作者课题组先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsDNA)的3种重组siRNA表达质粒(pmU6-shRNA1、pmU6-shRNA2和pmU6-shRNA3),由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT-PCR和EM-SA法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过RT-PCR、W estern b lot和Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3表达和活化。结果3种pmU6-shRNA重组质粒转染HeLa细胞48 h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平均降低,Caspase-3 mRNA表达水平基本无变化,Caspase-3酶原水平降低,而Caspase-3酶活性增高。结论siRNA表达载体介导的RNA i能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达,hPOT1基因表达的抑制导致细胞Caspase-3活化。
- 侯敢黄迪南姜英华梁爱玲
- 关键词：HELA细胞株CASPASE-3
- 端粒保护蛋白过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响
- 2006年
- 目的观察人端粒保护蛋白1(human protection of telom eres 1,hPOT1)基因过表达对HeLa细胞染色体端-端融合和端粒酶活性的影响。方法利用先前构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞介导hPOT1基因过表达;秋水仙碱阻滞细胞周期于分裂中期,DAPI荧光染色分析染色体端-端融合;Telom erase PCR-ELISA试剂盒检测端粒酶活性。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞5 d后,染色体端-端融合几率增加,对端粒酶活性无明显影响。结论提示hPOT1蛋白可导致染色体端-端融合。
- 侯敢黄迪南姜英华杨明
- 关键词：人端粒保护蛋白HELA细胞端粒酶
- siRNA介导的hPOT1基因表达抑制对HeLa细胞凋亡的影响被引量：3
- 2005年
- 目的 应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异地抑制端粒保护蛋白hPOT1基因在HeLa细胞中的表达,并观察其对细胞凋亡的影响。方法利用先前构建的含hPOT1基因特异性序列(hsRNA)的3种重组siRNA表达质粒,由脂质体介导转染HeLa细胞,以RT PCR和电泳迁移率变化分析法检测转染细胞中的hPOT1基因的表达抑制效果,并通过流式细胞术、Hoechst荧光染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 不同hPOT1特异性序列的3种的重组质粒转染HeLa细胞4 8h后,细胞中hPOT1基因mRNA和蛋白质表达水平降低,细胞凋亡水平明显增加。结论 siRNA表达载体介导的RNAi能有效地抑制HeLa细胞中hPOT1基因表达。
- 黄迪南姜英华梁爱玲
- 关键词：RNA干扰凋亡
